Relatório Transformação Gênica

Prévia do material em texto

UNIVERSIDADE POSITIVO
DANIELE MIKOVSKI
FELIPE TRICARICO
JHONATAN BASSO
LETICIA MALINOSKI
PAULO SILVEIRA
THIAGO BODEU
Transformação
CURITIBA
2016
UNIVERSIDADE POSITIVO
DANIELE MIKOVSKI
FELIPE TRICARICO
JHONATAN BASSO
LETICIA MALINOSKI
PAULO SILVEIRA
THIAGO BODEU
Transformação
 Relatório apresentado à disciplina de
 Biologia Molecular, do curso de graduação
de Eng.ª de Bioprocessos e Biotecnologia;
Professor Me. Matheus Severo.
CURITIBA
2016
Objetivos
 Incorporar molécula de DNA com resistência ao antibiótico canamicina em células competentes através de um processo denominado transformação por choque térmico.
Introdução
- Processos de transformação OBS: Comecei a falar sobre, faltam os processos de DNA de fago em células bacterianas (transfeccção), transformação de células não-bacterianas (células individuais – eletroporação e microinjeção - e organismos inteiros).
- Transformação por choque térmico OK
- Antibióticos utilizados como marca de seleção
 O processo de transformação pode ser entendido como a incorporação de qualquer molécula de DNA por qualquer tipo celular, ainda que essa incorporação não resulte em alterações detectáveis na célula transformada. Algumas células são capazes de incorporar essas moléculas de DNA com novas características mais facilmente e mais eficientemente, como exemplo bactérias do gênero Bacillus e Streptococcus, enquanto outras espécies, como Escherichia coli, conseguem captar apenas uma pequena quantidade do DNA. Por isso, essas espécies de células devem passar por um tratamento físico e/ou químico antes do processo de transformação, tornando-as mais eficientes no processo de incorporação do ácido nucleico. Quando as células passam por esse tratamento (geralmente incubação em uma solução de sal gelada, pois é um método fácil e barato) elas são ditas competentes. As células utilizadas na aula prática já estavam tratadas, logo já eram competentes e o processo de transformação já pode ser aplicado diretamente. Provavelmente esse tratamento com sal gelado é eficaz pois facilita a precipitação do material genético sobre a superfície externa das células tratadas, entretanto nessa etapa ainda não ocorre a incorporação pela célula, sendo necessário um tratamento através de choque térmico que será responsável por formar poros na membrana. Através desses poros, o DNA enfim conseguirá adentrar na célula. 
 O choque térmico é feito através de uma incubação em gelo por alguns minutos, seguido de um banho com elevação de temperatura para 42°C. Após o banho, as células ainda passam por mais uma breve incubação em gelo antes de serem incubadas sob agitação.
 
Métodos
- Como aplicamos a técnica na nossa prática
Resultados e Discussão
- Fotos das duas placas (com e sem DNA)
- Contagem do número de colônias
- Discussão dos resultados obtidos