Quimioterápicos: Conceito e Ação

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Quimioterápicos: conceito e 
mecanismo de ação 
Fernanda Abreu 
fernandaaabreu@micro.ufrj.br 
Farmácia Noturno 2013 
Quimioterápicos 
• Controle do crescimento microbiano pode ser 
feito por: 
– Agentes físicos: calor, radiação, filtração. 
– Agentes químicos: desinfetantes e antissépticos 
 
Agentes físicos são muito drásticos e os químicos 
muito tóxicos e por isso utilizados fora do corpo 
(uso externo). 
 
Quimioterápicos 
• Controle do crescimento microbiano pode ser 
feito por: 
- Compostos químicos de uso interno: 
quimioterápicos 
- Definição de quimioterápico: compostos 
químicos, utilizados no tratamento de doenças 
causadas por agentes biológicos. 
- Agente antimicrobiano: agente químico que mata 
ou inibe o crescimento de micro-organismos. 
 
 
Quimioterápicos 
• Classificação dos agentes antimicrobianos: 
 
- Quanto à Origem: 
- Produzido por alguns micro-organismos: antibióticos. 
- Produtos naturais, sintéticos ou semi-sintéticos: 
químicos. 
 
 
Agentes Antimicrobianos 
Histórico: 
 
1860- Joseph Lister- fenol em instrumentação cirúrgica 
1909- Paul Ehrlich- salvarsan (composto arsênico)-sífilis 
1929- Alexander Fleming*- penicilina 
1932- Gerhard Domagk* -prontosil (sulfonamida) 
1939- aparecimento de resistência bacteriana 
1940- H. Florey* & E. Chain* -utilização da penicilina 
1944- Selman Waksman *e Albert Schatz- estreptomicina 
1945- Edward Abrahan- isolamento cefalosporina C 
1946- Selman Waksman - isolamento neomicina 
1947- Cloranfenicol, o primeiro antibiótico de amplo 
espectro 
1960- Descobre-se as cefalosporinas 
.... 
 
 
 
 
 
 Staphylococcus aureus X Penicillium notatum 
Quimioterápicos 
• Classificação dos agentes antimicrobianos: 
- Quanto ao efeito: 
- Causar a morte: efeito “-cida” ex.: bactericida 
- Efeito estático: inibe crescimento ex.: bacteriostático. 
- A eliminação do micro-organismo depende da imunidade do 
paciente. Ex.: sulfonamidas, clorafenicol, tetraciclinas e 
nitrofurantoína 
 
- Espectro de atividade antimicrobiana; 
- Estrutura molecular; 
- Mecanismo de ação. 
 
Agentes Antimicrobianos 
1. Classificação quanto ao espectro de 
atividade: 
 
- Antibacterianos; 
- Antifúngicos; 
- Antiprotozoários; 
- Anti-helmínticos; 
- Antivirais. 
 
Agentes Antimicrobianos 
• Espectro de ação antimicrobiana: 
Agentes Antimicrobianos 
• O que significa: 
1. Espectro restrito: atuam em um tipo ou um 
grupo limitado de microrganismos. Ex.: 
isoniazida é ativa somente contra micobactérias. 
 
2. Amplo espectro: afetam ampla variedade de 
espécies microbianas; eficazes contra Gram-
positivos e contra um significativo número de 
bactérias Gram-negativos. Ex.: ampicilina (age 
contra Gram-positivos e alguns Gram-negativos). 
 
 
Agentes Antimicrobianos 
O que significa: 
• Toxicidade seletiva: matar ou inibir o micro-
organismo sem afetar o hospedeiro. 
• Concentração Mínima inibitória (MIC): é a menor 
concentração de antimicrobiano necessária para 
inibir o crescimento bacteriano. 
• Concentração Mínima bactericida (MBC): é a 
menor concentração do antibiótico que mata 
99.9% do inóculo original em um determinado 
tempo. 
 
Agentes Antimicrobianos 
• Como avaliar a Toxicidade Seletiva: 
 
 
Ex.: - Maior diluição que mata células eucarióticas  1:1000 
 - Maior diluição que mata S.aureus  1:10.000 
 
I= 1.000/1.0000 = 0,1 
 
RESULTADO = diluição capaz de matar micro-organismos sempre deve ser maior 
 
 
Agentes Antimicrobianos 
• Como calcular: 
Concentração Mínima inibitória (MIC) 
 
Agentes Antimicrobianos 
• Como calcular: 
Concentração Mínima 
Bactericida (MBC) 
 
CARACTERÍSTICAS DO ANTIMICROBIANO IDEAL 
 
 Ação bactericida; 
 Espectro o mais específico possível; 
 Menor MIC; 
 Menos tóxico; 
 Maior nível no local da infecção; 
 Melhor comodidade posológica; 
 Compatível com o estado clínico do paciente; 
 Mais barato. 
14 
Propriedades farmacocinéticas 
Agentes Antimicrobianos 
• Mecanismo de ação do antimicrobianos: 
MECANISMOS DE AÇÃO 
1. Agentes que afetam metabolismo de ácidos 
nucleicos 
2. Agentes que atuam na síntese de polipeptídeos 
Inibição reversível (bacteriostáticos) 
Inibição irreversível (bactericida) 
3. Agentes que atuam como análogos estruturais de 
metabólitos essenciais 
4. Agentes que atuam diretamente sobre a membrana 
celular (aumenta permeabilidade) 
5. Agentes que inibem a síntese da parede celular 
 
 
16 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
1. Agentes que afetam metabolismo de ácidos 
nucleicos 
 -Inibição da síntese de nucleotídeos 
-Alterando pareamento de bases no molde 
-Inibição da DNA ou da RNA polimerase 
-Inibição da DNA girase 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
1. Agentes que afetam metabolismo de ácidos 
nucleicos 
 -Rifamicinas (Rifamicina B, Rifampicina): 
 - Inibição da transcrição; 
 
 - Atua sobre a RNA polimerase (se liga 
a subunidade b)  perda da capacidade 
de formar ligações fosfodiéster entre 
ribonucleotídeos do RNA; 
 
 - Não há síntese de mRNA, tRNA ou 
rRNA; 
 - Conclusão: não há síntese de 
polipeptídeos 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
1. Agentes que afetam metabolismo de ácidos 
nucleicos 
 
-Novobiocina: 
 
-Inibição da DNAgirase 
-Atua no processo de duplicação do DNA, 
promovendo o desenrolamento da hélice de 
DNA no local a ser duplicado; 
-Liga-se a subunidade B, impedindo a 
ligação do ATP, mudança na conformação e 
ativação da enzima. 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
1. Agentes que afetam metabolismo de ácidos 
nucleicos 
 -Quinolonas (ex. ciprofloxacina): 
 
-Inibição da DNAgirase 
-Atua no processo de duplicação do DNA, 
promovendo o desenrolamento da hélice de 
DNA no local a ser duplicado; 
-Liga-se a subunidade A, impedindo a 
restauração da ligação fosfodiéster 
rompidas. 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
2. Agentes que atuam na síntese de polipeptídeos 
 
 
 
Aminoglicosídeos: 
Moléculas contendo 
resíduos de açúcares 
aminados 
Necessário alcançar o citoplasma 
Ligam-se reversivelmente a subunidade 30S 
Não penetram em células eucarióticas 
Ligam-se reversivelmente a subunidade 50S 
Não penetram em células eucarióticas 
Macrolídeos: 
estrutura em anel 
com elevado número 
de átomos 
Estrutura 
contendo 4 
anéis 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
2. Agentes que atuam na síntese de polipeptídeos 
 
Aminoglicosídeos: também deslocam Mg+2 e Ca+2 
ligados a fosfolipídeos e LPS das membranas 
bacterianas  aumento da permeabilidade da célula 
e rompimento de membranas. 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
3. Agentes que atuam como análogos estruturais de 
metabólitos essenciais 
Sulfas: drogas sintéticas, bacteriostáticas, utilizadas inicialmente em infecções 
estreptocócicas em 1935. 
 -Análogas estruturais do ácido para-aminobenzóico (PABA) 
 - PABA é um dos componentes do ácido fólico, envolvido na síntese de 
substâncias vitais para célula como aa e bases nitrogenadas. 
 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
3. Agentes que atuam como 
análogos estruturais de 
metabólitos essenciais 
Trimetoprim: drogas sintéticas, 
bacteriostáticas. 
 -Análogas estruturais do 
diidrofolato. 
 - Inibe competitivamente a enzima 
diidrofolato-redutase, enzima da 
etapa final de formação do ácido 
fólico. 
 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
3. Agentes que atuam como análogos estruturais de 
metabólitos essenciais 
Isoniazida: 
- Droga sintética; 
- Análoga estruturalda nicotinamida (vitamina); 
- Mecanismo de ação não é totalmente conhecido; 
- Afeta a síntese de ácido micólico; 
- Usado no tratamento ode infecções por 
Mycobacterium. Ex.: tuberculose 
 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem em membranas celulares 
 
 
 
Polimixinas: Ligam-se à membrana, entre os fosfolipídeos, deslocando 
competitivamente Mg2+ e Ca2+ e alterando sua permeabilidade. São extremamente 
eficientes contra Gram-negativos, pois afetam tanto a membrana citoplasmática 
como a membrana externa. Atuam também em membrana de eucariotos. 
 
Polipeptídeos cíclicos ligados a uma cadeia de ácido graxo 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem em membranas celulares 
 
Poliênicos (Nistatina, Anfotericina B) 
- São moléculas complexas que se ligam ao esteróis da 
membrana; 
- Ergosterol: fungos; 
- Provoca alteração na permeabilidade celular; 
- Não atua sobre bactérias apenas fungos e certos 
protozoários. 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem em membranas celulares 
 
Imidazóis (Miconazol, Cetonazol, Itraconazol): 
- Inibem a síntese de ergosterol; 
- Então gera membrana com permeabilidade alterada; 
- Ergosterol: usado em infecções causadas por fungos 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
 
Síntese da parece celular bacteriana (S.aureus) 
 
1- Síntese citoplasmática do ácido N-acetil-murâmico ligado a um pentapeptídeo; 
 
2- O precursor é transportado ligado ao fosfolipídeo bactoprenol para transporte pela 
membrana 
 
3- Ligação glicosídica β 1-4 entre N-acetil-glicosamina; 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da 
parede celular 
 
Síntese da parece celular bacteriana 
(S.aureus) 
 
4- Formação da ponte peptídica 
(pentaglicina); 
 
5- Transferência completa da 
fração básica da parede 
celular do bactoprenol para 
sítio crescente da cadeia 
polissacarídica da 
peptideoglicana (enzima 
transglicolase); 
6- Formação das ligações 
cruzadas entre os polímeros 
de peptideoglicana 
 -D-alanina-
carboxipeptidase 
 - Transpeptidase 
 
Antimicrobianos: 
mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese 
da parede celular 
 
Síntese da parece celular 
bacteriana (S.aureus) 
 
-D-alanina 
carboxipeptidase: 
desloca D-alanina 
terminal de uma cadeia 
lateral adjacente. 
 
- Transpeptidase: liga D-
alanina subterminal à 
glicina da ponte 
peptídica 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
 
D-ciclosserina: 
- Análoga estrutural da D-alanina; 
- Inibe a ação das enzimas envolvidas na formação do 
pentapeptídeo; 
- Não ocorre a formação do dipeptídeo D-alanil-D-
alanina. 
- Efeito não há ligação cruzada. 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
 
Vancomicina e teicoplanina: 
- São glicopeptídeo cíclicos que se complexam ao dipeptídeo D-alanil-
D-alanina; 
 
- Ação sobre a transglicolase: impedindo a transferência da fração 
básica de parede para os locais de síntese; 
 
- Ação sobre a transpeptidase: impedindo a formação da ligação 
cruzada. 
 
- Gram-negativas são resistentes naturalmente, pois não passa pela 
membrana externa. 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
 
b-Lactâmicos 
 
- Apresentam em sua estrutura um anel b-Lactâmico 
Núcleo comum às penicilinas 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem 
na síntese da 
parede celular 
 
Penicilina 
- São dipeptídeos cíclicos 
que possuem o núcleo 
comum que é o ácido 
6-aminopenicilânico, 
contendo diferentes 
cadeias laterais. 
 
 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem 
na síntese da 
parede celular 
 
Penicilina 
- Podem ser: 
- Naturais: indicadas pelas 
letras G, V, F...fungos 
gênero Penicillum 
 
- Semi-sintéticas: adições 
posteriores de radicais ao 
ácido 6-penicilânico 
produzido 
bniologicamente em 
fermentações industriais. 
 
 
* Menos potentes, mas mais resistentes 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
 
Mecanismo de ação da Penicilina 
- O anel β-lactâmico possui uma região que se assemelha a uma 
ligação peptídica; 
 
- Proteínas envolvidas na síntese da parede celular (PBPs – 
ex.:transpeptidase e D-alanina-carboxilase) se ligam 
irreversivelmente a essa região; 
 
- Não há formação de ligações cruzadas; 
 
- Há estímulo a produção de autolisinas; 
 
- Consequência: enfraquecimento da parede celular e lise da célula. 
Figura pág 525 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
Cefalosporina 
- São antibióticos β-lactâmicos cujo núcleo principal é 
o ácido 7-aminocefalosporânico; 
- Possuem cadeias laterais diferentes, com 
substituições em R1 e R2; 
 
 
 
Figura pág 525 
Antimicrobianos: mecanismo de ação 
4. Agentes que agem na síntese da parede celular 
Cefalosporina 
- São classificadas em gerações: 
 
 
 
Ação semelhante a penicilina, ligando-se a PBP 
Antimicrobianos: mecanismo de 
proteção 
Mecanismo de proteção de micro-organismos produtores 
1. Modificação do sítio-alvo da droga. 
- Ex.:Streptomyces possuem ribossomos metilados nos rRNAs 23S, impedindo 
ligação do antibiótico. 
2. Modificação da droga 
 - Ex.: Streptomyces produzem enzimas que modificam a droga inativando-as 
quando dentro da célula. 
3. Produção do antibiótico na forma inativa 
 - Ex.: droga só é ativada após secreção 
4. Ausência do sítio alvo 
 - Ex.: Fungos produzem β-lactâmicos e não possuem parede contendo 
peptideoglicana 
5. Não há produção durante crescimento somente na esporulação 
 - Ex.: Bacillus e Paenibacillus produtores de antibióticos 
Antimicrobianos: antibiograma 
Método de Diluição 
 
 
Teste para determinação da sensibilidade bacteriana ao agente antimicrobiano 
Como já falamos MIC e MBC 
Antimicrobianos: antibiograma 
Método de Difusão 
 
 
Sensível: Crescimento in vitro deve ser inibido em concentrações 3 x ou mais inferiores às 
atingidas in vivo. 
Moderadamente sensível: mesma concentração 
Resistente: inibição do crescimento só é obtida in vitro utilizando concentrações 3x ou mais 
superiores in vivo. 
Comparação com valores-padrão para cada micro-organismos, antimicrobiano, concentração 
Antimicrobianos: antibiograma 
Teste E 
 
 
Pode ser feita a determinação da MIC 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Peptídeos antimicrobianos 
- Origem: microbiana, animal ou vegetal. 
 
- Podem ser classificados como: 
- Síntese não ribossômica: produzido por atividades de 
complexos multienzimáticos (ex.: polimixinas, bacitracinas, 
glicopeptídeos...). 
- Síntese ribossômica: bacteriocinas e peptídeos isolados de 
animais e plantas. 
 
 
 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Peptídeos antimicrobianos 
- Bacteriocinas: peptídeos catiônicos e hidrofóbicos 
que apresentam atividade bactericida, geralmente. 
- Bactéria produtora possui outra proteína que 
inativa a bacteriocina. 
- Espectro de ação variado 
- Ex. de uso: biopreservativo para indústria de alimentos 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Peptídeos antimicrobianos 
- Bacteriocinas: 
- Exemplos: Nisina já é utilizada em produtos derivados do 
leite, bebidas fermentadas, verduras e carnes. 
 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Peptídeos antimicrobianos 
 
- Defencinas: 
- Peptídeos antimicrobianosproduzidos por animais. 
 
- Fazem parte da defesa do hospedeiro (imunidade inata). 
 
- Representam 10 a 18% das proteínas totais de neutrófilos (mamíferos). 
 
- Molécula hidrofóbicas e catiônicas que se inserem na membrana, 
deslocando cátions Mg2+ e Ca2+ e formando poros que levam alise celular. 
 
- Possuem amplo espectro de ação 
 
- Não é observado aparecimento de células resistentes. 
 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Peptídeos antimicrobianos 
 
- Defencinas: 
- Exemplos: 
Potencial de membrana 
Formação de poros 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Bacteriófagos 
- Utilização de fagos . 
 
- Alta especificidade: ausência de 
danos a microbiota. 
 
- Ocorre aparecimento de resistentes. 
 
- Resultados variam de acordo com o 
hospedeiro. 
 
 
Agentes antimicrobianos alternativos 
Substâncias antimicrobianas extraídas de plantas 
- Aparecimento de resistentes aos antibióticos 
 
Planta Composto Atividade 
Alho alicina geral 
Casca de laranja terpenóide fungos 
Cebola alicina bactérias , Candida 
Maça flavonóide geral 
Eucalipto polifenol bactérias e vírus 
Aula Prática 
30/08/2013 
Prática 6 
Classificação de bactérias: provas bioquímicas I 
Provas bioquímicas 
• São utilizadas para auxiliar na identificação e 
classificação dos micro-organismos. 
• São baseados em métodos bioquímicos para 
evidenciar características metabólicas e 
atividades enzimáticas das bactérias. 
• Resultados dados como positivos ou negativos 
são analisados em tabelas para identificação. 
• Aula: as provas que envolvem o tipo de 
metabolismo do micro-organismo: fermentativo, 
respiratório ou ambos. 
 
Provas bioquímicas 
1) Fermentação de Carboidratos 
 
 1a. Glicose 
 
Meio com: 
-único carboidrato fermentável 
-indicador de pH; 
Vermelho de fenol 
pH ácido  amarelo 
pH básico  vermelho 
-Tubo de Durham 
O que observar no resultado: 
-Produção de ácido; 
-Produção de gás. 
Provas bioquímicas 
Se o micro-organismo for capaz de fermentar o manitol, o meio ficará amarelo, devido à produção de ácidos. 
Fonte de energia e carbono 
1) Fermentação de Carboidratos 
 
 1b. Manitol 
 
Provas bioquímicas 
1) Fermentação de Carboidratos 
 
 1c. Lactose 
 
Provas bioquímicas 
O Vermelho de Metila é um 
indicador de pH. 
 
ADICIONADO APÓS 
CRESCIMENTO 
 
 Vira quando há intensa 
acidificação do meio (pH 4,4). 
 
Esta prova só pode ser feita 
após 48 horas de incubação. 
2) Teste do Vermelho de Metila (VM) 
 
 Fermentação da Glicose 
 Ácida mista 
 
Provas bioquímicas 
3) Teste Voges-Proskauer (VP) 
 
 Fermentação Butileno glicólica 
 
Produção de acetoína a partir da glicose 
Esta prova só pode ser feita após 48 horas de 
incubação para que todos os ácidos da 
fermentação ácida mista sejam produzidos 
assim como o produto neutro, acetoína, típico 
da fermentação butileno-glicólica 
Provas bioquímicas 
3) Teste Voges-Proskauer (VP) 
 
 Fermentação Butileno glicólica 
 
Produção de acetoína a partir da glicose 
Após crescimento: 
-Adicionar 2-5 gotas de reagente Barrit A; 
 
-Adicionar 2-5 gotas de reagente Barrit B; 
 
-Agitar levemente; 
 
-Esperar 10-15 minutos para ler resultados 
Provas bioquímicas 
3) Metabolismo respiratório x Metabolismo 
fermentativo 
Princípio: 
 
- Os micro-organismos aeróbicos 
utilizam a respiração celular para 
oxidar seus carboidratos. 
 
- Os facultativos podem utilizar tanto a 
respiração como a fermentação . 
Provas bioquímicas 
3) Metabolismo respiratório x Metabolismo 
fermentativo 
O meio de HUGH-LEIFSON possui como indicador de pH o azul de bromotimol que em pH 
ácido é amarelo, em pH neutro é verde, e em pH básico, azul. 
 
Se o micro-organismo for facultativo crescerá nos 2 tubos, oxidativamente e através da 
fermentação virando o indicador para amarelo devido à produção de ácidos em ambos os 
metabolismos. 
 
Se possuir metabolismo oxidativo, crescerá apenas na superfície do tubo sem vaselina, 
virando também o indicador para amarelo. 
Inóculo COM AGULHA 
flambada 
 
-1 tubo coloca vaselina após 
inóculo 
 
-1 tubo sem vaselina 
Provas bioquímicas 
Ácido cítrico Ácido 
oxaloacético 
 
Ácido 
pivúvico 
 
Ácido 
acético 
4) Prova do Citrato 
Princípio: 
 
 
 
Células com a enzima são capazes de metabolizar citrato como única fonte de carbono. 
 
Enzima citrato permease facilita o transporte de citrato para o interior da célula. 
 
 
A enzima citrase metaboliza o citrato a ácido oxaloacético e acetato. Esses produtos são 
convertidos enzimaticamente à ácido pirúvico e CO2 em excesso. O gás carbônico se 
complexa com o sódio e água do meio produzindo o carbonato de sódio que alcalinizará o 
meio, tornando-o azul. 
 Indicador de pH: azul de bromotimol 
Inóculo: estrias em 
meio inclinado, pois 
o processo é 
aeróbico 
Provas bioquímicas 
• OBJETIVOS GERAIS DA PRÁTICA 
 
– Justificar a importância das provas bioquímicas na 
classificação bacteriana. 
– Interpretar os resultados dos testes bioquímicos 
realizados. 
 
Provas bioquímicas 
OBJETIVOS ESPECÍFICOS DA PRÁTICA 
 
1) Fermentação de Carboidratos 
 - Glicose, Manitol e Lactose: Verificar a capacidade dos micro-organismos de 
fermentar a glicose, manitol ou lactose com produção de ácidos e gases. 
 
2) Teste do Vermelho de Metila (VM): Verificar se o micro-organismo faz a 
fermentação ácida mista 
 
3) Teste Butileno glicólica (Prova do Voges Proskauer, VP): Verificar se o micro-
organismo faz a fermentação butileno glicólica. 
 
4) Metabolismo respiratório x Metabolismo fermentativo : Verificar se o micro-
organismo possui metabolismo oxidativo ou facultativo. 
 
5) Prova do Citrato: Verificar a capacidade do micro-organismo utilizar ou metabolizar 
o citrato como única fonte de carbono. 
 
Práticas bioquímicas 
EXECUÇÃO DA PRÁTICA 
 
1. Escolher um tubo com micro-organismo (A-E) desconhecido para identificação com as provas 
bioquímicas; 
 
2. Repicar o cultivo do micro-organismo desconhecido para a execução do restante das provas 
bioquímicas na aula seguinte; 
 
3. Preparar e observar uma lâmina do micro-organismo desconhecido corado por coloração de 
Gram; 
 
4. Fermentação da glicose 
– Com alça flambada coletar a cultura em meio líquido e inocular no meio contendo glicose (contém pequeno 
tubo invertido no seu interior, tubo de Durham); 
 
5. Fermentação do manitol 
– Com alça flambada coletar a cultura em meio líquido e inocular no meio contendo manitol (tubo com marca 
azul); 
 
6. Fermentação da lactose 
– Com alça flambada coletar a cultura em meio líquido e inocular no meio contendo lactose (tubo com marca 
vermelha); 
 
Práticas bioquímicas 
7. Teste VM 
- Ácida mista (Prova do Vermelho de Metila, VM): Inocular com a alça um dos tubos com o meio 
de CLARK-LUBS (marca amarela); 
 
8. Teste VP 
 - Butileno glicólica (Prova do Voges Proskauer, VP): Inocular com a alça um dos tubos com o meio 
de CLARK-LUBS (marca amarela); 
 
9. Metabolismo respiratório x Metabolismo fermentativo 
- Com a agulha flambada, coletar um pouco de cultura; 
- Inocular em 2 tubos com meio de Hugh-Leifson (semi-sólido, de cor verde) fazendo uma 
picada até próximo ao fundo do tubo; 
- Cobrir a superfície de um dos meios com vaselina estéril (1.0 cm de altura); 
 
10. Prova do Citrato 
– Com a alça inocular, em estria, o tubo contendo meio de citrato de Simmons (semi-sólido, 
verde); 
 
11. Incubar a estante com os tubos na estufa para leitura e interpretação na aula 
seguinte