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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO CIÊNCIA E TECNOLOGIA CAMPUS RIO VERDE LICENCIATURA EM QUÍMICA TESTES PARA IDENTIFICAÇÃO DE CARBOIDRATOS E AÇÚCARES REDUTORES Professor: Gustavo A. T. Chaves Alunos: Alex de Freitas Silva Paulo Cabral da Silva Nayara Vieira Silva Rio Verde - GO 2017 RESUMO Carboidratos são poliidroxialdeídos capazes de gerar substâncias hidrolisadas, a maioria possui a formula empírica (CH2O)n. Sabendo-se que os açúcares redutos compõe o grupo dos carboidratos, a oxidação destes por um íon cúprico ocorre apenas com a formação linear, a qual existe em equilíbrio com as formas cíclicas. Os experimentos apresentado podem ser utilizados para a introdução de alguns conceitos químicos, na compreensão de conceitos científicos relacionados aos carboidratos. Os teste de lugol, Benedict, Seliwanoff são utilizados na identificação de açúcares redutos por serem de fácil de preparação e apresentar resultados quase que instantaneamente, realizamos nesse procedimento experimental os três testes com alguns açúcares redutores. 1. INTRODUÇÃO Carboidratos são poliidroxialdeídos capazes de gerar substâncias hidrolisadas, a maioria possui a formula empírica (CH2O)n; os mais comuns são compostos por nitrogênio, fósforo ou enxofre. Os carboidratos são geralmente classificados em três classes que são separadas levando em consideração a quantidade de unidades poliidroxicetonas ou poliidroxialdeídos, sõ elas: monossacarídeos, dissacarídeos e polissacarídeos. Segundo David L. Nelson e Michael M. Cox p241 (2011) Os monossacarídeos podem ser oxidados por agentes oxidantes relativamente suaves. O carbono do carbonil será oxidado a um grupo carboxil. A glicose por exemplo é um açúcar redutor capaz de reduzir o íon cúprico (Cu2+), formando enedióis que serão convertidos a ácidos aldônicos e, então, a uma complexa mistura de ácidos de 2, 3, 4 e 6 carbonos, essa é a base da reação de Fehling, que permite fazer uma estimativa da concentração de açúcar em um agente oxidante reduzido. A oxidação de um açúcar por um íon cúprico ( a reação que define um açúcar redutor) ocorre apenas com a formação linear, a qual existe em equilíbrio com a(s) forma(s) cíclica(s). Quando um carbono anomérico está envolvido em uma ligação glicosídica, aquele resíduo de açúcar não pode assumir a forma linear e, portanto, torna-se um açúcar não redutor. (David L. Nelson e Michael M. Cox, p243 2011). Segundo David L. Nelson e Michael M. Cox p243 (2011) a lactose é um dissacarídeo que produz a D-galactose e D-glicose quando hidrolisado, ocorre naturalmente no leite, a lactose é um dissacarídeo redutor. A sacarose o açúcar de mesa como conhecemos é um dissacarídeo da glicose e frutose, sintetizado por plantas, mas não por animais. A sacarose não contém um carbono anomérico livre como a maltose e a lactose, sendo assim um açúcar não redutor. Teste de Lugol De acordo com SOUZA (2016) polissacarídeos são moléculas de elevado peso molecular, cuja unidade fundamental são os monossacarídeos, principalmente a glicose. Como exemplos de polissacarídeos importantes na natureza podemos destacar o glicogênio, a celulose e o amido. Para a identificação de alguns monossacarídeos podemos utilizar o reagente de Lugol que contém iodo, o qual fica aprisionado dentro da cadeia de polissacarídeo, formando um complexo que apresenta a cor azul intensa. Teste de Seliwanoff Segundo SOUZA (2016) No teste de seliwanoff há formação de furfural e hidroximetilfurfural (HMF). Esses dois produtos, isoladamente, são incolores. Assim, adiciona-se um composto fenólico ao meio para que seja desenvolvida coloração visível (nesse caso, vermelha). Na reação de Seliwanoff o ácido clorídrico causará a desidratação do carboidrato e o fenol resorcinol reagirá com o furfural e o HMF. Esse teste quando for positivo apresentará coloração vermelha indicando que houve a formação do complexo entre furfural ou HMF com o resorcinol, o que nos permiti diferenciar aldoses de cetoses porque a reação com a cetose é mais rápida e mais intensa. Isso porque a formação do furfural é mais fácil que a formação do hidroximetilfurfural. Teste de Benedict O Reagente de Benedict, é um reagente químico de coloração azul, desenvolvido pelo químico americano Stanley Rossiter Benedict, utilizado para detectar a presença de açúcares e açúcares redutores em diversas substâncias, tais como a glicose, galactose, lactose, maltose e manose. O reagente é basicamente uma solução de sulfato cúprico em meio alcalino podendo ser preparado através do carbonato de sódio, citrato de sódio e sulfato cúprico. Segundo Solomons (2001) o reagente de benedict foi utilizado há alguns anos para identificar portadores de diabetes através da presença de açúcares redutores, principalmente a glicose, em sua urina. A presença destes confere coloração castanha no teste de Benedict devido à reação de redução do íon Cu2+. 2. OBJETIVOS Identificar a presença de açúcares redutores através dos testes propostos. 3. MATERIAL E MÉTODOS 3.1 MATERIAL Para a execução do experimento, foi necessária a utilização dos seguintes materiais: Soluções de: Glicose; Frutose; Sacarose; Lactose; Amido; Sacarose Hidrolisada e Amido Hidrolisado Reagente de Lugol; Reagente de Selianoff; Reagente de Benedict. 3.2 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Teste de Lugol Em tubos de ensaio separados, adicione 1 mL de solução de glicose, frutose, sacarose, lactose, amido, sacarose hidrolisada e amido hidrolisado. Faça um tubo contendo água destilada como controle negativo. Adicione 2,5mL de reagente de Benedict em cada tubo. Misture e coloque todos ao mesmo tempo em banho maria. Espere de 4-6 minutos para visualizar o resultado. Teste de Seliwanoff Coloque em diferentes tubos de ensaio três gotas de solução dos seguintes carboidratos: glicose, frutose, sacarose, lactose, amido hidrolisado. Faça um tubo contendo água destilada como controle negativo. Adicione 5 mL de reagente de Seliwanoff em cada tubo, homogenize e coloque os tubos em banho maria. Espere 4-5 minutos para visualizar os resultados. Teste de Benedict Em tubos de ensaio separados, adicione 1mL de solução de glicose, frutose, sacarose, lactose,amido hidrolisado. Faça um tubo de ensaio como controle negativo. Adicione 2,5 mL de reagente de Benedict em cada tudo. Misture e coloque todos os tubos ao mesmo tempo em banho maria. Espere de 4-6 minutos para visualização dos resultados. 4. RESULTADOS E DISCUSSÃO Teste de Benedict O teste de Benedict é uma modificação do teste de Fehling é usado para detectar a presença de açúcares redutores. Neste teste o tartarato é substituído pelo citrato, o que gera um complexo mais estável, fazendo com que uma única solução possa ser armazenada sem deteriorar-se. Além disso, o teste de Benedict é muito mais sensível que o de Fehling, podendo detectar a presença de carboidratos em menores concentrações e apresentando um gradiente de cores do azul (negativo), passando pelo verde, amarelo, laranja e vermelho para as mais concentradas. Imagem 1: Resultado do teste de Benedict. Imagem de autoria própria. Foram realizados os testes para glicose, frutose, sacarose, lactose, amido, sacarose hidrolisada e amido hidrolisado, os mesmos apresentaram-se negativo para sacarose, amido e amido hidrolisado, para as outras amostras deram positivo indicando que esses possuem açucares redutores, acima na imagem 1 fica evidenciado os resultados. Teste Seliwanoff O teste de Seliwanoff é um teste que conseguediferenciar aldoses de cetoses devido a diferenças na velocidade e intensidade da reação. É usado HCl como agente desidratante e como fenol o resorcinol para reagir com o furfural e nessas condições as cetoses se desidratam mais rapido que as aldoses, que já se encontram na forma furanosídica propícia para a formação do 5-(hidroximetil)-furfural. Já as aldoses se encontrame na forma piranosídica, e teriam que rearranjar para a forma furanosídica para desidratar, o que torna a reação mais lenta e menos eficaz. Em seguida ocorre a adição de duas moléculas de resorcinol, formando um produto vermelho. Já para as aldoses a reação é mais lenta e o produto em geral é rosa pálido. Esse teste foi realizado para a glicose (negativo), frutose (positivo), sacarose (positivo), lactose (negativo), amido (negativo), sacarose hidrolisada (positivo). Teste de Lugol O reagente de lugol contém iodo que fica aprisionado dentro da cadeia de polissacarídeos formando um complexo de I6-Polissacarídeo A presença de amido é confirmada por coloração azul intensa. Nessa pratica usou-se glicose que deu negativo, frutose teste negativo, sacarose teste negativo, lactose teste negativo, amido que deu positivo, amido hidrolisado que também deu positivo, como era de se esperar. Se fosse usado Glicogênio como carboidrato acredita-se que daria positivo, pois, “os complexos iodo-glicogênio apresenta cor avermelhada, menos intensa do que a cor azul do complexo iodo-amido. Tal diferença é justamente devido ao tamanho da cadeia e a ramificação. O glicogênio apresenta maior quantidade de ramificações do que o amido, (JUNIOR, 2007)”. Segue abaixo a imagem dois para melhor compreensão da prática realizada e visualização dos resultados. Imagem 2. Resultados do Teste de Lugol. Fonte: Próprio autor. 5. CONCLUSÃO foi possível perceber que os experimentos realizados são de fácil preparação e podem ser utilizados para a introduzir ou revisar conceitos químicos e bioquímicos, principalmente no que diz respeito à compreensão de conceitos relacionados aos carboidratos. No teste de benedict, foi possível identificar que quando a reação é positiva observa-se o aparecimento de coloração avermelhada, que indica a formação do complexo entre furfural ou HMF com o resorcinol e, fica evidente que através desse resultado o uso do teste de Benedict para evidenciar a capacidade redutora entre os açúcares é alcançado com sucesso. Já no teste de Seliwanoff observa-se que quando o reagente é adicionado a uma solução contendo uma aldose, a cor da solução muda para rosa. Verificou-se após a aplicação dos testes de lugol, o aspecto colorimétrico não transparente da amostra foi alterado para amarelo- alaranjado demonstrando um resultado negativo das amostras. O controle negativo, que era essencialmente composto por água, acusou resultado negativo para todos os testes, como era de se esperar. O emprego destes experimentos propicia a contextualização do ensino de funções orgânicas e reações de oxi-redução na contextualização e ensino sobre a identificação de açúcares redutores. 6. REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA DAVID, L. Nelson, MICHAEL M. Cox. Princípios de Bioquímica de lehninger. 5 edição. Porto Alegre: Artmed, 2011, 425p. Volume Único. SOLOMONS, F. Química Orgânica. Trad. W.O. Lin. Rio de Janeiro: LTC, 2001. Souza. Karina A.F.D. Diferenciação de Aldoses e Cetoses: Reação de Seliwanoff. Disponível em: <http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_ch/seliwanoff.htm>. Acessado em 15 de Mar. 2016. Souza. Karina A.F.D. Pesquisa de polissacarídeos: reação com iodo. Disponível em: <http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_ch/teste_amido.htm>
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