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Histologia i Universidad Maria Auxiliadora 2017 Definicion Histologia: Histo: Tejido Logia:Estudio Tejido: Conjunto de celulas que desempeñan una funcion en comun. TODOS LOS SERES VIVOS ESTÁN CONSTITUÍDOS POR CÉLULAS Niveles de organización CÉLULAS ÓRGANOS TEJIDOS Anatomía Macroscópica vs. Anatomía Microscópica Anatomía Macroscópica: Estudio del animal mediante inspección, palpación y disección Anatomía Microscópica (Histología): Estudio de células y tejidos del animal mediante el uso del microscopio Estudio = Preparación de tejidos y células (vivas-muertas) MÉTODOS DE ESTUDIO 1- Examen inmediato o in vivo: a) Observación de células en el organismo vivo: Espermatograma. b) Observación de células que se mantienen vivas luego de ser quitadas del organismo 2- Examen mediato o post-morten: Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, las Técnicas histológicas 7 TÉCNICAS HISTOLÓGICAS SON LOS DIFERENTES PROCEDIMIENTOS, QUE SE USAN PARA MANTENER, EN LO POSIBLE, EL ASPECTO DE LAS ESTRUCTURAS HISTOLÓGICAS DEL ORGANISMO VIVO, TRANSFORMÁNDOLAS EN DELGADOS CORTES COLOREADOS QUE PUEDAN POSTERIORMENTE SER OBSERVADOS AL MICROSCOPIO. 9 ETAPAS FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN ACLARAMIENTO INFILTRACIÓN E INCLUSIÓN SECCIÓN O CORTE COLORACIÓN MONTAJE 10 FIJACIÓN En este Procedimiento se introduce el tejido en sustancias que retardan sus alteraciones y conservan su configuración normal. FORMALDEHIDO AL 10%. 11 DESHIDRATACIÓN CONSISTE EN INTRODUCIR EL TEJIDO FIJADO EN FRASCOS DE ALCOHOL ABSOLUTO A CONCENTRACIONES ASCENDENTES Y TIEMPOS DETERMINADOS. PARA ELIMINAR EL AGUA. 70% 80% 95% 100% 100% 100% 30´ 45´ 45´ 60´ 60´ 60´ 12 ACLARAMIENTO ESTE PASO SUSTITUYE EL ALCOHOL POR EL XILOL (VUELVE TRANSPARENTE AL TEJIDO), QUE ES UN LÍQUIDO MISCIBLE CON LA PARAFINA. XILOL XILOL 45´ 45´ 13 INFILTRACIÓN E INCLUSIÓN ES LA FORMACIÓN DEL BLOQUE DE PARAFINA (MEDIANTE LA INCLUSIÓN DEL TEJIDO EN ÉSTA) RECIBIENDO EL NOMBRE DE TACO 14 SECCIÓN O CORTE Consiste en cortar el tejido en secciones lo suficientemente delgadas para permitir el paso de la luz, el corte se realiza con un micrótomo. 15 SECCIÓN O CORTE 16 Para eliminar PLIEGUES O ARRUGAS del tejido… EL CORTE ES LLEVADO A UN RECIPIENTE BAÑO DE FLOTACIÓN (40º C) 17 MONTAJE Y TINCIÓN Los cortes se colocan sobre un portaobjetos y luego se tiñen mediante coloraciones hidrosolubles QUE PERMITEN DIFERENCIAR LOS DIVERSOS COMPONENTES CELULARES. 18 Para ADHERIR el corte a la lámina… SE COLOCA EN UNA LAMINA PORTA OBJETO Y SE LLEVA A LA ESTUFA DURANTE 15 a 20´ A 80ºC 19 COLORACIÓN La coloración o tinción es el proceso en el cual se aplica a las células o tejidos una sustancia colorante Colorante: sustancia con color propio capaz de cederlo a otros cuerpos Clasificación de los colorantes Por su origen: Naturales Animal/Vegetal Artificiales: Derivados de la anilina, que a su vez es un derivado de la destilación de la hulla. El colorante artificial más usado es la eosina Carmín Hematoxilina Orceína Técnica Sumergir los preparados histológicos en xilol para eliminar los excesos de parafina. Luego pasan por una serie de alcoholes (100°. 95° y 70°). Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar excesos y se pasa rápidamente por alcohol ácido. Se lava nuevamente Se sumerge 30 segundos en eosina. Se pasa por otra serie de alcoholes, en orden creciente (70°, 95° y 100°). Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final COLORACION CON HEMATOXILINA Y EOSINA La hematoxilina es un colorante básico que tiñe de color azuloso a los componentes ácidos de la célula. La eosina es un colorante acido que tiñe de color rosado a los componentes básicos de la célula. CORTE DE RIÑÓN H-E 23 OTRAS TÉCNICAS DE TINCIÓN 24 COLORACIONES: 25 COLORACIONES: Ovario De Gata Hematoxilina -Eosina Ganglio Raquídeo Plata Hígado Carmín de Best 26 COLORACIONES: Raíz de cebolla Hematoxilina Férrica Riñón Hematoxilina-Eosina 27 EL MICROSCOPIO COMO HERRAMIENTA DE ESTUDIO El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para el ojo humano Tipos de microscopios Microscopios ópticos (propios y especiales) Microscopios electrónicos (transmisión- barrido) MICROSCOPIO Un microscopio es un dispositivo encargado de hacer visibles objetos muy pequeños. Es el instrumento mas importante en la histología , debido al tamaño de las estructuras analizadas. Se clasifica según el tipo de fuente luminosa que utilice. 30 TIPOS DE MICROSCOPIO Óptico Óptico simple Óptico compuesto Electrónico Electrónico de transmisión Electrónico de barrido 31 TIPOS DE MICROSCOPIO 32 TIPOS DE MICROSCOPIO Ultramicroscopio. Microscopio de contraste de fase. Microscopio de interferencia. Microscopio confocal. Microscopio de polarización. Microscopio de fuerza atómica. 33 MICROSCOPIO ÓPTICO Consiste en una fuente luminosa, un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra, una platina en la cual se coloca la muestra, un objetivo y un ocular . 34 COMPONENTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Sistema óptico Sistema de iluminación Sistema mecánico 35 SISTEMA ÓPTICO Y DE ILUMINACIÓN Ocular Objetivos Fuente de luz Condensador 36 Es cilindro hueco metálico, provisto de una lente o un sistema de lentes convergentes, cuya finalidad es aumentar la imagen real e invertida enviada por el objetivo. OCULAR 37 OBJETIVO Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta 4X, 10X,40X,100X. 38 CONDENSADOR Y DIAFRAGMA Se encarga de concentrar el Haz de luz sobre la preparación. 39 Base Columna Platina Cabezal Brazo SISTEMA MECÁNICO 40 Sistema Mecánico Revolver Platina Tornillo Macrométrico Tornillo Micrométrico 41 Sistema Mecánico Tornillo Macrométrico Tornillo Micrométrico 42 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO 43 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN Usa un Haz de electrones,para producir la imagen. esto permite obtener una mayor amplificación y resolución. La imagen puede plasmarse en una película y producir micrografías en blanco y negro. 44 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO Proporciona una imagen tridimensional del espécimen. El haz de electrones no atraviesa el objeto, por lo que no es necesario utilizar cortes ultra finos. La imagen Obtenida es observada en una Pantalla de TV 45 Diferencias entre m.o, m.e.t y m.e.b 47 Diferencia entre las imágenes observadas M.O M.E.T M.E.B 48 Microscopio electrónico de barrido Macroscópico Microscopio óptico 49
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