Prova Prática de micro

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Prova Prática 
Microbiologia
Bactérias
Coloração de Gram
Coloração que dá cor a maioria dos cocos e bacilos.
Por que GRAM NEGATIVO e POSTIVO?
 Designado desta maneira devido a composição da membrana de algumas bactérias. 
GRAM POSITIVOS – várias camadas de peptidoglicanos que se coram facilmente com o cristal violeta. A membrana é bastante espessa, então em contato com o álcool x acetona não vai retirar boa parte da cor roxa, pois a membrana é relativamente impermeável.
GRAM NEGATIVOS – membrana composta de algumas camadas de peptidoglicanos, porém com uma camada dupla de fosfolipídeos externamente. Em contato com o álcool x acetona desorganiza o lipídeo fazendo com que a cor roxa do cristal violeta seja removida tornando-a incolor. Que com a adição de fucsina , ficará com a cor vermelha ou rosa. 
Cocos Gram Positivos
Staphylococcus
 Streptococcus
Cocos Gram Negativos 
Bacilos Gram +
Clostridium tetani
Bacilos Gram - 
Brucella abortus
Coloração De Gram
Objetivo: Diferenciação de bactérias em Gram + e Gram – e análise da morfologia bacteriana.
Técnica-Esfregaço :
1º) 1 gota de água destilada
2º) Coloca uma porção de colônia bacteriana
3º) Mistura
4º) Homogeniza
5º) Seca a lâmina
Técnica-Coloração
Cobrir com Cristal Violeta (1 min.)
Lavar com filete de água corrente
Aplicar Lugol (1 min.) - fixador
Lavar com um filete de água corrente
Aplicar álcool cetona e já lavar com água (diferenciador)
Cobrir com fucsina diluída (1 min.)
Lavar com um filete de água corrente
Secar, colocar uma gota de óleo bem no meio da lâmina e olhar na objetiva de 100x
Coloração de Ziehl Neelsen
Coloração usada para corar a parede celular de bactérias que tenham ácidos micólicos na sua constituição, são designadas bactérias álcool-ácido resistentes.
 Mycobacterium bovis
Técnica-Esfregaço :
1º) 1 gota de água destilada
2º) Coloca uma porção de colônia bacteriana
3º) Mistura
4º) Homogeniza
5º) Seca a lâmina
Técnica-Coloração :
Cobrir com Fucsina e aquecer emitindo vapores (5 min.)
Lavar em filete de água
Cobrir com azul de metileno (1 min.)
Lavar em filete de água
Secar e olhar em imersão.
Coloração de Wirtz- Conklin 
Utilizada para corar esporos (endosporos) de bactérias.
Técnica-Esfregaço :
1º) 1 gota de água destilada
2º) Coloca uma porção de colônia 
3º) Mistura
4º) Homogeniza
5º) Seca a lâmina
Técnica-Coloração
Cobrir o esfregaço com Verde Malaquita, aquecendo a lâmina até emissão de vapores (3 min.).
Lavar em filete de água
Cobrir esfregaço com Fucsina diluída (1 min.)
Lavar em filete de água.
Secar e analisar em imersão ao microscópio.
Método Fontana Triboundeaux 
Coloração de bactérias espiraladas ou espiroquetas.
Leptospira interrogans
Técnica-Esfregaço :
1º) 1 gota de água destilada
2º) Coloca uma porção de colônia 
3º) Mistura
4º) Homogeniza
5º) Seca a lâmina
Técnica-Coloração :
Colocar solução fixadora (AC. Acético + formalina) (1 min.)
Lavar em filete de água
Cobrir com solução mordente (AC. Tânico 0,5) e aquecer emitindo vapores
Lavar em filete de água
Cobrir com solução de prata (solução impregnadora) e aquecer emitindo vapores (1 min.)
Lavar em filete de água
Secar e olhar em imersão
Bactérias Isoladas no Leite
ÁGAR SANGUE
Características da colônia: tamanho, cor, aspecto
Presença de hemólise (descoloração no meio sangue ao redor das colônias)
Gram: cocos gram positivos (Staphylococcus e Streptococcus)
MEIO SELETIVO CHAPMAN
É seletivo para Staphylococcus. Tem manitol que é um açúcar. Esse açúcar é utilizado pela bactéria, onde a mesma produz um ácido deixando o agar que, em início se apresentava na cor vermelha, com a cor amarela. As espécies que crescem e fermentam manitol indica q é um Staphylococcus patogênico coagulase +
Prova da Catalase: A enzima catalase desdobra o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio (borbulhar  positivo); meio de Agar Sangue pode dar falsos positivos; culturas com mais de 24h podem dar falsos negativos;
Prova da Coagulase: A pode ser feito em lâmina (10-15segundos) ou em tubo (4h); a Coagulase atua sobre o fibrinogênio transformando-o em fibrina, logo caso se verifique aglutinação o teste é positivo (Staphylococcus Aureus); só válido para estirpes que não apresente autoaglutinação.
Antibiograma
Têm por finalidade testar a sensibilidade das bactérias aos antimicrobianos.
Técnica de diluição: Determina a concentração inibitória mínima (MIC), aos fármacos. Menor concentração em q se pode utilizar medicamento e ele pode inibir o microorganismo.
[ ] constante da bactéria + [ ]variável do fármaco
Teste de difusão de Kirby- Bower:
Suspensão bacteriana na escala 0,5 de Macfarland (10 na 8 bactéria/ml)
Molhar o suab na suspensão e passá-lo na superfície do Agar (Mueller- Hinton)
Distribuir os discos na superfície do Agar (2 cm de distância)
Encubar 24-48 horas a 37 graus.
Observar os alôs de inibição e medir o tamanho dos halos. Se a bactéria for sensível irá formar os halos. E comparar com a tabela padrão.
TÉCNICA :
Suspensão bacteriana: Pegar um alçado da colônia e desmanchar na agua até obter suspensão que tem q estar na turbidez da escala 0,5
Molhar o swab na suspensão e passá-lo na superfície do meio de cultura Agar (Mueller- Hinton)
Distribuir os discos na superfície do meio de cultura - Agar (2 cm de distância)
Encubar 24-48 horas a 37 graus.
Controle de Microorganismos 
Degermação: Lavar as mãos com sabão (reduz a variabilidade de bactérias).
Antissepsia: Com álcool,método químico (reduz o número de bactérias).
Método Físico: Colocar nos tubos, com a pipeta uma suspensão de esporos e ferver (5, 10,15 min.) e auto-clavar (121 Graus a 1atm.)
Fungos
Fungos Filamentosos
Fusarium – macroconídeos externos
Microsporum gypseum
Microsporum canis
Sporotrix-microconídeos externos
Aspergillus – cabeça aspergilar
 microconídeos externos
 Zygomiceto
Microconídeos internos
Fungo Leveduriforme :
Criptococcus
 Bons estudos gente !
 
 Desculpem algum erro !
 Bjs