Relatório - Análise Microbiológica de Água

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Universidade Federal do Ceará 
Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem 
Departamento de Farmácia 
Curso de Farmácia 
 
 
 
ANÁLISE MICROBIOLÓGICA DE ÁGUA 
 
 
 
Disciplina: SH0927 - Microbiologia Básica e Aplicada 
Professor: Hélio Vitoriano Nobre Júnior 
Aluno: João Antônio, Pedro Nonato e Vinícius Serra 
Turma: 03A 
 
 
 
 
FORTALEZA 
2016 
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Sumário 
INTRODUÇÃO ............................................................................................................................ 3 
OBJETIVOS ................................................................................................................................. 4 
MATERIAIS ................................................................................................................................. 4 
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ........................................................................................ 4 
1. Avaliação de Coliformios Totais ....................................................................................... 4 
2. Avaliação de Microrganismos Termolatentes ................................................................... 5 
3. Pesquisa de Bactérias Gram (-) ........................................................................................ 5 
4. Análise de Motilidade , Produção de H2S e Indol ............................................................. 5 
5. Análise em meio Ágar Citrato ........................................................................................... 5 
RESULTADOS E DISCUSSÃO .................................................................................................. 5 
1. Avaliação de Coliformios Totais ....................................................................................... 5 
2. Avaliação de Microrganismos Termolatentes ................................................................... 6 
3. Pesquisa de Bactérias Gram (-) ........................................................................................ 6 
4. Análise de Motilidade , Produção de H2S e Indol ............................................................. 7 
5. Análise em meio Ágar Citrato ........................................................................................... 7 
CONCLUSÃO .............................................................................................................................. 7 
ANEXOS....................................................................................................................................... 8 
REFERÊNCIAIS BIBLIOGRÁFICAS ....................................................................................... 10 
 
 
 
 
 
 
 
 
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INTRODUÇÃO 
A água é de suma importância para a sobrevivência de quase que a totalidade dos 
seres vivos no planeta. Para os seres humanos é importante que a água consumida seja 
potável, em outros termos, seja de boa qualidade livre de agentes potencialmente 
patogênicos, pois esta pode atuar como um potencial veículo transmissor de doenças. 
 A água potável ou de qualidade é aquela cujo seus parâmetros físicos, químicos, 
microbiológicos e radioativos estão dentro de um padrão, o qual não oferece risco para a 
saúde humana, esta água pode vir de poços, minas, nascentes, lagos, dentre outros , porém 
nem sempre estas já estão próprias para o consumo, pois múltiplos fatores como a 
poluição provocada por descartes de lixo humano, poluição de lençóis freáticos por fezes 
(lugares sem uma rede adequada de esgoto), fertilizantes , pesticidas, entre outros fatores, 
podem contribuir para que haja uma poluição dos recursos hídricos. 
 Desta forma se faz necessária realizar processos para reduzir a contaminação da 
água antes de distribui-la para o consumo humano, dentre estes podemos destacar a 
clorificação e o aquecimento para matar microrganismos. Porém nem sempre os 
processos de descontaminação são suficientes para eliminar agentes potencialmente 
nocivos para os seres humanos, portanto se torna essencial fazer um monitoramento da 
qualidade microbiológica da água antes desta ser distribuída, através desse é possível 
avaliar a capacidade desses processos , em casos em que não há uma resposta muito boa 
deve-se procurar então formas de melhorar a capacidade dos descontaminantes, 
ocasionando assim uma melhora principalmente na diminuição de casos de doenças 
relacionadas a microrganismos de origem entérica tais como o cólera, febre tifoide , 
enterites e doenças relacionadas a protozoários como Giardia lamblia e Entamoeba 
histolytica , antes de distribuir esta água para a população. 
 
 
 
 
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OBJETIVOS 
 Avaliar a qualidade da água coletada em banheiros do 2º andar do bloco didático 
de Farmácia da Universidade Federal do Ceará (UFC) 
MATERIAIS 
 Alça de platina 
 Agulha de platina 
 Placa de petri 
 Tubos de ensaio 
 Tubos de ensaio com tubos de Durhan invertidos 
 Estufa 
 Pipeta graduada (1 mL , 5 mL , 10 mL ) 
 
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 
Primeiramente foi acendido o bico de Bunsen da bancada para que se criasse uma 
área de esterilidade ideal para se trabalhar. Buscou-se sempre trabalhar atrás da chama, 
flambar as bocas dos tubos de ensaio, alças e platinas, para assim haver o menor risco de 
contaminação das amostras. 
 A água utilizada para o procedimento já estava disponibilizada em erlenmeyers 
distribuídos pelas bancadas do laboratório. 
1. Avaliação de Coliformios Totais 
 Para esta utilizou-se ao todo 9 tubos de ensaio com tubos de Durhan invertidos 
dentro, em cada tudo havia 10 mL de caldo lactosado, os tubos de ensaio foram divididos 
em três grupos, a cada um desses foi adicionada uma quantidade de água, ao primeiro 
grupo foi adicionado 10 mL de água do erlenmeyer B utilizando uma pipeta graduada de 
10 mL, este grupo foi identificado como os de tubos duplos com concentração de 1:1, ao 
segundo grupo adicionou-se 1 ml de água do erlenmeyer B utilizando uma pipeta 
graduada de 5 ml, este grupo foi então identificado como os de tubos simples com 
concentração de 1:10, por fim, ao terceiro grupo adicionou-se 0,1 mL de água do 
erlenmeyer B utilizando uma pipeta graduada de 1 mL, este grupo foi identificado como 
os de tubos simples com concentração de 1:100. 
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 Após a colocação das alíquotas de água, os tubos foram levados para a estufa á 
uma temperatura de 37 °C por 24 horas. 
2. Avaliação de Microrganismos Termolatentes 
Foram disponibilizados para o grupo tubos de ensaio contendo meios BVB (caldo 
verde brilhante bile) ou EC. A um tubo de cada tipo foi adicionado 1 mL do caldo 
semeado na avaliação de coliformios totais, as concentrações escolhidas foram as de 1:1 
e 1:10, dessa forma 4 tubos foram semeados: 2 tubos com BVB cada com concentrações 
distintas (1:10, 1:100) e 2 tubos EC também com concentrações distintas (1:10, 1:100). 
Por fim todos os tubos de ensaio foram levados para a estufa onde ficaram durante 24 
horas à 37 °C. 
3. Pesquisa de Bactérias Gram (-) 
 Foi-nos disponibilizada uma placa de petri contendo meio EMB (Eosina Azul de 
Metileno), neste foi colocado com uma alça de platina uma amostra do caldo EC positivo 
(procedimento anterior), a placa foi então incubada em estufa por 24 horas à 37 °C. 
4. Análise de Motilidade , Produção de H2S e Indol 
 Em um tubo de ensaio contendo meio SIM foi feita uma bicada (com uma agulha 
de platina) contendo uma amostra de um dos tubos BVB positivo. Após 24 horas avaliou-
se a motilidade e a coloração do tubo de ensaio (formação de H2S) e então ao tuboadicionou-se o reagente de Kovacs para analisar a formação de indol. 
5. Análise em meio Ágar Citrato 
Coletou-se, com alça bacteriológica, previamente esterilizada, uma porção da 
amostra e inoculou-se no tubo de ensaio contendo Ágar Citrato, arrastando levemente a 
alça com movimentos de ziguezague sobre a superfície inclinada do meio, partindo da 
base para a extremidade. O tubo foi devidamente identificado e incubado em estufa, ao 
abrigo de luz, a uma temperatura de 35 ± 2° C, durante 24 h. 
 
RESULTADOS E DISCUSSÃO 
1. Avaliação de Coliformios Totais 
Dos 9 tubos que estavam em análise com o caldo lactosado, 8 apresentaram a 
formação de bolha no tubo de Durhan representando a formação de gás e turvação, a 
exceção foi 1 tubo do grupo de concentração simples (tubos simples 1:10). A formação 
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de gás dentro do tubo de Durhan, significa que o teste Presuntivo foi positivo e deverá ser 
realizado testes confirmatórios, tal formação de gás indica a capacidade do 
microrganismo em realizar fermentação da lactose presente no meio, entre 24-48h. 
 A estimativa para o número mais provável/100mL da população de bactérias foi 
obtido a partir da combinação formada pelo número de tubos positivos que apresentaram 
nas diluições 1:1; 1:10 e 1:100 formação de gás, como apenas um tubo de concentração 
simples(1:10) deu negativo, o número resultante foi 3-2-3, que corresponde a um NMP 
de 290/g. Para a água, cujo resultado final deverá ser expresso em NMP por 100 mL, o 
esse valor deverá ser multiplicado por 10, resultando em um número provável de 2900 
coliformes em 100 mL da água analisada. 
2. Avaliação de Microrganismos Termolatentes 
Os 2 tubos com BVB (caldo verde brilhante bile) em concentrações distintas 
(1:10, 1:100) apresentaram formação de gás vista pelo aparecimento da bolha no tubo de 
Durhan, turvação e uma pequena mudança de coloração de vermelho para um tom mais 
alaranjado, o que confirmou a presença de coliformes totais. Os 2 tubos com EC em 
concentrações distintas (1:10,1:100), também apresentaram formação de bolhas e 
turvação, a presença de coliformes fecais foi confirmada, porém como os tubos não foram 
incubados em banho-maria a 44,5 ± 0,2º C durante 24h, a presença de um tipo especifico 
de coliforme fecal a Escherichia coli não pôde ser confirmada, pois como a mesma é 
termotolerantes ela iria resistir ao aquecimento de 44,5°C no banho-maria, porém o 
aquecimento foi realizado na estufa em um temperatura de 37°C, então é possível que 
ainda tenha a presença de outros microrganismos 
3. Pesquisa de Bactérias Gram (-) 
O EMB (eosina- azul de metileno) é um meio seletivo para bacilo entérico gram-
negativo e diferencial para fermentação de lactose e/ou sacarose. Possui corante como 
eosina e azul de metileno que inibem as bactérias gram positivas e funcionam como 
indicadores de diferenciação em resposta a fermentação da lactose e/ou sacarose por MO. 
Após 24h, a placa que possuía EMB (Eosina Azul de Metileno) como meio, onde 
foi semeado a amostra do caldo EC, apresentou Colônias pequenas de cor verde metálico 
brilhante o que confirmou a presença de Escherichia coli, ela apresenta esse tipo de 
crescimento e constitui uma grande proporção da população bacteriana intestinal humana. 
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Nesse meio, os coliformes produzem colônias preto-azulados, enquanto as 
colônias de Salmonella e Shigella são incolores ou tem uma cor âmbar transparentes. As 
colônias de Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado 
característico, devido a rápida fermentação da lactose. 
4. Análise de Motilidade , Produção de H2S e Indol 
O MO no meio SIM apresentou motilidade por apresentar uma zona de 
crescimento difuso a partir da linha de inoculação, não apresentou produção de sulfeto já 
que não houve formação de precipitado negro e foi positivo para indol devido a formação 
de uma anel vermelho pela adição do reagente de Kovac. 
5. Análise em meio Ágar Citrato 
Neste meio, o citrato é a única fonte de carbono disponível para o metabolismo do 
microrganismo e desta forma diferenciar microrganismos de acordo com a sua capacidade 
de usar o citrato como única fonte de carbono para produzir energia, isto é, ausência de 
glicose ou lactose fermentáveis. Não houve mudança da coloração do meio, indicando 
que a cultura é citrato-negativa, ou seja, os microrganismos alí presentes utilizam outras 
fontes de carbono além do citrato. 
CONCLUSÃO 
 A amostra de água analisada possuia um número provável de coliformes totais 
correspondente a 2900 coliformes por 100 mL de água. O microrganismo analisado 
possui motilidade e não possui a enzima tiossulfatoredutase, pois não teve a produção de 
sulfeto de hidrogênio (H2S). Devido ao procedimento adotado na análise de 
microrganismos termolatentes, não é possível inferir a presença de Escherichia coli. 
Contudo, as colônias formadas em meio de cultura EMB se apresentaram como aspecto 
verde metalizado, o que caracteriza a presença dessa espécie de bactéria. Com base nos 
resultados apresentados, pode-se inferir que a amostra de água estava contaminada 
principalmente por Escherichia coli. 
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ANEXOS 
 
Figura 1- Avaliação de coliformios totais pelo método de tubos múltiplos 
 
 
Figura 2 - Avaliação de microrganismos termolatentes. À esquerda tubos controle, à direita tubos semeados. 
Laranja (BVB), Amarelo (EC). 
 
 
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Figura 3 - Análise de motilidade, produção de H2S e indol em meio SIM 
 
 
Figura 4 - Análise de consumo de citrato em Ágar Citrato de Simmons 
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Figura 5 - Colônias de E. coli em meio EMB 
 
REFERÊNCIAIS BIBLIOGRÁFICAS 
Carine de Sousa Andrade; Clícia Capibaribe Leite ; Matilde Dantas da Silva ; 
Patrícia Nascimento de Assis; Alaíse Gil Guimarães-Qualidade microbiológica da água 
utilizada nas barracas de praia da orla de Salvador-BA 
Elizandra Bruschi Buzanello , Makelly Wickert Martinhago, Milene Miranda 
Almeida e Fabiana Gisele da Silva Pinto - Determinação de Coliformes Totais e 
Termotolerantes na Água do Lago Municipal de Cascavel, Paraná. 
BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.– ANVISA. Detecção e Identificação 
de Bactérias de Importância Médica, Brasília, 2004. 
 
BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária.– ANVISA. Descrição dos Meios de 
Cultura Empregados nos Exames Microbiológicos, Brasília, 2004.