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NP1 RESUMO TOXICOLOGIA Aula 2 – 12/08/2016 IDA = Ingestão diária aceitável LEO = Limite de exposição ocupacional LMR = Limite máximo de resíduo Xenobiótico = toxicante, agente tóxico Chumbo (Pb) = Dependendo das condições de exposição o chumbo age como agente tóxico, Hematotóxico. Mercúrio (Hg) = Dependendo da condições o mercúrio age como toxicante, Neurotóxico. A sopa pode ser um agente tóxico se ministrada por vias diferentes (Ex: Carótidas) A água pode ser um agente tóxico se ministrada por vias diferentes (Ex: Trato Respiratório). Ao mudar a via de administração, muda a toxicidade. Os medicamentos são considerados a maior via de intoxicação Veneno = Substancia química que em baixas doses pode provocar morte, proveniente de animais. Veneno = Substancia chamada de veneno antes de inocular Peçonha = A substancia é chamada de peçonha após a inoculação Toxina = Produzidas por sistemas biológicos Exemplo: Toxina botulínica (ubíquo, vai para todos os lugares), uma substancia de maior toxicidade produzida pela bactéria Clostridium Botulinum. A toxina faz o diafragma relaxar e não se contrair, causando morte por asfixia. Crianças com menos de um ano não podem se expor a mel. O Ph dos adultos esta em torno de 2 e o de uma criança em torno de 4. As crianças apresentam um quadro de acloridria gástrica, pois o Ph não é tão ácido. As abelhas se infectam com Clostridium Botulinum e levam ao favo de mel. Os adultos por possuírem Ph baixo, conseguem inibir a toxina botulínica, já as crianças não conseguem devido ao Ph baixo. Toxinas = Podem ser produzidas por bactérias e atuar sobre humanos. Aflotoxinas = Produzidas por fungos Microcistinas = Algumas espécies de algas produzem toxinas Toxinas das algas (MC-hRhR) As microcistinas ficam retidas em material plástico (Ex: Mortes em hospital após diálise. Equipamentos lavados com agua contaminada) A toxicidade é comparada do veneno de cobra Ocorre perda de sangue após a contaminação. TCDD = 2,3,7,8 tetraclorodibenzo-p-dioxina Poluente organoclorado altamente tóxico PVC = Contem átomos de Cloroe em altas temperaturas (porem menos de 800°C), podem liberar dioxina no ar. Exemplo: Copos descartáveis jogados em uma fogueira Exemplo: Usuários de craque que fazem o uso do mesmo em materiais plásticos. Dioxina não é uma toxina Drogas = Matéria prima de onde se extrai um ou mais fármacos. Exemplo: Cannabis Sativa é uma droga, já o Delta-9-THC é um fármaco extraído da Cannabis que quando interage com um organismo vivo, altera funções. Fármaco = Substancia com estrutura química definida que altera uma ou mais funções Exemplo: Cocaína, a partir da folha da coca é extraída o fármaco cocaína DROGA FÁRMACO Cana-de-açúcar Álcool Grãos de Café Cafeína Cannabis Delta-9-THC Folha da Coca Cocaína Antídoto = Se contrapõe (antagoniza) ao efeito de uma segunda substancia VENENO ANTÍDOTO Acetaminofeno (Paracetamol) – 4g/Dia N-acetilcisteína – 20 a 30ml Metanol, Etilenoglicol Etanol Monóxido de Carbono Oxigênio 1) Paracetamol = Necrose e dano hepático Recomendado 4g/Dia a cada 70kg e estar alimentado com proteínas N-acetilcísteina protege o fígado das enzimas ativadas pelo paracetamol PARACETAMOL C4P-450 SULFATASE N-ACETIL-P-BENZOQUINONAIMINA GLUTATIONA (Glicina, cisteína e ácido glutâmico) MERCAPTURATOS ELIMINADO PELA URINA ATRAVÉS DA HIDROSOLUBILIDADE Substância Exógena = Não faz parte do organismo Altera a estrutura da molécula e aumenta sua solubilidade para elimina-la do organismo. O organismo possui enzimas como Glutationa-S-Transferase que atua sobre o paracetamol, aumentando a hidrosulubilidade para que o mesmo seja eliminado do organismo. A necrose hepática ocorre com o aumento de paracetamol no organismo e de N-acetil-p-benzoquinonaimina. A N-acetilcisteína dispõe aminoácidos para que as enzimas transformem N-acetil-p-benzoquinonaimina em mercapturatos, eliminando pela urina e evitando a necrose hepática. 2) Metanol = Causa cegueira O etanol a 100%, puro e sem água, é um antídoto para o metanol Ação Tóxica: Anilina: HbFe²+O2 -> Oxihemoglobina Tecido HbFe³+ X O2 -> Hipóxia -> Anóxia Metahemoglobina -> Necrose Metemoglobina -> Morte Intoxicação = Manifestação dos efeitos tóxicos, consequência das alterações bioquímicas no organismo. Exemplo: Mercúrio (Hg) = Em Ninomata e Niigata, ocorreu intoxicação nas pessoas por lagos e peixes contaminados. (Peixe com 100.00 p.pm de Hg) Biomagnificação = Quanto maior o nóvel trófico, maior é o acúmulo da substancia. Gases dos nervos = SARIM, TABUN, VX Em guerras podem ser usadas mesmo que proibidas São praguicidas Armas químicas Fases da intoxicação = São 4 Fases na intoxicação EXPOSIÇÃO = Indica o Contato. Dividida em 1)Dose ou concentração, 2)Tempo ou frequência, 3)Via de administração, 4)Suscetibilidade individual e 5)Propriedades físico químicas. TOXICOCINÉTICA = 1)Absorção, 2)Biotransformação, 3)Distribuição, 4)Armazenamento e 5)Excreção. TOXICODINÂMICA CLÍNICA Dose = Quantidade de uma substancia administrada a um organismo Fernobarbital para evitar convulsão, 1 comprimido. Dez comprimidos podem levar a morte. Concentração = Quantidades a que os organismos vivos estão expostos. Quando a substancia química está presente na água ou no ar e o organismo se expõe a essa substancia química. Tempo ou frequência Exposição aguda = Elevar as doses ou concentração em curto prazo (rápido) Exposição Crônica = Baixas doses ou concentrações em longo prazo (demorado) Benzeno = Em exposição aguda pode causar síncope, depressão do SNC. Em exposição crônica pode causar leucemia mielóide aguda (alteração plaquetária da medula óssea) Substancias químicas lipossolúveis são reabsorvidas nos néfrons, por isso demora para ser absorvida no organismo. Quanto maior tempo de exposição, maior o risco de intoxicação. Danos Cumulativos / acumulativos = A substancia se junta com o que já esta acumulado por conta de uma excreção lenta e se acumula no organismo cada vez mais. Vitamina A = Lipossolúvel Vitamina C = Hidrossolúvel Aula 3 – 19/08/2016 Via de administração = Oral, retal, gástrica, uretral. (Exemplos para prova: Sopa, água, d-tubocuranina) Strychnos Toxifera (d-tubocuranina) = Um animal atingido por uma flecha morre. Um índio se alimenta da carne desse animal e não morre. Corrente Sanguínea X Trato digestório Pouco absorvida pelo trato digestório Muito absorvido pelo animal via corrente sanguínea Suscetibilidade individual: Idiossincrasia = Resposta anormal de um organismo a uma substancia química, determinada geneticamente. Curalisar, paralisar o driafragma para realizar cirurgias usando Succinilcolina A pessoa volta a respirar normalmente quando a Succinilcolina é hidrolisada pela Butirilcolinesterase. Essa enzima é encontrada em baixas quantidades no organismo, por isso a Succinilcolina é hidrolisada lentamente. Algumas pessoas produzem pouca Butirilcolinesterase, por isso pode demorar ate 5 horas para hidrolisar totalmente. A idiossincrasia é o fenômeno pelo qual o organismo reage a baixas doses de uma maneira exagerada. Essa resposta é determinada geneticamente, algumas pessoas hidrolisam a Succinilcolina mais rápido que outras. Exemplo: Picada de abelha. Propriedades Fisicoquimicas. Metal = Especiação – natureza física e química da substancia ESPECIAÇÃO NATUREZA FÍSICO QUÍMICA Pb° Sólido Inorgânico -> Hidrossolúvel (negligível p/ absorção) Pb Tetraetila Líquido Orgânico -> Lipossolúvel (muita absorção p/ pele) Toxicocinética = Movimentoda substancia química no organismo. Sem absorção, não ocorre intoxicação. Estuda a relação da disponibilidade química em função da biodisponibilidade. AAS (100mg) = Disponibilidade química (Dose) Captopril = Perda de 40% excretada pelo organismo, nem tudo é absorvido. Biodisponibilidade = O que fica na corrente sanguínea Grafico: O tempo influencia na absorção do fármaco podendo ser efetivo ou ate mesmo tóxico. Absorção = Cair no sangue, atravessar membranas Difusão através do lipídio = difusão passiva quando a substancia é lipossolúvel (sempre a favor do gradiente de concentração) Proteínas transportadoras = Transporte ativo com gasto de energia (ATP) - (pode ser contra o gradiente de concentração) Medicamentos são ácidos fracos ou bases fracas Ácidos = AAS (acido acetil salicílico), Fenobarbital, Fenitoína Anfóteros = (reage como ácido e como base) Diazepam Básico = Cocaína, Morfina, Anfetamínicos (Dietilpropiona) HA H+ + A- Molecular Iônica (dissociada) Apolar Polar Lipossolúvel Hidrossolúvel Difusão passiva Difusão Ativa Gasto de energia Passiva de saturação Lentamente transportada Fenobarbital: O estômago tem Ph =~ 2, o fenobarbital estará na forma molecular e atravessará a membrana por transporte passivo. O fenobarbital nos rins na forma molecular, será reabsorvido e ganhará novamente a corrente sanguínea, deprimindo o sistema central, causando uma parada respiratória. Será administrado soro fisiológico com bicarbonato de sódio por meio endovenoso, assim o fenobarbital será convertido para forma iônica onde ficará hidrossolúvel, e precisará de difusão ativa. Ele ganhará a bexiga e será excretado. Alcalinizar a urina através do sangue Se o exemplo fosse dado com um fármaco alcalino, o tratamento seria feito com ácido ascórbico (vitamina C) para ionizar o fármaco. PKa da substancia X Ph do Meio O PKa da substancia é igual ao Ph do meio em que a substancia está, 50% na forma molecular e 50% na forma iônica. Exemplo: Anilina 5 PKa Ácidos: PKa – Ph = Log (Não ionizada) Ionizada Bases: PKa – Ph = Log (Ionizada) (Não ionizada) Digestório = As microvilosidades faz com que as substancias sejam mais absorvidas Absorção pelo trato digestório Agua, alimentos contaminados, suicídio, dependentes químicos, medicamentos como principal via de administração e intoxicação em crianças. Fatores que influenciam na absorção: veículos ou excipientes, estado de vacuidade gástrica, ciclo êntero hepático, efeito de primeira passagem, interações. Exemplo: Criança com Pb°, a mãe da leite para a criança e o Pb° não é absorvido. Ca2++Pb° Exemplo: Criança com Pb Tetraetila (orgânico e lipossolúvel) a mãe dá leite integral para a criança contendo 3% de gordura. Aumenta a absorção e aumenta o risco de intoxicação. Pele = Importancia da pele na toxicologia 10% do peso do corpo é pele (60kg então 6kg é pele) Efeito local: corrosão, irritação Fatores relacionados ao toxicante que alteram a absorção: lipossolubilidade, grau de ionização, peso molecular ( baixo peso, probabilidade de maior absorção pela pele), volatilidade (fixa pouco na pele, pois evapora rápido. Baixo tempo de exposição. Ex: Mertiolate), viscosidade (muito tempo em contato com a pele). Trato respiratório = Alvéolos pulmonares (o craque leva de 8 a 10 segundos para atingir o SNC) Meio ocupacional = principal via de exposição no ambiente de trabalho Intoxicação fatal = Exemplo: o gás é um asfixiante simples, onde o gás entra o oxigênio sai. O gás de cozinha é inodoro, se acrescenta mercaptanas ricas em enxofre (S). para que seja identificado um vazamento de gás. Quando o toxicante está presente no ar se avalia a forma física do mesmo Sólido Líquido Material Particulado / Material Particulado Suspenso O Diâmetro aerodinâmico = Maior tamanho de uma partícula <100 um Partículas pequenas ficam mais tempo no ar. Maior tempo de exposição <10 um MP10 = Material particulado < 10um (Mede o ar) TAMANHO DA PARTÍCULA LOCAL DE RETENÇÃO RETENÇÃO Acima de 5um Nasofaríngea Limpeza, Espirro 2um a 1um Traqueobronquiolar Mucos e Cílios Abaixo de 1um Absorvido ou eliminado Macrófagos alveoláres Asbesto / Amianto = Fabrica de telhas. Possui tipos diferentes: Crisotila = Fibra resiliente, resistente. Fibra grande, não chega aos pulmões Anfibócios = As fibras se quebram em tamanhos menores e podem entrar nos pulmões. Os macrófagos fagocitam, mas não conseguem eliminar, gerando uma lesão tissular. O pulmão fica cheio de cicatriz, comprometendo a expansão dos pulmões e as trocas gasosas, levando a um enfisema pulmonar. Gás Vapor Avaliação da Hidrossolubilidade O carvão libera enxofre (S) e reage com Oxigenio (O2) = SO(x) gases hidrossolúveis O SO(x) óxido de enxofre, interage com a água dos olhos e nariz formando ácido sulfírico e sulfúrico nos olhos, fazendo os olhos arderem. Carvão = Enxofre (S) + Oxigenio (O2) SO(x) + água dos Olhos e nariz H2SO3 / H2SO4 (Ácido Sulfúrico e Sulfírico) Oxidos de Hidrogenio são gases hidrossolúveis e se solubilizam no filme aquoso dos olhos. Formam gases sulfírico e sulfúrico que atuam como irritantes locais do trato respiratório superior. NO(x) = óxidos de nitrogênio. Gases lipossolúveis. Ele entra e ganha o trato respiratório inferior, parênquima pulmonar, levando a um enfisema pulmonar. NO(x) H2O HN Chuva Ácida = H2SO4 (ácido sulfúrico) e HNO3 (ácido nitríco) Aula 4 – 26/08/2016 Biotransformação = transformações químicas que ocorrem na estrutura química do xenobiótico para excreta-lo rapidamente do organismo. Reações de fase 1 = Oxidação, redução, hidrólise. Fígado e outros órgãos biotransformam enzimas Enzimas citosólicas = ficam no sobrenadante. Enzimas microssomais = Se precipitam, pesadas, densas. Citocromo P450 (também chamado de oxidase de função mista) é a principal enzima do fígado. É uma enzima microssomal pois é densa, pesada. Reações de fase 2 = Conjuração de síntese. Aumento da polaridade da substancia em até 40%. Xenobióticos são catalisados enzimaticamente pelas sulfatases, fosfatases, glutationa s transferase, acido uritino, d-fosfato tigulomideo. Aula 5 – 02/09/2016 Toxicodinâmica = envolve os mecanismos de interação entre as moléculas do toxicante e os sítios de ação, específicos ou não dos órgãos, e o aparecimento de desequilíbrio homeostático. Enzima Citocromo A3 (oxidase) = catalisa a transferência de elétrons NACN (cianeto de sódio) + ácidos (H+) formava ácido cianídrico (HCN) HCN (ácido cianídrico) no organimo: HCN se liga a C.oxidase, a transferência de elétrons é bloqueada na cadeia de fosforilação oxidativa. Não é formado ATP com o citocromo inibido, fazendo com que o organismo da célula entre em colapso. Mitocôndria = para se obter energia o ADP é fosforilado recebendo elétrons. O organismo que se expõe ao ácido cianídrico tem o citocromo A3 bloqueado impedindo a fosforilação e formação de ATP, levando o organismo ao colapso. O HCN bloqueia a enzima Cit. A3 e os elétrons não são transferidos. A célula possui oxigênio, porem sem elétrons não ocorre a P-oxidação (fosforilação oxidativa). Trata-se a intoxicação administrando nitrito de sódio endovenoso (NaNO2) Nitritos são agentes metahemoglobinizantes, agindo na hemoglobina das hemácias transformando, metahemoglobinizando a partir do NaNO2 HbFe2+ -> HbFe3+ / MeHb Organismo após NaNO2 = A metahemoglobina remove o HCN que ataca e bloqueiaas células como defesa, formando o CNMeHb .Cianometahemoglobna (CNMeHb) após administração de NaNO2 O CNMeHb não se liga ao oxigênio porque a MeHb impede e ligada ao cianeto piora, por isso é necessário administrar tiossulfato de sódio que libera átomos de enxofre e forma tiocianato e metahemoglobina. Administrar tiossulfato de sódio endovenoso que doa grupamentos de enxofre para separar o composto CNMeHb e formar Tiocianato (SCN) + metahemoglobina (MeHb) facilitando o tratamento A Metahemoglobina é tratada administrando azul de metileno endovenoso (carreador exógeno de elétrons). Um processo chamado Diaforese II ( a partir da glicose durante a formação de NADPh o azul de metileno capta elétrons) Porem, o excesso de azul de metileno é Metahemoglobinizante Glicosídeos Cianogênicos = alimentos de certas famílias de espécies vegetais que em baixo Ph pode liberar ácido cianídrico. Maça, pêra, cereja, linamarina, amigdalina, mandioca amarga (brava, roxa). Exemplo: maça exposição crônica em baixa quantidade. Atua sobre algumas organelas, sem muitos problemas. Enzima tisulfato sulfotransferase (Rodanase) doa enxofre (S). Em uma exposição aguda não é importante. Em uma exposição crônica é muito importante. Tiocianato na tireoide: Atomos de iodo são incorporados aos hormônios tireoideanos para sua formação (T3 e T4, entre outros). O tiocianato impede a incorporação de iodo nos hormônios tireoideanos. A hipófise identifica pouco T3 e T4, aumenta o TSH no sangue que ativa uma maior produção de T3 e T4, que não pode ser concluída por causa do Tiocianato. Ocorre uma formação de Bócio. Outra forma de tratar a intoxicação por HCN é administrar Cobalamina que forma a Ciano cobalamina que também é conhecida como Vitamina B12. Toxicidade = refere-se à capacidade inerente e potencial de um xenobiótico exercer seu efeito deletério (prejudicial à saúde) DL50 = Administração. refere-se a dose capaz de levar a morte metade dos animais em condições laboratoriais definidas. Ex: 10mg/kg (p.c.) ratos, machos, via oral – 10 animais expostos, 5 morrem e 5 vivem. CL50 = Exposição. Concentração letal que leva a morte metade dos animais. Ex: 10 peixes expostos a chumbo – 5 morrem e 5 vivem. Comparar : DL50 – 10mg/kg – 5 morrem e 5 vivem DL50 – 100mg/kg – 5 morrem e 5 vivem A substancia administrada com 10mg/kg possui maior toxicidade pois com menor dose e mesma intensidade que a substancia 2 ele matou a mesma quantidade de animais. Toxicidade X DL50 = Grandezas inversamente proporcionais SUBSTANCIA DL50 (Ratos, machos, mg/kg) Etanol 10.000 mg – 10g/kg Nacl 4.000 mg – 4g/kg Nicotina 1 mg Toxina Botulínica 0,00001 mg (maior toxicidade e menor DL50) Risco = refere-se a probabilidade metemática derivada de dados estatísticos da ocorrência do dano. Toxicidade X exposição = risco varia em função da exposição Ex: d-tubocurarina (Menor DL50 e Maior toxicidade) – V.O E.V Ex: Toxina Botulínica (Menor DL50 e Maior toxicidade) – Se não houver contato não tem risco Interações Químicas: Efeito aditivo = Aquele em que o organismo se expõe a 2 ou mais substancias químicas diferentes concomitantemente, cujo somatório dos efeitos é igual a soma dos efeitos caso as substancias agissem independentemente. Ex: Etanol ( SNC) Benzadiazepínicos ( SNC) Depressão SNC 1 + 2 = 3 Efeito sinérgico = aquele em que duas ou mais diferentes substancias químicas atuam concomitantemente no organismo cujo somatório dos efeitos é superior a soma dos efeitos das substancias caso agissem independentemente. Ex: Tabaco Asbesto câncer de pulmão F4 + F6 = F20 Efeito de Potenciação = O efeito tem uma substancia que não causa dano, porem aumenta a intoxicação de uma substancia que já causaria sozinha algum dano como o Ccl4. Ex: Isopropanol CCl4 dano hepático 0 + 6 = 10 A dupla camada se desestrutura e libera mais radicais livres no MEC que sequestra outros prótons sucessivamente -> lipoperoxidação ou peroxidação lipídica. O álcool é produtor enzimático de CTP-450, aumentando a biotransformação e aumentando os radicais livres que como consequência levam ao dano hepático. Ex: CTP-450 -> Ccl4 = Cl3* -H+ = Sequestra prótons de carbono poli-insaturados da dupla camada fosfolipidica. Efeito antagônico = contrapõe o efeito N-acetil-p-benzoquinonaimina = N- acetilcistina F20 + F0 = F menor/igual 19 Avaliação de toxicidade: 1958 – 1962 : talidomida Focolemia (redução de MMII ou MMSS) Amelia (ausência de membros) Teratogenicidade (teratos = monstro) Fenda labial (abertura nos lábios) Lábio leporino (sem céu da boca) Ensaio de avaliação de toxicidade: Pré clínicos = animais Clínicos = humanos Pré Clínicos: Animais para testes Objetivos pré clínicos é de caracterizar o dano da toxicidade Exemplo: Benzeno “end points” (alterações) = atrofia cerebelar, mas quem causa é a contaminação por tolueno. Informações preliminares = 1º estudo Conhecer bem a estrutura química do xenobiótico Efeito do organismo Comportamento da substancia no meio ambiente Toxicidade aguda = determina DL50 Exposição única e altas doses de uma só vez Determinar DL50 com testes de dose fixa. Pegar uma dose de 500 mg/kg e administra em 10 animais se todos morressem é porque a dose é muito alta e é necessário baixar as doses para novos testes. Exemplo: 500mg/kg – 10 animais = todos morrem 50mg/kg – 10 animais = todos morrem 5mg/kg – 10 animais = todos morrem 0,5mg/kg – 10 animais = metade dos animais morrem 80% das DL50 variam entre 0,5 e 500mg/kg usando em media 40 animais Normalmente se utiliza 1 espécie de animais (geralmente ratos) O sexo é determinado Via de administração = preferencialmente oral. Exemplo: administrado no dia 1 do mês e o animal morre dia 20. A morte deve acontecer até 14 dias após a administração se não, não pode ser considerada toxicidade aguda. (7 a 14 dias) End point da toxicidade é a morte Exposição múltipla = dentro de 24 horas Aula 6 – 09/09/2016 1ª Parte da aula: Laboratório = extração, identificação e padronização de fármaco por CCD Cromatografia de camada delgada = Placa de 20cm por 20cm, vidro revestido com sícila (tipo de areia), não colocar dedo na sílica. Serve para separar substancias em uma mistura. CCI = Centro de controle de intoxicações.Qquando a pessoa tem intoxicação aguda. Identifica qual substancia química o organismo se expôs, a técnica é uma chapa que aquece 40°C, método mais rápido. A pessoa pode apresentar coma, convulsão, etc. IC = Instituto de criminalística. Morte por exposição a uma substancia química toxica. Mesmo procedimento da CCI para identificar a substancia, porem como o laudo pode sair em ate 30 dias é usado o método na capela. Funil de separação = exemplo: pegar um triturado de hepatócitos para separação. Outro exemplo: urina de um intoxicado + clorofórmio éter, extração liquido-liquido extraído pela forma orgânico primeiro. Instilar acido nítrico (HNO3), sulfúrico (H2SO4) ou clorídrico (Hcl). Ácido se desloca para a esquerda (forma molecular, apolar, lipossolúvel) Sistema bifásico heterogêneo: 1 organico inferior (ex: fenobarbital – ácido, apolar, molecular) 1 inorganico superior (ex: cocaína – alcalina, polar, iônica) Coletar fase orgânica no Becker Instilar NAOH para que o Ph fique entre 10 e 11: Cocaína fica na forma molecular e na forma iônica não terá mais substancia Éter deixa novamente bifásico para retirar o inferior Se o organismo se expõe emfármacos de caráter alcalino, estará no segundo Becker HPLC / CLAE (cromatografia líquida de alta eficiência) = envolve bombas com alta pressão então o processo de separação é mais rápido que CCD. CCD = realizado para realizar uma triagem, teste rápido. Porque epidemiologicamente a maior parte das intoxicações se dá por AAS, fenitoína, fenobarbital, cocaína, entre outras. Após a CCD, realizar uma técnica confirmatória. Placa ácida de CCD: Aplicar 40 vezes ácido salicílico no mesmo local com capilar. Aplicar 40 vezes cafeína no mesmo local com capilar. Placa alcalina de CCD: Aplicar 40 vezes cafeína no mesmo local com capilar. Aplicar 40 vezes nicotina no mesmo local com capilar. 2ªParte da aula: Determinação da salicilemia Colocar 5ml de trinder no tubo com amostra Colocar 5ml de trinder no tubo com branco Centrifugar por 5 minutos Ler no espectrofotômetro a 540nm Preparação dos calibradores: A solução padrão é salicilato Grupo 1: 1ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 2: 2ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 3: 3ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 4: 4ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 5: 5ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 6: 6ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 7: 7ml de solução padrão e completar até 100ml. Colocar 1 ml dessa mistura em um tubo e adicionar 5ml de trinder. Grupo 8: 1ml de H2O + 5ml de trinder em um tubo Amostra A usada se expôs ao solicilato e a amostra B usada não se expôs ao solicilato. Trinder: Contem Hcl, HgCl e Fe(NO3)3.9H2O O reagente de trinder é ácido e precipita a proteína (albumina) e deixa o salicilato livre no sangue para o identificarmos na corrente sanguínea. O mercúrio se liga a grupamentos sufidrilicos e precipita as proteínas Hg->SH O nitrato férrico ajuda na colorimetria. O ferro reage com hidroxila fenólica do salicilato gerando cor. Leituras: Neblização = azul arroxeada, chama de vela Todas as manchas se desprendem menos a do AAS. Ovoide vertical de cor alaranjada CCD = cor da mancha, forma da mancha e RF (d.analito / d. solvente) mede ponto central da mancha ate a marca do CCD. Salicilato = 200mg a 500mg - intoxicação e mais de 500mg – morte Curva de calibração com números validados para que quando tenha um “y” consiga achar um “x” na reta.
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