38 - Métodos de Inoculação

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INOCULAÇÃO 
1. CONCEITO:
Inocular uma planta consite em por o inóculo (patógeno) em contato com o substrato (planta, parte vegetal, semente, etc.). Com o fim de provocar infecções artificialmente.
2. FINALIDADES:
1. Determinar se um organismo é parasita ou agente da doença em estudo.
2. Determinar o órgão ou órgãos suscetíveis da planta.
3. Determinar hospedeiros de fitopatógeno.
4. Estudar os diversos graus de suscetibilidade, resistência e imunidade das espécies e cultivares vegetais ao patógeno.
5. Estudar o mecanismo de infecção ou as maneiras de penetração do patógeno.
6. Estudar a influência dos fatores fisiológicos e anatômicos da planta nas relações hospedeiro-patógeno.
7. Estudar a influência dos fatores nutritivos (estrutura do terreno, acidez, alcalinidade e fertilidade do terreno) e climatéricos (temperatura e umidade do ar e solo, precipitações pluviais, etc.) que, aumentando ou diminuindo a resistência da planta ao ataque do patógeno ou favorecendo e prejudicando a virulência deste, influem na disseminação e gravidade das doenças.
8. Estudar a correlação entre os diferentes estádios do microorganismo entre sí, e os hospedeiros.
9. Estudar as condições sob as quais diferentes estágios do patógeno se desenvolvem.
10. Experimentar métodos de controle, ou a eficiência de fungicidas.
OBS: O substrato deve ser isento de doenças, isto é, sadio, e as inoculações devem ser feitas assépticamente.
3. INOCULAÇÃO DE PLANTAS:
 3.1. CONTATO
É feita quando o organismo é capaz de penetrar através da epiderme integra do vegetal. Ex: Helminthosporium sativum, Septoria nodorum e Xanthomonas campestris pv. campestris. 
MATERIAL
- Vasos com plantas
- Colônia de microorganismos
- Água destilada esterilizada
- Pulverizador
- Campânulas os sacos plásticos
- Etiquetas ou estacas
- Bequer
PROCEDIMENTO
- Preparo do inóculo: Fazer suspensão do organismo em água destilada esterilizada;
- Aspergir, com pulverizador as plantas;
- Realizar prova em branco (testemunha);
- Etiquetar;
- Incubar, durante 48 horas, em ambiente saturado de umidade com temperatura de + ou ­ 27SYMBOL 176 \f "Symbol"C.
 3.2. FERIDAS
É feita quando o organismo não é capaz de penetrar através da epiderme íntegra do vegetal. Ex: Colletotrichum sp. e Fusicoccum amigdaly.
MATERIAL
- Vasos com plantas
- Colônias de microorganismos
- Água destilada esterilizada
- Bisturi
- Hipoclorito de sódio 1 %
- Algodão
- Sacos Plásticos
- Campânulas
- Cordão
- Etiquetas ou estacas
- Espátulas de metal
PROCEDIMENTO
- Desinfestar os ramos que serão inoculados com mecha de algodão molhada em hipoclorito de sódio;
- Imediatamente lavá-los com água destilada esterilizada a fim de eliminar os resíduos de desinfetante;
- Com bisturi (flambado), realizar incisões em forma de T ou I, levantando levemente a casca dos ramos ou troncos;
- Depositar em cada incisão fragmentos de inóculo em bruto ( meio de cultura + patógeno), com auxílio de uma espátula de metal;
- Cobrí-los com plásticos, a fim de promover a incubação do patógeno, durante 72 horas;
- Realizar prova em branco (testemunha);
- Etiquetar cada incisão inoculada.
4. INOCULAÇÃO EM SEMENTES:
MATERIAL
- Sementes sadias
- Colônia de microorganismos
- Água destilada esterilizada
- Hipoclorito de sódio 2 %
- Bequer
- Pedaço de pano
- Funil
- Papel de filtro
- Etiquetas ou sacos plásticos
- Vasos com solo esterilizado
PROCEDIMENTO
- Desinfestar as sementes sadias com hipoclorito de sódio durante 30 a 60". Após lavar com água destilada esterilizada;
- Preparo do Inóculo: Fazer suspensão do organismo em água destilada esterilizada;
- Mergulhar as sementes na suspensão do inóculo durante 5 - 10 minutos;
- Após despejar as sementes mais a suspensão de inóculo, no funil com papel de filtro. Deixar escorrer a suspensão;
- Abrir o papel de filtro e espalhar as sementes. deixar secar;
- realizar prova em branco (testemunha);
- Semear em solo esterilizado;
- Etiquetar;
- Incubar.
5. INFESTAÇÃO DO SOLO:
MATERIAL
- Vasos com solo esterilizado
- Colônias de microorganismos
- Água destilada esterilizada
- Pano
- Bequer
- Sementes sadias
- Etiquetas
PROCEDIMENTO
- Preparo do inóculo: Preparar uma suspensão do patógeno mais meio de cultura em água destilada esterilizada;
- Regar copiosamente o solo com a suspensão do inóculo;
- Realizar prova em branco (testemunha);
- Etiquetar;
- Incubar em local apropriado contendo umidade e temperatura de mais ou menos 25SYMBOL 176 \f "Symbol"C;
- Semear sementes sadias desinfestadas.