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1 INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO CIÊNCIA E TECNOLOGIA CAMPUS RIO VERDE LICENCIATURA EM QUÍMICA FERMENTAÇÃO ALCOÓLICA A PARTIR DE Saccharomyces cerevisiae Professor: Gustavo A. T. Chaves Alunos: Alex de Freitas Silva Nayara Vieira Silva Rio Verde – GO 2017 2 RESUMO A fermentação é um processo de obtenção de energia na ausência de O2, vários organismos utiliza-se desse recurso para obtenção de energia rápida . A prática de fermentação nos mostra como objetivo a verificação de processos bioquímicos produzidos por micro-organismos e observar os produtos das reações bioquímicas ocorridas. 1. INTRODUÇÃO Os processos de fermentação foram descobertos pelo homem a mais de dez mil anos. Muitas bebidas eram fabricadas pelos antigos povos egípcios, germânicos e israelitas. Embora as bebidas alcoólicas sejam diferenciadas por suas propriedades organolépticas, sensoriais, visuais e principalmente pelos seus teores alcoólicos, todas elas têm uma algo em comum, ou seja, todas são produzidas a partir de um processo bioquímico denominado fermentação alcoólica. A fermentação alcoólica é um tipo de reação química realizada por leveduras, que são microrganismos unicelulares e o maios conhecido deles é Saccharomyces cerevisiae. Essas leveduras agem diretamente sobre os açúcares, produzindo etanol e gás carbônico como produtos principais da fermentação alcoólica. Na fermentação ocorre a liberação de energia sem a participação do oxigênio(processo anaeróbio). Esta compreende um conjunto de reações enzimaticamente controladas, através das quais uma molécula orgânica é degradada em compostos mais simples, liberando energia. Todos os processos de utilização de glicose (C6H12O6) para obtenção de energia iniciam-se com a conversão de açúcar a duas moléculas de piruvato (C3H4O3), através de enzimas específicas, caracterizando assim a fase denominada glicólise. Essa conversão se dá em dez etapas e utiliza-se de substâncias e moléculas das células, dentre elas ATP (adenosina trifosfato) e NAD+ como molécula intermediária para a oxidação dos aldeídos formados a partir da quebra da glicose, sendo reduzida a NADH através da incorporação do H+ liberado pelo aldeído . Essa etapa é produtora de energia, isto é, tem como produto, além do piruvato, 2 moléculas de ATP. As moléculas NAD+, por sua vez, precisam ser regeneradas e, para tanto, é necessário oxidar as moléculas de NADH liberado pelo aldeído. (Marzzoco, 2007). 3 A equação geral desta fase é representada por: Glicose + 2NAD+ + 2ADP + 2Pi → 2 Piruvato + 2 NADH + 2H+ + 2ATP + 2H2O Equação 1 Produção de Energia a partir de Glicose. A fermentação alcoólica (catabolismo anaeróbico) fornece energia na forma de ATP ou outros compostos de transferência de energia para a biossíntese do material celular e produção do etanol. Estas reações catabólicas acontecem com uma grande diminuição na energia livre, a qual junto com a subsequente hidrólise do ATP durante as reações de biossíntese, transporte e manutenção, resulta na produção de calor. Um balanço energético simplificado para a equação do catabolismo anaeróbico da glicose pela S. cerevisiae. (VOLPE, 1996). Esse balanço energético pode ser descrito da seguinte forma: GLICOSE 2CO2 + 2ETANOL; ΔG= -175K.J.mol-1 de glicose. Sabendo-se que as leveduras participam no processo de fermentação devido a presença de enzimas em seu sistema biológico, é importante entender qual o papel nessas para o processo de fermentação. Sabe-se que as Enzimas são conjuntos de proteínas que tem por objetivo fazer as reações catalíticas nos sistemas vivos, a maior parte das enzimas são biológicas, mas existem também as enzimas químicas. As transformações químicas decorrentes dessa ação são promovidas por milhares de enzimas que atuam catalisando a conversão de um conjunto de substratos em produtos específicos. Neste experimento será demonstrado, de maneira simples e laboratorial, o processo de fermentação alcoólica, que é a base para a produção de variados tipos de bebidas, embora a produção industrial trabalhe com uma tecnologia mais elaborada por questões de demanda de consumo da produção. 2. OBJETIVO Realizar um experimento a fim de entender como funciona a produção de álcool a partir da fermentação alcoólica. 4 3. MATERIAIS E REAGENTES Sacarose Ca(OH)2 Kitassato de 500ml Mangueira de silicone laboratório Tubo de ensaio 4. PROCEDIMENTO Fez-se cerca de 100ml de uma solução aquosa de sacarose, colocou-a em um kitassato. Preencheu o tudo de ensaio com uma solução saturada límpida de Ca(OH)2. Conectou-se a mangueira de silicone laboratório ao tubo de ensaio, submergindo-a na solução do tubo. Adicionou-se aproximadamente uma colher de sopa de fermento biológico granulado à solução de sacarose contida no Kitassato, misturou-se brevemente e tampou-se o Kitassato usando parafilme. Deixou em repouso 24Hr e logo depois observou o ocorrido, anotando os dados. 5. RESULTADOS E DISCUSSÃO As leveduras utilizadas, conhecidas popularmente como fermento, são microrganismos que atuam enzimaticamente (zimase, um complexo enzimático que catalisa a fermentação do açúcar em etanol e dióxido de carbono), sobre os glicídios, produzindo etanol (C2H5OH) e gás carbônico (CO2 ), como podemos ver na equação a seguir C6 H12O6 → 2C2H5OH + 2CO2 Equação 2 fermentação alcoólica Na obtenção do álcool a partir do açúcar comum, a sacarose que é o polissacarídeo presente no caldo da cana, foi convertida em etanol e gás carbônico durante o processo de fermentação. Esta reação pode ser observada no experimento, onde o gás carbônico formado na fermentação reage com o hidróxido de cálcio presente em uma solução no tubo de ensaio 5 formando um precipitado branco, o carbonato de cálcio, como visto na figura 1 e apresentado pela equação 2. Ca(OH) 2 (aq) + CO 2 (g) CaCO 3 (s) + H 2 O (l) Equação 3 Formação do carbonato de cálcio a partir do Hidróxido de Cálcio. Um aspecto importante a ser considerado no processo de fermentação é que esse ocorre via glicólise no meio celular. Nas fermentações típicas é produzido ácido pirúvico, que no meio celular está ionizado na forma de piruvato e NADH. Na fermentação alcoólica, o piruvato sofre descarboxilação pela ação da enzima piruvato descarboxilase, esta enzima necessita de Mg2+ para catalisar a reação, possuindo também uma coenzima, a tiamina que serve como auxiliar no processo de catálise, formando um aldeído, que posteriormente sofrerá uma redução, oxidando o NADH para NAD+ e formando o etanol pela enzima álcool desidrogenase, que durante o processo liberará CO2 para o meio que é muito importante na fermentação. Figura 1: Processo de fermentação com formação do carbonato de cálcio no tubo de ensaio. 6 5. CONCLUSÃO Conclui-se que no experimento realizado, o processo de fermentação depende do trabalho enzimático realizado pelas leveduras, como podemos ver a produção de álcool pode ser verificada a partir do precipitado branco, carbonato de cálcio que deposita-se no tubo de ensaio, sendo assim, o rendimento do processo depende da quantidade de açúcar e leveduras que interagem no meio. Vimos também que o processo deve ocorrer em meio fechado devido a necessidade de produção de CO2,, pois quando cessa o Oxigênio presente no kitassato, o processo enzimático recorre a outra via de reação a partir da redução do NADH para produzir O2, que é onde inicia-se também a fermentação alcoólica. 6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASMARZZOCO, A. & Torres, B. B.; Bioquímica Básica. Guanabara Koogan, 3° ed. Rio de Janeiro, 2007. VOLPE, P.L.O. Estudo da fermentação alcóolica de soluções diluídas de diferentes açucares utilizando microcalorimetria de fluxo. Química Nova, v. 20, n. 5, p. 304-309, 1997.
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