08 NOÇÕESBIOSSEGURAÇA

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O Laboratório de Microbiologia
Biossegurança e seus Requisitos Básicos
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Microbiologia
Microrganismos incluem: 
Bactérias
Fungos
Vírus
Protozoários
Algas unicelulares,
Príons. 
Apenas uma parcela muito restrita
do total está relacionada com as doenças
humanas, animais e vegetais.
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Boas Práticas Laboratorial
(BPL)
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BPL – Processos Operacionais
Procedimentos Pré-analíticos
Procedimentos Analíticos
Procedimentos pós-analíticos
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Introdução
Elaborar e viabilizar normas para coleta, conservação e transporte de material;
Estabelecer e executar rotinas microbiológicas
Efetuar C.Q. das atividades e processos de esterilização
Divulgar e implementar as normas de Biossegurança
Participar em conjunto com a CCIH no rastreamento epidemiológico nos surtos de infecção hospitalar e da resistência a drogas
Executar outras atividades de natureza não rotineira – estudos microbiológicos de materiais inanimados, desinfetantes, etc.
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Segurança Laboratorial
Os profisisonais de laboratórios estão sob risco de desenvolver por exposição a agentes infecciosos, produtos químicos tóxicos e inflamáveis, etc.
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Responsabilidade Legal da Segurança em ambientes de trabalho 
 ADMINITRADORES DE HOSPITAIS E LABORATÓRIOS
Mas é só deles?
Profissionais de laboratórios
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Profissionais de laboratórios
Todos os funcionários devem aderir às 
técnicas microbiológicas seguras 
Incorporação das normas de segurnaça na rotina
MANUAL DE SEGURANÇA DE LABORATÓRIO
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Biossegurança
Definição 
“Biossegurança é o conjunto de ações voltadas para prevenção, minimização ou eliminação de riscos inerentes às atividades de pesquisas, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços que possam comprometer a saúde do homem, dos animais , do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos”
Portaria no 228, 28 de Abril de 1998
Ministério do Estado do Exército
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HISTÓRICO
Nos últimos 150 anos, os avanços tecnológicos e a dedicação de diversos pesquisadores possibilitaram o crescimento do conhecimento com relação à transmissão, progressão, prevenção e tratamento das doenças.
Ignaz Philipp Semmelweis, em 1846, verificou na clínica obstétrica do Hospital de Viena que a febre puerperal era responsável pela mortalidade de 10 a 30% das parturientes e passou a sustentar que esta infecção era transmitida de uma mulher para outra pelas mãos dos médicos e parteiras.
Trabalhou para convencer seus colegas de que a lavagem das mãos com soluções cloradas antes do atendimento era fundamental para prevenção da doença. 
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HISTÓRICO
Joseph Lister, já em 1860, pesquisava uma maneira de manter as incisões cirúrgicas livres de contaminação, uma vez que as mortes por infecção cirúrgica naquela época eram freqüentes.
Em 1864, o cirurgião constatou que 45% dos seus pacientes morreram desta forma.
Lister passou a embeber compressas cirúrgicas em uma solução diluída de ácido carbólico (fenol), além de borrifar a sala com esta substânica química. 
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HISTÓRICO
Florence Nightingale, em 1863, reduziu a incidência de infecção hospitalar com medidas de higiene e limpeza.
Louis Pasteur, em 1864, derrubou a teoria da geração espontânea e desenvolveu a técnica de pasteurização.
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HISTÓRICO
Nos últimos 150 anos, os avanços tecnológicos e a dedicação de diversos pesquisadores possibilitaram o crescimento do conhecimento com relação à transmissão, progressão, prevenção e tratamento das doenças. 
Gustav Neuber, em 1865, preconizou o uso de avental cirúrgico.
Robert Koch, em 1876, descreveu os postulados de Koch, demostrando, pela primeira vez, que uma doença infecciosa específica é causada por um microsrganismo específico. 
Von Bergmann, em 1886, introduziu o processo de esterilização pelo calor úmido, enquanto que Stewart Halsted, o uso de luvas cirúrgicas.
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Símbolos de biossegurança
Símbolo de risco biológico
Desenvolvido em 1966 pelo engenheiro Charles Baldwin ( da Dow Chemical) a pedido do CDC
Visava padronização na identificação dos agentes biológicos de risco.
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 “O acesso a informação contribui para melhorar as condições de segurança dos profissionais , livrando-os dos riscos desnecessários que enfrentam no seu dia-a-dia.” 
Educar é preciso
Sistema de Biossegurança
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GESTÃO DA BIOSSEGURANÇA
	Biossegurança é uma parte integrante e importante do sistema e das políticas para a qualidade de uma empresa, exigindo de todos os funcionários uma norma de conduta eficaz para alcançar um nível satisfatório de segurança diante dos riscos usuais ou especiais .
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estar treinado para interromper quaisquer atividades que ofereçam risco imediato;
identificar e registrar qualquer problema relativo à segurança;
iniciar, recomendar ou providenciar AÇÕES CORRETIVAS;
iniciar, acompanhar e registrar a implementação das ações corretivas.
Sistema de Biossegurança
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BIOSSEGURANÇA - Procedimentos:
procedimentos para identificação e monitorização dos riscos;
 procedimento das boas práticas no manuseio de substâncias;
manutenção e distribuição de instruções sobre o material de segurança;
procedimentos sobre limpeza e descontaminação de equipamentos e de superfícies;
 protocolos para os casos de acidente;
 método e documentação do treinamento do pessoal.
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Princípios de Biossegurança
Contenção
Termo usado para descrever os métodos de segurança utilizados na manipulação de material infeccioso em um meio laboratorial onde estão sendo manipulados ou mantidos.
Objetivo da Contenção
Reduzir ou eliminar a exposição da equipe do laboratório, de outras pessoas e do meio ambiente em geral aos agentes potencialmente perigosos
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Princípios de Biossegurança
Contenção Primária
Proteção da equipe do laboratório e do meio de trabalho contra exposição de agentes infecciosos
Proporcionada por boa técncia de microbiologia e pelo uso de equipamento de segurança adequado.
Uso de vacina – elevado nível de proteção individual
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Princípios de Biossegurança
Contenção Secundária
Proteção do meio ambiente externo ap laboratório contra os agentes infecciosos
Proporcionada pela combinação de um ptojeto das instalações e das práticas operacionais.
Contenção = prática e técnica laboratorial + equipamento de segurança + projeto da instalação 
- NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA-
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Princípios de Biossegurança
Equipamento de segurança (Barreiras Primárias)
Cabines de Segurança Biológica (CSB)
Recipientes adequados
Projeto e Construção das Instalações (Barreiras secundárias)
Isolamento da área de trabalho ao acesso público
Disp. De área para descontaminação (autoclave)
Área para lavagem de mãos (pias )
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Níveis de Biossegurança
Responsável pela avaliação dos riscos e pela aplicação adequada dos níveis de biossegurança recomendados:
Diretor do laboratório
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CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA
 Nível de Biossegurança 1 (NB-1 ou BL-1): 
Adequado ao trabalho que envolva agentes bem caracterizados e conhecido por não provocarem doenças em seres humanos e envolvam riscos mínimos ao pessoal de laboratório e ao meio ambiente (laboratório básico). Ex.: lactobacilos
Sem indicação de uso de barreiras primárias e secundárias
É obrigatório ter uma pia para lavagem de mãos
 
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- Fonte: Laboratorio Virtual Fiocruz
1- Área administrativa
2-Área de LAboratorio
1
2
CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA - Laboratório NB-1 
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Adequado ao trabalho que envolva agentes de risco moderado para pessoas e para o meio ambiente. 
É necessário:
Treinamento especifico no manejo a agentes patogênicos e supervisão de um profissional competente
O acesso ao laboratório deve ser limitado durante os procediementos operacionais
CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA - NB-2
ou BL
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c. Precauções extremas serão tomadas com objetos pérfuro-cortantes
d. Se há procedimentos com possibilidades de formação de aerossóis e borrifos infecciosos devem ser conduzidos em cabine de segurança biológicas ou outros equipamentos de contenção física.
CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA - NB-2 ou BL
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Laboratório NB-2 - Fonte: Laboratorio Virtual Fiocruz
CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA - NB-2
1 – Área Administrativa
2 – Área Laboratorial
Bancadas
CSB
Área de suporte
1
2
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NB-2
 Bancadas: 
Profundidade de 0,75m aproximadamente
Altura entre 0,75m e 0,90m, conforme a posição de trabalhos em pé ou sentado. 
Espaço, na parte posterior, de cerca de 0,20m , ou espaço entre bancadas de aproximadamente 0,70m, para a distribuição das instalações de serviços
As superfície das bancadas devem ser revestidas com materiais lisos, sem emendas ou ranhuras, adotados de acordo com o tipo de uso e de fatores como umidade, peso de materiais ou de equipamentos, resistente ao calor moderado e aos solventes orgânicos, ácidos, álcalis e químicos usados para a descontaminação da superfície de trabalho e dos equipamentos. 
As prateleiras superiores, castelos, racks e volantes para colocação de materiais de pequeno volume e peso devem ser utilizadas apenas durante a realização dos procedimentos laboratoriais. 
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NB-2
 Cabines de Segurança Biológica
Cabines de segurança biológica (Classe I ou II) e outro(s) equipamento(s) de proteção adequado(s) ou dispositivo(s) de contenção física quando: 
Sejam realizados procedimentos com elevado potencial de criação de aerossóis, como centrifugação, trituração, homogeneização, agitação vigorosa, ruptura por sonicação, abertura de recipientes contendo material onde a pressão interna possa ser maior que a pressão ambiental e em cultura de tecidos infectados ou de ovos embrionados; 
Altas concentrações ou grandes volumes de materiais biológicos patogênicos. Tais materiais só poderão ser centrifugados fora de cabines de segurança se forem utilizadas centrífugas de segurança e frascos lacrados. Estes devem ser abertos no interior da cabine de segurança biológica.
Exercíco: Tipos de Cabine de Segurança Biológica
 Descontaminação de cabines de Segurança Biológica
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Cabines de segurança biológica
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Pias NB-2
O piso do laboratório deve ser nivelado, revestidos com materiais não porosos que apresentem um menor número possível de juntas, antiderrapantes, laváveis, resistentes à produtos químicos, sem reentrâncias e com rodapés aredondados
 
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NB-2
O teto deve ser nivelado, rebaixados ou não, executados com material sólido, contínuo e sem reentrâncias, impermeável, não poroso, resistente à gases e produtos químicos. Quando o teto for rebaixado, deve ser estruturado com malha reforçada, executado com material sólido que proporcione uma vedação contínua, tais como resinas monolíticas, ou similar, possuir com cantos arredondados, resistentes a gases e produtos químicos. 
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CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA - Contenção de NB-3
Destina-se ao trabalho com agentes da classe de risco 3, que acarretam elevado risco individual e baixo risco para a comunidade.
 É aplicável para laboratórios clínicos, de diagnóstico, ensino e pesquisa ou de produção onde o trabalho com agentes exóticos possa causar doenças sérias ou potencialmente fatais resultantes de exposição por inalação. 
A equipe profissional deve possuir treinamento específico no manejo de agentes patogênicos, potencialmente letais.
 Exige a intensificação dos programas de boas práticas laboratoriais e de segurança, além da existência obrigatória de dispositivos de segurança e do uso, igualmente obrigatório, de cabine de segurança biológica. 
Os trabalhadores devem utilizar equipamentos de proteção individual específicos para esta área.
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Area 1
A) Guiche de Transferencia
B) CSB
C) Bancada
D) Saida de Emergencia
A
B
C
D
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NB-3 - Area 1 
A) Guichê de Transferência
A entrada de materiais de consumo e de amostras biológicas (humanas e animais) deve ser feita através de câmara pressurizada, pass through ou outro sistema de barreira como autoclaves, tanques de imersão, guichês. 
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Bancadas NB-3
NB-3 - Area 1
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Cabines de Seguranca Biologica NB-3
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A
Area 2
A) EPI
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Contencao NB-3
Roupas protetoras específicas à área laboratorial NB3. 
É proibido o uso dos EPI específicos fora da área de biocontenção NB-3. 
É obrigatório o uso de roupas de proteção (macacões, uniformes que possuam menor solução de descontinuidade, não se admitindo roupas abotoadas na frente), uso de máscaras, gorros, luvas, pró-pés ou sapatilhas. 
A colocação e/ou retirada da roupa de proteção e outros equipamentos de proteção individual é feita na ante-câmara pressurizada (air lock) ou vestiário adjacente à área de contenção do laboratório, com pressão diferenciada. 
Oculos de seguranca e protetores faciais ou visores (barreira de acrílico ou plástico rígido, que protege o terço médio e inferior da face) devem ser utilizados.
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CLASSIFICAÇÃO DOS NÍVEIS LABORATORIAIS
Nível 4 ( NB-4 ou Bl-4): 
Destinadas ao isolamento, identificação, cultivo e estocagem de microorganismos potencialmente transmissíveis por via respiratória, capazes de causar doenças humanas graves ou potencialmente letais, para as quais não existem tratamento e medidas profiláticas eficazes (laboratório de contenção máxima).
Portaria No 228, de 28 de abril de 1998
 Ministério do Estado do Exército
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NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
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Boas Práticas
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Boas Praticas: Área Física
1. Ambiente amplo, com paredes, teto e chão de fácil limpeza, antiderrapante e resistentes
2. Iluminação e Água (infra-estrutura)
3. Aparelhos dispostos em local apropriado
4. Bancadas fixas, impermeáveis e resistentes
5. Mobília de fácil limpeza
6. Portas fechadas e/ou do tipo “vai e vem”
7. Ventilação: Manutenção dos filtros dos condicionadores de ar e capelas.
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Voltagem de Aparelhos
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Objetos Pessoais e Alimentos
Estocagem em áreas próprias (fora da área de trabalho)
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Cuidados Pessoais
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Boas Praticas Lavagem de Mãos
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Risco X Perigos
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Analises de Riscos
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Riscos Químicos
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Riscos Físicos
Autoclave
Forno de Pasteur
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Laboratório Fora do Padrão
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Laboratório Padronizado
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Riscos de Acidentes
- Instrução inadequada
- Supervisão ineficiente
- Práticas inadequadas
- Mau uso de EPI
- Higiene pessoal
- Fatores de risco
- Planejamento falho
- Não observar normas
- Manutenção falha
- Lay-out incorreto
- Jornada excessiva
- Motivação
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Métodos de controle para Agentes de Risco 
- BOAS PRÁTICAS DE LABORATÓRIO 
Observância de práticas e técnicas microbiológicas padronizadas.
Conhecimento prévio dos riscos.
Treinamento de segurança apropriado.
Manual de biossegurança
dentificação dos riscos, especificação das práticas, procedimentos para eliminação de riscos).
RECOMENDAÇÕES GERAIS...
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NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
ÁREA FÍSICA:
A área de trabalho deve ser organizada de maneira que os materiais, equipamentos e reagentes utilizados na rotina, fiquem disponíveis e de fácil acesso;
As áreas devem ser sinalizadas com etiquetas quanto aos riscos;
A temperatura deve ser mantida entre 18oC e 25oC;
As janelas e portas devem ser mantidas fechadas, evitando-se a formação de ar e entrada de insetos;
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NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
ÁREA FÍSICA:
As bancadas devem ser protegidas com papel absorvente;
As tomadas e os equipamentos devem ser identificados quanto a voltagem;
Devem estar disponíveis chuveiros e lava-olhos nas áreas de risco;
Os equipamentos de incêndio devem estar
em todas as áreas e o pessoal deve ser treinado para a utilização dos mesmos
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PARAMENTAÇÃO :
Uso obrigatório de avental descartável de mangas longas permanentemente fechados para realização dos trabalhos nos laboratórios;
Uso obrigatório de luvas para todos os procedimentos que envolvam manipulação de material biológico;
Uso obrigatório de luvas especiais para manipulação de peças quentes e frias;
Uso obrigatório de avental especial para entrada em câmara fria (-18oC);
NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
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NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
PARAMENTAÇÃO :
Uso de óculos de proteção ou protetores de face em procedimentos que exponham esta área ao risco. Ex: aerossóis, ultra-violeta, substâncias químicas;
É proibido o uso de aventais na área destinadas a alimentação (refeitório);
Uso exclusivo de sapatos fechados nas áreas de
 trabalho;
Recomenda-se o uso mínimo necessário de jóias e adereços;
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PARAMENTAÇÃO :
É obrigatório o uso de roupas adequadas de forma a não permitir contato com materiais considerados potencialmente contaminados;
Os cabelos longos devem estar presos durante a manipulação de materiais considerados potencialmente contaminados;
As unhas devem ser mantidas limpas/curtas;
As áreas devem ser mantidas limpas e livre de todo e qualquer material não relacionado às atividades nelas executadas.
NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
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GERAIS :
Objetos pessoais devem ser guardados em armário localizado preferencialmente fora do laboratório;
É obrigatório a lavagem das mãos: antes e após a manipulação de material biológico e ao deixar as áreas de trabalho;
Todos os procedimentos devem ser conduzidos com o máximo cuidado, evitando-se a formação de aerossóis;
A circulação deve ser restrita a funcionários do setor ou a pessoas autorizadas;
NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
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NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
GERAIS :
É proibido a presença de plantas, animais e crianças nas áreas restritas;
É proibido FUMAR, BEBER ou COMER nas áreas de trabalho;
Os alimentos diários devem ser mantidos em geladeiras do refeitório;
Só poderá ser aberta com luvas, as portas que possuírem puxadores exclusivos e identificados para este fim;
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GERAIS :
O uso de aparelho telefônico, microcomputadores e terminais deve ser realizado sem uso de luvas ou com luvas de proteção, reservadas para tal fim. Quando o uso de luvas for indispensável o equipamento deve ser protegido com filme plástico;
O procedimento de pipetagem deve ser utilizando-se dispositivos mecânicos auxiliares como: peras de borracha, pipetadores automáticos;
Nunca usar vidrarias trincadas ou quebradas.
NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA
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GERAIS :
 	Todos os profissionais de saúde devem ser submetidos à vigilância médica através dos exames periódicos e incluídos em programas de imunização indicados (tétano e hepatite B).
 Treinamentos periódicos e cobrança quanto às recomendações de precauções universais serão sempre necessário
NORMAS BÁSICAS DE BIOSSEGURANÇA