roteiro de estudo deterinaçao do teor de lactose

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DETERMINAÇÃO DO TEOR DE LACTOSE NO LEITE
INTRODUÇÃO 
O leite é uma combinação de diversos elementos sólidos em água. Os elementos sólidos representam aproximadamente 12 a 13% do leite e a água, aproximadamente 87%. Os principais elementos sólidos do leite são lipídios (gordura), carboidratos, proteínas, sais minerais e vitaminas. Esses elementos, suas distribuições e interações são determinantes para a estrutura, propriedades funcionais e aptidão do leite para processamento. As micelas de caseína e os glóbulos de gordura são responsáveis pela maior parte das características físicas (estrutura e cor) encontradas nos produtos lácteos. O principal carboidrato do leite é a lactose. É produzida pelas células epiteliais da glândula mamária e é a principal fonte de energia dos recém-nascidos. Além da lactose, podem ser encontrados no leite outros carboidratos, como a glicose e a galactose, mas em pequenas quantidades.
A lactose compreende aproximadamente 52% dos sólidos totais do leite desnatado e 70% dos sólidos encontrados no soro do leite. Controla o volume de leite produzido, atraindo a água do sangue para equilibrar a pressão osmótica na glândula mamária. A quantidade de água do leite e, consequentemente, o volume de leite produzido pela vaca, depende da quantidade de lactose secretada na glândula mamária. A concentração de lactose no leite é de aproximadamente 5% (4,7 a 5,2%). É um dos elementos mais estáveis do leite, isto é, menos sujeito a variações. 
OBJETIVO – determinação da concentração de lactose em amostras de leite. 
METODOLOGIA
CONSTRUÇÃO DA CURVA PADRÃO. 
Numere tubos de ensaio de acordo com o indicado na tabela. Faça as adições de acordo com a tabela.
	TUBO
	ÁGUA
(mL)
	Lactose
(mL)
	[lactose]
g/mL
	DNS
(mL)
	
BMF
5 min
	ÁGUA
(mL)
	Absorbância
 = 535 nm
	0
	1,0
	0,0
	
	0,5
	
	1,5
	
	1
	0,9
	0,1
	
	0,5
	
	1,5
	
	2
	0,8
	0,2
	
	0,5
	
	1,5
	
	3
	0,7
	0,3
	
	0,5
	
	1,5
	
	4
	0,6
	0,4
	
	0,5
	
	1,5
	
	5
	0,5
	0,4
	
	0,5
	
	1,5
	
BMF - banho Maria fervente 
Padrão de lactose: 
Dissolver 1,00 g de lactose pura em 1 litro de água. Esta solução conterá 1 mg/ml.
Fazer leitura em espectrofotômetro em 535nm.
2. DETERMINAÇÃO DO TEOR DE LACTOSE NO LEITE 
PREPARO DAS AMOSTRAS DE LEITE
Cada grupo receberá 2 amostras de leite: uma armazenada em geladeira e outra mantida à temperatura ambiente.
a) Transferir 2,0 mL (com pipeta volumétrica) da amostra de leite para balão volumétrico de 100 mL e completar o volume com água destilada. Agitar bem.
b) Transferir 1,0 mL (com pipeta volumétrica) da solução diluída de leite para tubo de centrífuga. Efetuar a remoção dos interferentes pela adição de 1,0 mL de ZnS04 a 5% (agitar) e acrescentar 1,0 mL de hidróxido de bário 0,3mol/L. Agitar. Completar a 10 mL adicionado 7 mL de água destilada. Agitar. Centrifugar a 300 xg durante 5 minutos (3.000 rpm).
DETERMINAÇÃO. 
Determinar os teores de lactose nas duas amostras de leite, preparando as amostras como segue na tabela abaixo:
	AMOSTRAS 
	Volume(mL)
	DNS(mL)
	BMF ( min)
	ÁGUA (mL)
	Absorbância
	Leite Ambiente
	1.0
	0,5
	5
	1,5 mL
	
	Leite Geladeira
	1.0
	0,5
	5
	1,5 mL
	
RESULTADOS
Construir um gráfico com as concentrações de lactose nas abcissas (g de lactose por tubo) e as leituras de Absorbância dos padrões nas ordenadas. Obtenha a equação da reta e calcule, a partir dela, a concentração de lactose nas amostras de leite. Expressar os resultados em g/100 mL de leite, observar que a diluição da amostra de leite nos cálculos. 
 DISCUSSÃO 
a. Discutir os resultados obtidos de acordo com a concentração de lactose encontrada nas amostras de leite mantidas em temperatura ambiente e refrigerada. Os resultados obtidos foram os esperados?
b. Qual ou quais as razões para que os resultados da concentração de lactose no leite mantido na temperatura ambiente e refrigerada não são iguais? Como a temperatura afeta a qualidade do leite?