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* Diagnóstico Laboratorial das micoses Profa Dra Angélica Zaninelli Schreiber Departamento de Patologia Clínica FCM-UNICAMP Laboratório de Microbiologia-HC-UNICAMP * Micoses Sistêmicas Patógenos respiratórios primários Agentes de micoses endêmicas Agentes de infecções fúngicas oportunistas * Padrões comuns das doenças causadas por patógenos fúngicos respiratórios * Testes utilizados para o diagnóstico direto de micoses pulmonares/sistemicas Diagnóstico Direto – pesquisa do agente Exame micológico - Exame direto - Cultivo (diferentes materiais clínicos, hemocultura) Detecção de antígenos - Prova do látex - Elisa GM e B D glucana Detecção de DNA fúngico: PCR Exame Histopatológico * Testes utilizados para o diagnóstico indireto de micoses pulmonares/sistemicas Diagnóstico Indireto – pesquisa da resposta do hospedeiro Exames de imagem R-X TC Pesquisa de anticorpos Testes intradérmicos * (sem valor diagnóstico) Imunodifusão Elisa Exame histopatológico HE * Achado no paciente (37° C) após inalação dos conídios Forma encontrada no ambiente a 25°C Paracoccidioidomicose Paracoccidioides species complex P.brasiliensis (linhagens filogenéticas S1, PS2 e PS3) P.lutzii (Pb01-like) Phylogenetic analysis reveals a high level of speciation in the Paracoccidioides genus. Teixeira MM, Theodoro RC, de Carvalho MJ, Fernandes L, Paes HC, Hahn RC, Mendoza L, Bagagli E, San-Blas G, Felipe MS. 2009 Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília, Brasília, DF, Brazil. * Paracoccidioidomicose Manifestações clínicas Paracoccidioidomicose infecção Paracoccidioidomicose doença Paracoccidioidomicose associada à imunossupressão MATERIAL CLÍNICO PARA DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO - escarro, derrame pleural, punção de gânglio Bx pele/mucosa * Paracoccidioidomicose Diagnóstico laboratorial Exame micológico direto A confirmação diagnóstica exige a visualização e o reconhecimento do agente * Paracoccidioides brasiliensis Culturas Micro Macro * Paracoccidioidomicose Diagnóstico laboratorial Exame histopatológico * TB + PBmicose * Paracoccidiodomicose Paracoccidioides brasiliensis Diagnóstico laboratorial raspado de lesão, escarro, derrame pleural, punção de gânglio Coleta Tratamento prévio Auxiliar no exame direto negativo Valor diagnóstico Microbiota Tratamento prévio * Paracoccidiodomicose Diagnóstico laboratorial Sorologia Imunodifusão dupla - Pesq. de AC no soro - Pesq. de Ac no LCR - Confirmação diagnóstica - Acompanhamento terapêutico Outros métodos: CIEF, IFI, ELISA, Western-Blot * MHSL Blotta * * * Avaliação da Imunidade humoral na PCM * Exames sorológicos Sensibilidade: 85-100% Correlação: título x gravidade da forma clínica Falso - : lesões localizadas e AIDS Falso +: histoplasmose e aspergilose. * Co-morbidades Tuberculose: 5-10% Histoplasmose clássica e criptococose * Achado no paciente (37° C) após inalação dos conídios Forma encontrada no ambiente a 25°C Histoplasmose Histoplasma capsulatum * Histoplasmose Manifestações clínicas Histoplasmose-infecção Assintomática Infecção pulmonar aguda Histoplasmose doença Pulmonar crônica (adulto) Multifocal crônica (adulto) Disseminada aguda (juvenil) Disseminada oportunística MATERIAL CLÍNICO PARA DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO biópsia, aspirado, lavado brônquico, punção de medula (amostra de sangue) * Histoplasmose Diagnóstico laboratorial Exame direto * Sangue /medula Tecido Histoplasmose Diagnóstico laboratorial Exame direto - Corado * Histoplasma capsulatum Culturas Micro Macro * Histoplasmose + Criptococose * Histoplasmose Histoplasma capsulatum Diagnóstico laboratorial biópsia, aspirado, lavado brônquico, amostra de sangue ou punção de medula Não de aplica Valor presuntivo Dificuldade de visualização Coloração Valor diagnóstico Valor diagnóstico No de microrganis-mos Microbiota * Histoplasmose Diagnóstico laboratorial Sorologia Fixação de complemento Contraimunoeletroforese Imunodifusão em gel Diagnóstico Acompanhamento terapêutico Inquérito epidemiológico Histoplasmina Pesquisa de Ag X Ac Urina X Soro * Aglutinação em látex: anticorpos * Pacientes imunocomprometidos Fatores predisponentes: Imunossupressão Transplantes Fatores locais. * Achado no paciente (37° C) após inalação dos conídios Forma encontrada no ambiente a 25°C Criptococcose Complexo C.neoformans/C.gatti Cryptoccocus neoformans (A, D e AD) C.neoformans var. grubii C.neoformans var. neoformans Cryptococcus gattii (B e C) * Desenho esquemático do ciclo biológico de Cryptococcus spp. mostrando as interações com o meio ambiente e o hospedeiro (Lin e Heitman, 2006). * Criptococose Manifestações clínicas Infecção pulmonar subclínica Complexo primário (Tb, Pb) Infecção do cérebro e das meninges Disseminação hematogênica Comprometimento ósseo Infecção prostática * Criptococose Diagnóstico laboratorial Exame direto Cultura + 89% pac. não HIV + 95-100% pac. HIV * Cn sor A * * Criptococcose Cryptococcus neoformans Diagnóstico laboratorial Líquor, medula/ sangue, gânglio Escarro Valor diagnóstico Valor presuntivo - Preparação - No de microrg. Dificuldade de visualização Confirma identificação Exame direto neg. Valor Diagnóstico relativo Microbiota Tratamento Preparação * urina * Cryptococcus neoformans Diagnóstico laboratorial Sorologia Aglutinação em látex - Pesq. de Ag no soro - Pesq. de Ag no LCR - Confirmação diagnóstica - Acompanhamento terapêutico Outros métodos: ELISA (Ag, Ac) S=95% E=98% Falso + : fator reumatóide * CRYPTO LÁTEX O teste sorológico para o diagnóstico da criptococose é sensível, específico, e permite um diagnóstico rápido e seguro para triagem ou titulação partículas de látex, recobertas com imunoglobulinas hiperimunes específicas, são misturadas com diluições de amostra do paciente, que pode ser líquor, soro ou urina. Uma diluição 1:4 é altamente sugestiva de infecção criptocócica. * Figure 1. Cryptococcal Lateral Flow Assay. Panel A: Schematic showing operation of lateral flow immunochromatographic assay for the detection of cryptococcal antigen. LFA is constructed from monoclonal antibodies specific for cryptococcal antigen. Panel B: Images of positive and negative LFA. (Adapted from Kozel TR and Bauman SK, Expert Opinion on Medical Diagnostics May 2012; Vol. 6, No. 3: 245–251). * Aspergillus spp Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus flavus Aspergillus terreus * Padrões de doenças causadas por espécies de Aspergillus * * Critérios para se definir um quadro pneumônico de aspergilose pulmonar Aspergilose definitiva diagnóstico histológico após biópsia pulmonar Aspergilose altamente provável aparência radiológica sugestiva em hospedeiro predisposto com um mínimo de duas culturas de escarro ou cultura positiva provenientes do lavado pulmonar brônquico Aspergilose provável clínica e radiografia sugestiva e culturas negativas para infecção fúngica * * Aspergilose/Aspergiloma Aspergillus spp Diagnóstico laboratorial Exame direto (escarro) Cultura * Aspergilose Diagnóstico laboratorial Exame histopatológico * Aspergiloma - escarro - biópsia Contaminação Valor Presuntivo (pres. de hifas) Contaminação - escarro - biópsia Contaminação Isol. e ident. Valor Presuntivo (pres. de hifas) Contaminação Colonização Aspergilose PI Diagnóstico laboratorial * Aspergiloma / Aspergilose PI Diagnóstico laboratorial Sorologia Imunodifusãoradial - Pesq. de Ac no soro - Titulação em 2 amostras colhidas com intervalo de 3 semanas - Confirmação diagnóstica - Acompanhamento terapêutico Aspergiloses não invasivas Aspergiloses invasivas - Pesq. Ag circulante Métodos: ELISA, WB, PCR-RT * * Pneumocistose Pneumocistys carinii (P.jiroveci) Manifestações clínicas Pneumopatia associada a febre e outros sinais como dispnéia, taquipnéia, tosse seca e raramente derrame pleural - Adultos e cças (HIV+) * Pneumocistose Diagnóstico Laboratorial Exame direto corado Imunofluorescência * 1) P. jiroveci : com frequência (24,4%), em doentes imunocompetentes com patologia pulmonar; 2) esta população pode ter papel importante na transmissão e na circulação de P. jiroveci, na comunidade; 3) os indivíduos que estão sob a ação de corticosteróides têm maior probabilidade de apresentarem P. jiroveci no pulmão (18%) do que os que não estão sob o efeito deste imunossupressor (12%); 4) P. jiroveci parece ser pouco frequente na população adulta saudável (existência de cargas parasitárias muito baixas ou difíceis de detectar, ou ainda devido ao tipo de amostras que foram utilizadas). * Pneumocistose Pneumocystis carinii Diagnóstico laboratorial lavado broncoalveolar, aspirado transtraqueal, escovado brônquico, biópsia, escarro (expectorado ou induzido Coleta Tratamento (SMX-TMP) - Forma do microganismo x metodologia Não se aplica Valor diagnóstico * * Table 1. Available Beta-D-Glucan Assays * * * DNA Microarray * PCR em Tempo Real Detecção quantitativa e identificação de espécies de patógenos virais e fúngicos. (A). Microscopia de luz de Aspergillus niger; (C). Técnica de PCR em tempo real para detecção quantitativa de fungos ou traços virais em amostras clínicas * Real Time turbidimeter * Tuberculose Critptococose Aspergilose Pneumocistose Infecções oportunistas * * *
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