Métodos Biofísicos de Análise - Eletroforese

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Eletroforese
Por: 
Amanda Araújo Serrão de Andrade
Bárbara Verena Dias Galvão
Clayre Nayara Santos de Freitas
Eliane Carla da Costa Miranda
Klayton de Morais Tavares
Lalissa Santana Duarte
Ruana Lobão
Prof. Edinaldo Moraes
BS01MA - Biofísica
Conceito
Método que consiste na separação dos componentes de um sistema através da aplicação de um campo elétrico.
Princípio do Método
Substâncias em solução que possuem carga elétrica livre, deslocam-se quando submetidas a um campo elétrico de sentido invariável.
Separação Qualitativa
Separação Quantitativa
VELOCIDADE: A > B > C
Fatores que Condicionam a Migração Eletroforética
pH e pI das substâncias;
Eletrólitos usados;
Temperatura, etc.
Migração de proteínas em função do pI e pH do meio
pH sistema > pI proteína = carga negativa → pólo positivo.
pH sistema < pI proteína = carga positiva → pólo negativo.
pH sistema = pI proteína = carga efetiva = 0 → proteína fica estacionária.
Tipos de eletroforese
Eletroforese livre
As substâncias são separadas em um meio totalmente líquido. 
Influências físicas, inclusive de convecção do líquido causam perturbações. Estas, perturbações fazem com que este tipo de eletroforese se torne pouco produtivo e entre em desuso. 
Tipos de eletroforese
Eletroforese em suporte
Não existe perturbação.
Pode ser feita em meio sólido:
Papel: separação de partículas com grande diferenças de cargas, como por exemplo a separação de proteínas 
Meio semi-sólido:
Gel: separar as moléculas com base no tamanho molar. 
Execução da eletroforese 
Etapas padrão para a eletroforese em gel:
Preparação do gel
Aplicação das amostras
Eletroforese
Coloração
Análise dos resultados
Execução da eletroforese em gel
O aparelho usado para fazer isso é feito de duas camadas finas de vidro ou de plástico com um espaço no meio. A matriz do gel fica presa neste espaço. 
No topo existem pequenos espaços (poços) para as amostras. 
O eletrodo negativo fica no topo, o positivo na parte de baixo.
O dispositivo elétrico. 
A amostra contendo moléculas já desnaturada e reduzidas é transferidas, com a ajuda da pipeta, é distribuída nos poços. 
Geralmente, se mantém uma amostra padrão com que as amostras desconhecidas são comparadas para dar o resultado. 
O equipamento é fechado, e então a corrente é aplicada no gel através de um dispositivo diferencial de energia elétrica. 
As macromoléculas vão sendo distribuídas na extensão do gel e separadas em função da sua massa e tamanho molecular. 
Quando o campo elétrico é aplicado as moléculas menores migram primeiro. 
No final do processo quando todas as moléculas estão distribuídas o gel é mergulhado em uma solução corante.
Um período de tempo é aguardo e em seguida observa-se o eletroforetograma que nada mais é do que o gel corado. 
Para proteínas são usadas solução de nitrato de prata ou o gel é mergulhado em uma solução ácida e alcoólica de corante azul de coomassie. 
Para analise de ácidos nucléicos são usados corantes como brometo de etidio, que são corantes com estrutura aromática, quando sob a luz utravioleta apresentam fluorescência.
Aplicações em Eletroforese
Farmacologia
Biologia e Bioquímica 
Aplicações em Eletroforese
Medicina Forense
Exames Clínicos
Aplicações em Eletroforese
Veterinária
Taxonomia
Eletroforese – Métodos Especiais
- Eletroforese em gel
- Eletrofocalização
- Imunoeletroforese 
- Eletroforese de Alta Voltagem
Referências Bibliográficas
HENEINE, Ibrahim Felippe. Biofísica Básica. São Paulo: Editora Atheneu, 2010.
Eletrólito. In: Wikipédia: a enciclopédia livre. Disponível em: <http://pt.wikipedia.org/wiki/Eletrólito> Acesso em: 14 de novembro de 2013.
Ponto Isoelétrico. In: Wikipédia: a enciclopédia livre. Disponível em: <http://pt.wikipedia.org/wiki/Ponto_Isoelétrico> Acesso em: 14 de novembro de 2013.