Tabela Comparativa

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Tabela Comparativa da Metodologias de Estudo da Célula
DisciplinaBIOLOGIA CELULAR – 1ºSemestre2013
Alunos:GabrielaBertaglia– LetíciaBenini– David Spressão
Métodos de Observação
Conceito básico da técnica
Tipos de equipamentos envolvidos e suas especificidades
Formas de preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Microscopia de Lux
Aumenta consideravelmentea imagem, através de seus sistemas de lentes. Geralmente a imagem fica invertida verticalmente e horizontalmente.
Base(oupí), fonte de luz, parafusos de foco, braço(ou coluna), condensador, platina,charriot, objetivas, revólver, canhão ocular, diafragma.
Quandofor focar o objeto, começar pela lente de menor aumento, utilizando interface líquida ou óleo de imersão, dependendo da resolução.
Fornecer imagens aumentadas e detalhadasde objetos, células e órgãos.
Microscopia convencional
Transformaa diferença de raios luminosos e as diferenças de intensidade, além de fornecer resultados quantitativos.
Detector de luz, filtro polarizador,prisma, lente objetiva, espécime, condensador, filtro, fluente de luz.
Permitedeterminar mudanças no índice de refração, além disso, as variações de fase podem se refletir em mudanças de cores.
Microscopia de contraste de fase
É dotado de um sistema ópticoespecial que transforma a diferença de fase dos raios luminosos e diferenças de intensidade.
Anel de fase, luzdefletora, objetiva, espécime, condensador, anel anular, luz da fonte.
É empregado no estudo de células vivas e de grande utilidade para observaçãode células cultivadas.
Microscopia de campo escuro
Dispersão da luz ao níveldos limites entre os diferentes componentes celulares sempre que estes possuam índices de refração diferentes.
Lentesobjetivas, condensador especial com disco opaco que bloqueia a luz.
A lâmina deve conter algum objeto com índicede refração diferente do meio.
Utilizada na observaçãode micro organismos não corados, suspensos em líquidos, preparações à fresco e em gota pendente, plânctons, bactérias, grãos de pólen.
Microscopia de polarização
Estudarcertos aspectos da organização molecular dos constituintes celulares sob a luz polarizada.
Osmesmos do microscópio de luz, acrescidos de dois prismas ou dois discos polaroides ( um deles funciona como polarizador e o outro como analisador).
Os materiaisutilizados nas observações precisam ser birrefringentes.
Maisconhecida por usas aplicações geológicas (estudo de minerais e refinados industriais).
Microscopia de fluorescência
Consiste em permitir que a luz excitação irradie a amostra e depois separe a luz emitida mais fraca para formar a imagem.
Espelho dicroico, filtro de barreira, fonte de luz de mercúrio, filtro de excitação, objetiva, espécime.
A mais utilizada consiste na colheita do tecido, fixação,processamento, inclusão, corte e coloração.
Suaprincipal aplicação ocorre em combinação com métodos imunológicos nas técnicasimunocitoquímicasque utilizam anticorpos conjugados a compostos fluorescentes.
Microscopiaconfocala laser
Por ter uma iluminação feita porum delgado feixe de raios laser, que varre o corte iluminando apenas ponto por ponto, em um determinado plano das célula, formando uma imagem nítida.
Detector, diafragma, fonte de luz, espelho dicroico, objetiva, plano focal, espécime.
O material a ser observadodeve ser espesso, sem corar, vivo ou não.
Obtençãode imagens valiosas de amostras vivas e de informação computadorizada tridimensional na pesquisa biológica, na análise químicas de materiais e de moléculas marcadas comfluorocromos.
Métodos de Observação
Conceito básico da técnica
Tipos de equipamentos envolvidos e suas especificidades
Formas de preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Métodos de Observação
Conceito básico da técnica
Tipos de equipamentos envolvidos e suas especificidades
Formas de preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Microscopiaeletrônica de transmissão
Utilizaçãode feixes de elétrons que acelerados por umaddpde 60.000 Volts tem comprimento de onda de 0,005nm. Com esse feixe conseguiu-se obter imagens muito maiores que os do microscópio óptico.
Sistema de vácuo, portaobjetos do espécime, canhão de elétrons, lentes eletrônicas, aberturas.
Fixação em solução de aldeídoglutáricotamponadoa pH 7,2. Usa-se também a fixação em solução detetróxidode ósmio. O ósmio além de fixador, atua como contraste, por ser um elemento de número de massa elevado, que desvia os elétrons.
Análisesmorfológicas, caracterização de precipitados e determinação de parâmetros de rede.
Microscopiaeletrônica de alta voltagem
Análise de processosnão periódicos rápidos, induzidos por laser na escala de tempo de nano segundos.
Tem um funcionamento e estrutura semelhantes ao do microscópio eletrônico convencional,porém, são aparelhos extremamente grandes, chegando a ocupar edifícios de três andares.
Observar a organização tridimensionaldo citoesqueleto.
Microscopia eletrônica de varredura
Fornecer imagens tridimensionais,pelo exame da superfície das estruturas.
Canhãode elétrons, bobina de alimentação, lentes condensadoras, bobinas de varredura, bobinas para varredura, bobina para deslocamento fino, correção de astigmatismo, lentes objetivas, fonte de alta tensão, tubo fotomultiplicador,centilador, coletor, vácuo, motor.
Fixação em aldeídoglutáricoou outro fixador,é cuidadosamente dissecado e recoberto por delgada camada condutora de eletricidade. Em geral ouro ou platina depositados a vácuo.
Estudo dasuperfície de células mantidas em cultivo.
Métodos de Observação
Conceito básico da técnica
Tipos de equipamentos envolvidos e suas especificidades
Formas de preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Microscopia de tunelamento quântico
Ampliar a potênciausual do olho humano certa de 1 milhão de vezes.
Tunelamento,voltagem amostra, TuboPiezolítricocomeletrodos, controle de voltagem, tunelamento de amplificação de corrente, unidade de escaneamento e controle de distância.
Grande aplicação em desenvolvimentotecnológico e instrumental. O microscópio de tunelamento funciona melhor em metais.
Microscopia de força atômica
A fina ponta de prova não maisé responsável por tunelamento de elétrons, mas interage com a superfície da amostra por força de Van derWaals. Há três modos básicos de operação: contato, não contato, dinâmico.
Assemelha-seao microscópio de tunelamento quântico, porém apresenta um micro espelho e um feixe de laser sobre a agulha.
Não é necessáriofazer qualquer tratamento superficial.
Contribuição significativa para a nanotecnologia.Movimento e forma de bactérias. Avaliação da estrutura atômica de biomoléculas.
Métodos deDetecção
Conceito básico da técnica
Formasde preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Criofratura
Congelamentorápido do tecido em nitrogênio líquido, e em sua fratura e relevo, a mediante a sublimação da água no vácuo.
As células sãocongeladas à temperatura do nitrogênio líquido
(-196°C) e depois fraturadas com uma lâmina de bisturi.
Possibilita uma forma de visualização do lado interno das membranas celulares.
Culturadecéluas
Processo pelo qual,células procarióticas e eucarióticas são desenvolvidas sob condições controladas.
Com o conhecimento das necessidadesnutricionais das células eucariotas, é possível manter e crescer células em meio sintético enriquecido com soro.
Umdos métodos mais utilizados para elucidar problemas de biologia celular e para o estudo das células vivas.
Citoquímica
Identificaçãodos diferentes compostos químicos das células, com uma avaliação qualitativa e quantitativa de tais componentes.
Substânciaimobilizada no seu local de origem e reconhecida por um procedimento específico.
Identificaçãode compostos químicos em seus locais de origem.
Imunocitoquímica
Baseia-se nas propriedadesantigênicas dos componentes celulares.
Utiliza-seanticorpos marcados para a sua detecção.
Possibilidade de conjugar um marcador com um anticorpo, proteína ou composto sem provocar qualquer
tipo de dano à ligação.
Radioautografia
Marcaçãode componentes celulares com radioisótopos demonstrados pela capacidades de interagir com brometo de prata das emulsões fotográficas.
Ocorte do tecido é submerso na emulsão líquida a 45°C, deixando à temperatura ambiente, formando uma película. São guardados a fim de que a radiação atue sobre a película.
Muitoempregada para estudar os locais de síntese e o destino de macromoléculas, podendo ser aplicada como uma técnicacitoquímicapara detecção de isótopos radioativos.
Imunomicroscopia eletrônica
É uma técnica que tenta aumentar a acuidade da microscopiaeletrônica, permitindo fazer um diagnóstico de um tipo de vírus.
Marca-se com antígeno um determinado vírus(um anticorpo para um antígenovírico).
São técnicas caras, portanto sãoraramente usadas para um diagnóstico na prática clínica. É quase só destinada à investigação.
Métodos deDetecção
Conceito básico da técnica
Formasde preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Métodos deSeparação
(a) conceito básico da técnica
(c)Formasde preparação das amostras
(d)Aplicabilidade geral de cada método
Centrifugação
Permiteo fracionamento celular e a obtenção de frações relativamente puras.
As organelas são separadas pelacentrifugação de um homogeneizado de células em que as membranas plasmáticas são rompidas e os constituintes dispersos no meio líquido com sacarose.
Obtençãode organelas celulares em estados de pureza e estudo de suas propriedades químicas, físicas e biológicas.
Cromatografia
.Envolve uma série de processos de separação de misturas através de duas fases: estacionária e móvel, para identificação de seus componentes.
Dissolução, extração doanalito, concentração de umanalitodiluído dentro dos limites de determinação, conversão química e remoção de espécies interferentes.
Utilizado para identificação de compostos,purificação de compostos e separação de substâncias indesejáveis.
Eletroforese
Migração de espécies carregadas eletricamente, que ocorre quando as mesmas são dissolvidasou suspensas em um eletrólito, através do qual uma correte elétrica é aplicada.
Dissoluçãodas proteínas em solução de sódiododecilsulfonato(SDS).
Determinação do tamanhodas moléculas proteicas.
Métodos deSeparação
Conceito básico da técnica
Formasde preparação das amostras
Aplicabilidade geral de cada método
Microdissecçãoa laser
Torna possível a análise molecularde populações celulares homogêneas obtidas de amostras teciduais.
Envolve o uso coordenadode microscopia, laser e robótica para localizar, dissecar e capturar o material celular.
Obtençãode material celular homogêneo de tecidos ou de preparados citológicos heterogêneos. O material obtido pode ser usado em uma série de técnicas como expressão gênica eproteômicas.
RT-PCR
Éuma reação datranscriptasereversa, seguida de reação em cadeia da polimerase.
Desnaturaçãodo DNA por aquecimento, em seguida são intercaladas duas classes deoligonucleotídeos promotores complementares da sequência situada nas extremidades da fita de DNA que se pretende amplificar.
A técnica é amplamente utilizada para verificar a expressão gênica,uma vez que analisa o RNA responsável pela síntese de proteína.