bacterio pratica - resumo

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Biossegurança 
NÃO 
Azulejos na parede e pisos no chão são errados por que microrganismos podem se acumular no rejunte. 
Nunca ter plantas onde bactérias e fungos podem se acumular. 
Nunca ter cortinas que dificultam a limpeza e ajuda a acumular microrganismos também. 
Nunca comer dentro do laboratório para evitar contaminação. 
Cabelos sempre presos para evitar acidentes. 
Evitar acumulo de objetos no laboratório, pois prejudica a mobilidade e aumenta o risco de acidentes. 
Evitar unhas grandes e pintadas, cordões, brincos longos 
Nunca cheirar materiais 
SIM 
Dar preferência a ambientes claros para melhor identificação de derramamento de produtos, por exemplo 
Ambientes espaçosos são melhores 
EPIs 
Descarte correto de material 
Sinalização de risco 
Local para armazenamento correto de materiais e reagente 
Vidrarias 
 
 Proveta Pipeta graduada Pipeta volumétrica Pipeta Pasteur 
Proveta, pipeta graduada e pipeta volumétrica, pipeta pasteur: para medir volumes 
 
 Lâminas Tubos de ensaio Placa de Petri Garrafa de Roux 
Lâmina: para observação microscópica 
Tubos de ensaio, placa de Pteri, garrafa de Roux e tubo de durhan: para manutenção dos microrganismos vivos em 
meios de cultura 
 
 Tubo de Durhan Erlenmeyer Becker Balão de vidro Bastão de vidro 
Erlenmeyer, Becker, balões de vidro, bastões de vidro: Para o preparo de meios de cultura, estocagem de reagentes 
 
 gral e pistilo 
Jarra de anaerobiose, jarra de microaerofilia: Para o cultivo de microrganismos anaeróbios 
Gral e pistilo: para uso geral, triturar material sólido 
 
 Kitasato Filtro de Vidro Bico de Bunsen Alça de Platina 
Kitasato, filtro de vidro: Para esterilização por filtração 
bico de bunsen: Flambagem da alçadeplatina, boca de frascos, etc 
alça de platina: Para semeadura de microrganismos 
 
Nutrição Bacteriana 
Meios de cultura 
consistência: 
-líquidos= caldo 
-sólidos=ágar (diferença entre sólido e semi solido é 
-semi sólido=Agar a concentração) 
Ágar-ágar= é em pó ou ramo. Agente solidificante. PF: 100°C e PS: 40°C 
Meio básico= quantidade mínimas de nutrientes para o crescimento de um microrganismo. Ex: Ágar simples 
Meio de enriquecimento= contém nutrientes que favorecerão o crescimento de tipos específicos de 
microrganismos. Exs: Ágar sangue, Caldo BHI 
Meio seletivo= contém substâncias que inibirão os microrganismos indesejáveis e/ou favorecem os de interesse. 
Exs: Ágar sal manitol vermelho de fenol, Ágar azida 
Meio diferencial= permite que o microrganismo produza estruturas ou reações que podem ser utilizados em sua 
diferenciação. Ex: Ágar EMB (Eosina-Azul de Metileno) 
 
 ágar sal manitol ágar MacConkey ágar EMB ágar sangue 
 
 caldo tetrationato caldo selenito-cistina meio de Stuart meio de Cary-Blair 
 
ESTERILIZAÇÃO: Eliminação total dos microrganismos de um determinado material ou ambiente. 
DESINFECÇÃO: Redução do número de microrganismos, principalmente patogênicos, presente em um material 
inanimado (não garante a eliminação de todos os mcgs, nem endosporos). 
ANTISSEPSIA: Redução do número de microrganismos, principalmente patogênicos, presente em um tecido vivo. 
ASSEPSIA: Conjunto de procedimentos necessários para impedir que um microrganismo penetre num local que não 
o contenha. 
Métodos físicos 
calor úmido= autoclave, tindalização, pasteurização e fervura 
calor seco= flambagem, forno Pasteur 
radiação= ionizante ou não ionizante 
frio= refrigeração, congelamento, liofilização 
dessecação 
pressão osmótica 
Autoclave: método mais eficiente e rápido. 120°C por 20min 
Tindalização: demorado e alteração do meio se houver esporos. 100° por 20 a 30 min 
Pasteurização: de leite e bebidas alcoólicas. Lenta (62,9°C por 30min), rápida (71,5°C por 15seg), UHT (144°C por 3-
5seg, seguido de resfriamento rápido). 
Fervura: 100°C de 10 a 30min 
Flambagem: alça de platina e boca das vidrarias no bico de Bunsen. 
Forno Pasteur: vidrarias vazias e metais. 160° a 180°C por 1-2h 
Radiação: ionizamte (raios gama e X), não ionizante (raios uv) 
Filtração: membrana filtrante 
Fatores que influenciam a efetividade dos tratamentos antimicrobianos: 
-número de microrganismos 
-influências ambientais 
-tempo de exposição 
-características microbianas 
Etapas do diagnóstico microbiano 
coleta  transporte  análise  pós-analise fase pré-analítica 
 fase analítica 
 fase pós analítica 
Amostras 
feridas superficiais= antissepsia da margem da ferida 
lesões exsudativas= pus de abscesso coletado com seringa estéril ou se estiver drenado com a ajuda de swab (meio 
tioglicolato de sódio ou BHI) 
secreção auricular= remover excesso de cerúmen por swab e salina esteril 
secreção ocular= limpeza de secreção na porção interna da pálpebra inferior 
sistema respiratório= -secreções da narina, limpeza com gaze estéril umidecida em soro fisiológico. Colher com 
 swab. Meio tioglicolato de sódio, BHI ou Cary Blair. Refrigerar por ate 48h. 
 -(para diagnóstico de doenças) órgão acometido e linfonodo regional, fragmento da lesão, 
 sem meio de cultura. Refrigerar por ate 48 
leite= coleta após a antissepsia da teta. Coletar 10ml de cada teta. Refrigerar até chegar ao laboratório. Incubar em 
estufa bacteriológica a 37°C/ 6-8h antes de a amostra ser inoculada nos meios de cultura. 
fezes= úmidas (frescas), para salmoneloses, colibaciloses e outras. Coleta direto do reto ou porção central do bolo 
fecal. Refrigerar por ate 48h. 
urina= inocular assim que coletar a partir da metade da miccção. Deixa a urina decantar e colher o fundo para 
semear. Deixar em temperatura ambiente por até 2h e em refrigeração por 24h. 
sangue= -sangue total: tubos a vácuo com anticoagulante, homogeneizar suavemente 
 -soro sanguíneo: tubo sem anticoagulante, manter o tubo inclinado, transferir o soro para um tubo de 
 rosca 
líquido cefalorraquidiano 
alimentos= lavar bem, usar luvas 
ambiente= água contaminada, amostra de solo 
 Isolamento e Identificação de Staphylococcus spp 
Plaqueamento= isolamento por estrias, contagem de células viáveis, semeadura em superfície, vazamento em placa. 
 
 esgotamento por estrias diluição seriada 
Morfologia= cor, tamanho, forma, elevação, bordas, consistência/ estrutura e superfície. 
 
Isolamento de Staphylococcus 
Ágar sangue: peptona, extrato de carne, NaCl, ágar-ágar e H₂O destilada + 5 a 10% de sangue de carneiro ou sangue 
+ citrato de sódio. Tem presença ou não de hemólise. 
peptona= principal fonte de nitrogênio 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
ágar-ágar= solidificar o meio 
H₂O= fonte de íons 
 
 sem presença de hemólise com presença de hemólise 
Ágar manitol vermelho de fenol: peptona, manitol, vermelho de fenol, NaCl, ágar-ágar e H₂O destilada. 
peptona= fonte de nitrogênio 
manitol= fonte de carbono e energia 
vermelho de fenol= indicador de pH 
ágar-ágar= solidificaro meio 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
H₂O= fonte de íons 
Princípio seletivo= alta concentraçãpo de NaCl 7,5% 
Princípio diferencial= fermentação de manitol tornando o meio ácido 
pH< 6,6 (amarelo) pH>8,0 (vermelho) pH neutro (laranja) 
 
Ágar Baird-Parker (BP): peptona de caseína, extrato de carne, extrato de levedura, piruvato de sódio, glicina, cloreto 
de lítio, ágar-ágar, emulsão de gema de ovo, telurito. 
peptona= fonte de nitrogênio 
extrato de levedura= fonte de vitamina do complexo B 
cloreto de lítio e telúrio= impede crescimento de contaminantes 
piruvato de sódio e glicina= favorece seletivamente o crescimento de Staphylococcus. 
ágar-ágar= solidifica o meio 
Princípio seletivo= cloreto de lítio e telúrio (inibição do crescimento de microrganismos contaminantes) 
Principio diferencial= emulsificação de gema de ovo (cor opaca e amarela do meio), evidenciação de lipólise e 
proteólise, formação de halos claros e anéis característicos 
Redução de telurito a telúrio= colônias negras 
 
Coloração de gram: esfregaço, secar ao ar , passar 3x na chama (pra fixar a bactéria), corar com cristal violeta, 
escorrer o corante e lavar com água corrente, cobrir com lugol, inclinar a lâmina e lavá-la com álcool por 30 seg, 
lavar em água, corar com fucsina, lavar em água e secar, 1 gota do óleo de imersão sofre o esfregaço e observar a 
lâmina com objetiva 100x. 
gram posivita= roxo gram negativa= vermelho 
lugol e cristal violeta= para fixar 
óleo de imersão= aumenta o índice de refração entre o objeto e a objetiva 
fucsina= funciona como contra corante (só se fixa nas gram -) 
 
Diferenciação entre gram + e gram – utilizando KOH 3% 
Gram negativa= a mistura permanece viscosa ou com formação de gel dentro de 5 a 60seg 
Gram positiva= nenhuma viscosidade é observada 
 
 gram – gram + 
Prova da catalase:verificar a presença da enzima catalase que decompõe H₂O₂ em água e O₂ distinguindo 
estafilococos (+) de estreptococos (-). Gotejar H₂O₂ sobre a colênia ou em tubos ou placas com cultura. Não utilizar 
meio contendo sangue. 
azida sódio= inibidor de catalase (isolar estreptococos) 
 
 
 + - 
Resistência a Bacitracina: disco de bacitracina 
Staphylococcus= resistentes, não formam halo 
Streptococcus= sensíveis, formam halos 
 
Identificação fenotípica 
1- prova de coagulase 
plasma de coelho ou sangue total 
Coagulase livre: em tubo (mais confiável, melhor visualização) 
Coagulase ligada: em lâmina 
 produz coagulase e eatafiloquinase (desmancha o coágulo, por isso não pode deixar de um dia para outro) 
controles: - da coagulação= sangue sem anticoagulante. Coágulo + soro 
 - do citrato= sangue com citrato sem bactéria. Não coagula. MAIS IMPORTANTE. Se coagular pode ter 
contaminantes que consomem citrato. O cálcio fica livre e coagula. 
 - sangue citratado + amostra padrão de S. aureus coagulase (+)= Coagula 
 - sangue citratado + amostra padrão de estafilococos coagulase (-)= Não coagula 
citrato= fonte de energia e carbono. 
 
2- Teste de Voges Proskauer (VP) 
tem KOH= alcalino 
forma acetoína e libera CO₂ 
aceitoína oxidada e convertida em um complexo vermelho sob ação catalítica do alfa-naftol e creatina 
leitura dos tubos= vermelho (+) e laranja (-) 
principal produto= acetoína (garante VP +) 
tampão= fosfato dipotássio 
glicose= fonte de energia e carbono. 
 
 
3- Fermentação de açúcares 
meio básico= peptona de caseína, NaCl e H₂O destilada. 
indicador de pH= -vermelho de fenol: pH < 6,0=amarelo pH > 8,0= vermelho 
 -púrpura de bromocresol: pH < 5,2=amarelo pH > 6,8=violeta 
açúcares= manose, maltose 
Tubo de Durhan 
 
 
 Resultado: (+) -Fermenta o açúcar (+)- fermenta o açúcar 
 (-) -Não fermenta o açúcar (-)- não fermenta o açúcar 
 Alcalino –utiliza a peptona 
API 
 
Isolamento e identificação de Streptococcus spp. 
Ágar sangue: triptona, peptona, extrato de levedura, NaCl, ágar-ágar e sangue de carneiro. Padrão hemólise. 
peptona= principal fonte de nitrogênio. 37°C/24-48h 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
ágar-ágar= solidificar o meio 
extrato de levedura= fonte de vitamina do complexo B 
 
 
 
Ágar azida sangue: triptose, extrato de carne, NaCl, ázida sódica, ágar-ágar e sangue de carneiro. 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
ágar-ágar= solidificar o meio 
azida sódica= inibidor gram negativos e de catalase(isolar estreptococos). Impede a reoxidação da forma ferrosa das 
enzimas respiratórias. 
placa de estrepto= amarelo=fermentou verde= não fermentou 
 
Ágar Casoy: peptona de caseína, peptona de farinha de soja, glicose, NaCl, fosfato dipotássico e H₂O deslilada. 
peptona= fonte de nitrogênio 
glicose= fonte de energia e carbono 
fosfato dipotassico= tampão 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
H₂O= fonte de íons 
 
Meio de Hitchens-Pike: Peptona de caseína, peptona de soja, NaCl, Citrato de sódio, Glicose, cistina, sulfito de sódio, 
azida sódica, cristal violeta, ágar-ágar e H2O destilada. 
peptona= fonte de nitrogênio 
glicose= fonte de energia e carbono 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
H₂O= fonte de íons 
ágar-ágar= solidifica o meio 
Sulfito e azida sódica= inibem gram - 
cristal violeta= inibe outros gram + 
Ágar BHI (infusão de cérebro e coração): Infusão de cérebro, infusão de coração, peptona de carne, peptona de 
caseína, NaCl, fosfato dibásico de sódio, dextrose, ágar-ágar e H2O destilada. 
peptona= fonte de nitrogênio 
fosfato= tampão 
NaCl= equilibrar a pressão osmótica 
H₂O= fonte de íons 
ágar-ágar= solidifica o meio 
 
 Streptococcus pyogenes Streptococcus sanguinis 
 
Coloração de Gram 
 
 
 
Sensibilidade a Bacitracina 
 
Produção de fator CAMP 
CAMP produzido por Streptococcus do grupo B aumenta a atividade hemolítica de S. aureus 
 
Hidrólise do Hipurato de sódio: 
leitura= (+): Forma preciptado permanente que persiste por 10min ou mais. S. agalactiae 
 (-): sobrenadante permanece claro, pela solubilização do precipitado. Se der – deixar mais dias (pelo menos 
 5) porque pode dar + ainda 
enzima= hipuricase 
produtos= acido benzoico (principal) e glicina 
Detecção de glicina 
leitura= (+) azul= S. agalactiae 
 
Prova de Bile Esculina: peptona, extrato de carne, bile de boi, esculina, citrato férrico e ágar-ágar. 
hidrólise de esculina forma glicose e esculetina. Forma complexo negro difusível. 
peptona= fonte de nitrogênio 
ágar-ágar= solidifica o meio 
 
Crescimento em meio hipertônico: diferencia grupo D 
37°/24h 
S. bovis (-) enterococcus (+) 
 
Leite com azul de metileno: indicador de redox. 37°/24h 
(+) viragem a partir de uma cor azul para branco 
( -) permanece azulado 
-azul em cima e branco em baixo= porque tem O₂ atmosférico no tubo e reage. Ação da desidrogenase sobre lactose 
na ausência de O₂ 
- todo azul é amostra patogênica (estrepto) 
 
 
 
Teste sorológico: por aglutinação 
 
Isolamento e Identificação de Bacilos Gram-Positivos 
Para coloração= com verde malaquita 
contra-corante= safranina (rosa) 
Isolamento= ágar sangue, ágar penicilina, ágar simples e ágar casoy 
Bacillus anthracis 
ágar sangue= colônias grandes, não hemolíticas e branco acinzentadas 
gram +catalase – 
 
B. cereus 
ágar sangue= colênias elevadas e irregulares, aspecto de vidro esmerilhado acinzentado ou esverdeado 
 
MYP (ágar manitol gema de ovo polimixina): Peptona de carne, extrato de carne, manitol, NaCl, vermelho de fenol, 
ágar, emulsão de gema de ovo, sulfato de polimixina B 
 B. cereus 
 
Testes bioquímicos (para confirmação) 
Motilidade (tem bacilos móveis no laboratório) 
meio de Edwards e Ewing: peptona, extrato de carne, NaCl, ágar-ágar. 
 
 
meio de SIM: peptona de caseína, peptona de carne, citrato férrico amoniacal, tiossulfato de sódio, ágar-ágar 
e s p a l h o u= móvel uma linha= imóvel 
preto= H₂S amarelo= sem H₂S 
anel rosa= indol + sem anel rosa= indol - 
 
 
Indol 
meio de SIM: a partir da peptona de caseína é formado o triptofano 
reativo de Kovacs na superfície do meio 
leitura= indol (+): anel vermelho/rosa indol (-): anel amarelo 
 
Hidrólise de ureia: peptona, Gli, NaCl, fosfato monopotássico, uréia2%, vermelho de fenol, ágar-ágar 
produtos: CO₂, água e amônia 
enzima= urease 
fosfato de monopotássio= tampão 
vermelho de fenol= indicador de Ph 
ágar-ágar= solidificar o meio 
leitura= (+) rosa a vermelho (hidróxido de amônia –alcalino) (-) amarelo/laranja (só amônia – ácido) 
 
Utilização do Citrato: Sulfato de magnésio, fosfato de amônio dihidrogenado, fosfato dipotássico, citrato de sódio, 
NaCl, azul de bromotimol, ágar-ágar 
sulfato de magnésio= fonte de magnésio 
citrato de sódio= fonte de energia e carbono 
fosfato de amônio= fonte de fósforo e nitrogênio 
azul de bromotimol= indicador de pH 
ágar-ágar= solidifica o meio 
Citrato + = azul (alcalino) Citrato - = verde (neutro) 
 
Hidrólise da gelatina: extrato de carne, peptona, gelatina. 
enzima= gelatinase 
produto= aminoácidos 
leitura= gelatinase += meio líquido gelatinase - = meio solidificado 
 
Redução de nitrato (NO₃): peptona, KNO₃, extrato de carne, água destilada 
KNO₃= fonte de nitrogênio 
enzima= nitrato redutase e nitrito redutase 
produtos= amônia N₂ 
Produção de nitrito: 1 gota do caldo nitratado, 1 gota do reativo de Griess Ilosway A, 1 gota do reativo de Griess 
Ilosway B 
leitura= nitrito +: precipitado vermelho nitrito -: incolor 
Produção de amônia: 1 gota do caldo nitratado, 1 gota do reativo de Nessler 
leitura= amônia +: precipitado marrom ou de cor amarela amônia -: incolor 
Presença de nitrato: 1 gota do caldo nitratado, acido sulfúrico, cristais de difenilamina 
leitura= nitrato +: precipitado azul nitrato -: incolor 
 pó de zinco, 1 gota de reativo de Griess Ilosway A e B e 1 gota da cultura 
leitura= nitrato (+): precipitado vermelho nitrato(-): incolor 
Bactéria NO₃ NO₂ NH₃ N₂ Interpretação 
A - + + - reduziu 
B + + + + reduziu 
C + - + - reduziu 
D + - - + reduziu 
E + - - - não reduziu 
F - + - - reduziu 
G - - - - assimilou 
 
Leite com azum de bromotimol: leite desnatado + azul de bromotimol 
pH acido, pH neutro, pH alcalino 
proteína= caseína 
açúcar= lactose 
azul de bromotimol= indicado de pH 
produtos= produz ácido e pode formar coágulo 
 -coágulo ácido= precipita caseína pH < 4,5 
 -coágulo enzimático= produz enzima semelhante a renina que tranforma caseína em paracaseína que 
com cálcio gera paracaseinato de cálcio e forma o coágulo. pH > 6,0 
produção de alcalinidade= tubo azul – digere caseína 
produção de gás= bolhas no leite ou rachaduras de gás no coágulo 
peptonização= enzimas proteolíticas que a bactéria produz digerem coágulo. O tubo fica com pouco ou nenhum 
coágulo. 
 
 
Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos (Antibiograma) 
Meio de Müeller Hinton: infusão de carne bovina, caseína enzimática hidrolisada, amido e ágar-ágar. 
 
Escala de McFarland 0,5= controle da turbidez 
 
 
semear com swab, 35°-37°C/24h. Difusão em Disco. 
interpretação: tabela (vamos ter que medir o halo – diâmetro – e olhar na tabela o tipo de bactéria). 
 
Interpretação: 
sensíveis= a infecção pode ser tratada na dosagem habitual 
intermediário= microrganismo pode ser inibido por > [ ] do Atb 
resistente= não ocorre a inibição pela [ ] obtida no local da infecção 
Microdiluição em caldo 
 
 
 
 
E-test 
 
Isolamento e Identificação de Enterobacteriaceae 
produz gás 
(+) amarelo: com gás, fermentou (-) verde: sem gás, não fermentou 
 
Ágar sangue de carneiro: colônias grandes, cinzas, hemolíticas ou não 
 
 Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella Proteus 
 
Meio EMB: eosina, azul de metileno, fosfato dipotássio, lactose, sacarose, peptona de gelatina e ágar-ágar. 
eosina= corante ácido: amarelo 
azul de metileno= corante básico: azul 
eosina+azul de metileno= forma o sal eosinato de azul de metileno. Deixa a Escherichia coli negra com brilho 
metálico verde. 
sal eosinato de azul de metileno= inibe gram + 
fosfato dipotássio= tampão 
lactose e sacarose= açícar 
peptona de gelatina= fonte de nitrogênio 
ágar-ágar= solidifica o meio 
Característica de crescimento 
fermentadores intensos= negra esverdeada com brilho metálico. Escherichia coli 
fermentadores fracos= colônias púrpuras. Klebsiella, Enterobacter e Serratia 
não fermentadores= incolores ou transparentes. Salmonella, Shigella e Proteus. 
 
TSI: peptona, extrato de carne, extrato de levedura, Gli (0,1%), Lac (1,0%), Sac (1,0%), vermelho de fenol, tiossulfato 
de sódio, citrato de ferro, NaCl e ágar-ágar. 
tiossulfato de sódio, citrato de ferro= produz H₂S 
produtos= H₂S e gás 
preto= H₂S 
amarelo= ácido (fermentou os 3 acúcares) 
vermelho= básico (ataca N, não fermenta açúcar) 
*proteus= vermelho e preto