Plasmídeos e bacteriófagos

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Plasmídeos
e
Bacteriófagos
Veículo de Clonagem
- Capacidade de replicar gerando cópias DNA
- Preferencialmente tamanho inferior a 10 Kb
Plasmídeos
- DNA circular
- Existência independe da célula bacteriana
- Portadores de um ou mais genes
- Pelo menos uma origem de replicação
Propriedades dos Plasmídeos 
Vetores de Clonagem
- Origem de replicação (O) reconhecida pela célula 
hospedeira;
- Dois ou mais sítios de clivagem para endonucleases 
de restrição (MSC);
- Um gene que codifica um produto para distinção da 
célula transformada.
(marcador de seleção)
Plasmídeos
Plasmídeo RP4 de E. coli - Resistência a antibióticos
Plasmídeos
Plasmídeos Não-Integrativos
- Plasmídeos menores: utilizam enzimas de 
replicação do DNA celular
- Plasmídeos maiores: possuem genes que 
codificam suas próprias enzimas
Plasmídeos Não-Integrativos
Plasmídeos Integrativos
Epissomos: integram-se ao DNA bacteriano 
ao longo de numerosas divisões celulares
elemento
independente
Plasmídeos Integrativos
Plasmídeos
Plasmídeo Extensão 
(Kb)
Organismo
pUC8 2,1 E. coli
ColE1 6,4 E. coli
RP4 54 Pseudomonas e outros
F 95 E. Coli
TOL 117 Pseudomonas putida
pTiAch5 213 Agrobacterium tumefaciens
Tamanho representativo de plasmídeos
Plasmídeos Conjugativos
- Promoção da conjugação sexual
- Presença de genes de transferência (tra)
Fímbria
Plasmídeos Não-conjugativos
- Ausência de genes de transferência
- Co-transferência com o plasmídeo conjugativo
Classificação dos Plasmídeos
- Fertilidade (F): promovem a transferência plasmidial
- Resistência (R): conferem resistência a bactéria 
hospedeira
- Col: codificam colicinas (proteínas bactericidas)
- Degradativos: permitem a metabolização de 
moléculas incomuns
- Virulência: conferem patogenicidade a bactéria 
hospedeira
Plasmídeos
Plasmídeos em procariotos
Plasmídeos em eucariotos
fungos filamentosos
levedura vegetais
animais
Bacteriófago
Bacteriófagos
- Fixação do fago e inserção do cromossomo na célula
- Replicação do DNA do fago por enzimas específicas 
- Genes do fago sintetizam componentes protéicos
Ciclo Lítico
Liberação de partículas viras na lise da bactéria
Ciclo Lisogênico
Retenção do DNA do fago nas divisões celulares
profago lisógeno
lisógeno
Fago λ
proteína 
repressora
[nutrientes]
[nutrientes]
Fago λ
componentes do capsídeo integração do profago replicação
7 Kb
Fago λ
Importância do agrupamento de genes:
- controle da expressão do genoma 
(ativação ou inativação em grupo)
- construção de vetores de clonagem 
(inserção de DNA a ser clonado)
Fago λ
Cosmídeo
Fago λ
Fago λ
Função do sítio cos:
- permite que o DNA linear seja circularizado
- união de genomas de λ através do sítio cos
após o círculo rolante
Fago λ
3’
5’
Fago λ - Veículo de Clonagem 
- Seqüência do DNA conhecida
- Agrupamento de genes é importante para a 
construção de vetores
- Presença de sítios cos é relevante para a 
construção de vetores de clonagem
- DNA inserido no fago é empacotado in vitro
Fago M13
- Constituído de DNA circular fita simples
- Tamanho de 6,4 Kb
- Envoltório constituído de apenas três tipos 
de proteínas
Fago M13
Fago M13
Fago M13
Fago M13
M13 - Veículo de Clonagem
- Genoma menor que 10 Kb
- Forma replicativa similar a um plasmídeo
- Fácil obtenção em cultura de células
- Reintrodução por transfecção
- Genes clonados de um vetor M13 são 
obtidos em fita simples de fácil recuperação
	Plasmídeos�e�Bacteriófagos
	Veículo de Clonagem
	Plasmídeos
	Propriedades dos Plasmídeos Vetores de Clonagem
	Plasmídeos
	Plasmídeos
	Plasmídeos Não-Integrativos
	Plasmídeos Não-Integrativos
	Plasmídeos Integrativos
	Plasmídeos Integrativos
	Plasmídeos
	Plasmídeos Conjugativos
	Slide Number 13
	Plasmídeos Não-conjugativos
	Classificação dos Plasmídeos
	Plasmídeos
	Bacteriófago
	Bacteriófagos
	Ciclo Lítico
	Ciclo Lisogênico
	Fago λ
	Fago λ
	Fago λ
	Fago λ
	Fago λ
	Fago λ 
	Fago λ
	Fago λ - Veículo de Clonagem 
	Fago M13 
	Fago M13
	Fago M13
	Fago M13
	Fago M13
	M13 - Veículo de Clonagem