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Microscopia Prof.ª Dr.ª Horacinna Cavalcante O Microscópio: É um aparelho utilizado para visualizar estruturas minúsculas, como as células, por exemplo. Dividem-se basicamente em duas categorias: • Microscópio óptico- funciona com um conjunto de lentes (ocular e objetiva) que ampliam a imagem transpassada por um feixe de luz; • Microscópio eletrônico- ampliam a imagem por meio de feixes de elétrons. Figura 1: Microscópio de luz e eletrônico Figura 2: Microscópio óptico e eletrônico Microscópio óptico • Microscópio óptico: funciona com um conjunto de lentes (ocular e objetiva) que ampliam a imagem transpassada por um feixe de luz. Microscópio óptico • O microscópio óptico é constituído por parte mecânica e óptica. • A parte mecânica que confere suporte e permite controlar as lâminas e a parte óptica que amplia as imagens. Microscópio óptico • A base mecânica sendo constituída no geral de base, braço, revólver, platina, charriot, parafusos macro e micrométrico. Figura 3: Microscópio óptico Microscópio óptico • A parte óptica é composta por condensador, diafragma, lentes objetivas, lentes oculares e fonte luminosa. Figura 4: Microscópio óptico Microscópio óptico Parte mecânica • Pé ou base – confere estabilidade ao microscópio. • Braço ou coluna – Peça fixa a base, na qual estão fixadas as demais partes constituintes do microscópio. Figura 5: Microscópio óptico Microscópio óptico • Tubo ou canhão – Cilindro que suporta os sistemas de lentes, localizando-se na extremidade superior a ocular e na inferior o revólver com objetivas. Figura 6: Microscópio óptico Microscópio óptico • Mesa (platina) – Peça que pode variar de formato sendo circular, quadrada ou retangular, localizando-se paralela á base, onde se coloca a preparação a observar, possuindo no centro um orifício circular ou alongado que possibilita a passagem dos raios luminosos concentrados pelo condensador. Figura 7: Microscópio óptico Microscópio óptico • Charriot – Jogo de parafusos que permite que a lâmina presa pela pinça deslize pela platina. Figura 8: Microscópio óptico Microscópio óptico • Parafuso macrométrico – Utilizado para focalizar imagem e permite uma aproximação grosseira do objeto. • Parafuso micrométrico – Utilizado para finalizar a focalização Figura 9: Microscópio óptico Microscópio óptico • Revólver – Disco adaptado à zona inferior do tubo, que suporta as objetivas de diferentes ampliações. Figura 10: Microscópio óptico Microscópio óptico Parte óptica • Condensador – Conjunto de duas ou mais lentes que convergentes que orientam e espalham regularmente a luz emitida pela fonte luminosa sobre o campo de visão do microscópio. Figura 11: Microscópio óptico Microscópio óptico Diafragma – Permite regular a passagem de mais ou menos luz pelo condensador. Figura 12: Microscópio óptico Microscópio óptico Lentes objetivas – permite ampliar a imagem do objeto (5x, 10x, 40x, 100x). As objetivas de 5x, 10x 40x são objetivas secas, pois entre as preparações e as objetivas existe apenas o ar. As objetivas de imersão necessitam o uso de óleo de imersão, o qual se coloca na lâmina. Figura 13: Microscópio óptico Microscópio óptico • Lentes oculares – permite ampliar a imagem real fornecida pela objetiva, formando uma imagem virtual. Figura 14: Microscópio óptico Microscópio óptico • Fonte luminosa – gera a luz para as observações e é situada na base do microscópio. Figura 15: Microscópio óptico Microscópio de Polarização • O emprego de um feixe luminoso polarizado permite estudar certos aspectos da organização molecular dos constituintes celulares. • Substâncias como dentes, ossos, fibras de colágeno e outras possuem um arranjo molecular interno Figura 16: Fibras de colágeno Microscópio de contraste de fase • Microscópio de contraste de fase transforma diferentes fases luminosas em diferentes intensidade luminosa Figura 17: Mic. de luz convencional Mic. de contraste de fase Microscópio de campo escuro • A célula fica com aparência brilhante e o fundo escuro. • Condensador é substituído por um condensador de fundo escuro Mic. de campo escuro - células de sangue. Microscópio de Fluorescência Utiliza luz fluorescente – permite detectar proteínas ou estruturas marcadas com compostos fluorescentes Similar ao MO, exceto pela luz empregada Luz ultravioleta e pelos 2 conjuntos de filtros que desviam os raios do olho do observador. Figura 18: Cultivo de astrócitos. Imunofluorescência Microscopia Elétrica • O microscópio eletrônico é aproximadamente 1000 vezes mais poderoso que o microscópio óptico. • O microscópio eletrônico possibilitou a visualização de estruturas celulares não visíveis no microscópio óptico, porque seu poder resolutivo é muito maior. A diferença básica entre as duas modalidades de microscopia, consiste no fato de na primeira, a imagem ser produzida por fótons e na segunda, por elétrons. • O alto poder de resolução do microscópio eletrônico de transmissão, juntamente com o grande aumento, permitem a obtenção de imagens com uma grande riqueza de detalhes. As imagens no microscópio eletrônico de transmissão são formadas pela excitação de uma tela fluorescente ou um filme fotográfico por elétrons. Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET) MET. Mais simples e mais avançado. ( Empresa Jeol) Figura 19: Microscópio eletrônico Figura 20: Fotomicrografia eletrônica de transmissão de intestino mostrando as microvilosidades •O microscópio eletrônico de varredura ou microscópio eletrônico de varrimento (MEV) é um tipo de microscópio eletrônico capaz de produzir imagens de alta resolução da superfície de uma amostra. Devido a maneira com que as imagens são criadas, imagens de MEV tem uma aparência tridimensional característica e são úteis para avaliar a estrutura superficial de uma dada amostra. Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV) Figura 21: Visualização de material biológico Figura 22: Visualização de Espermatozoides.
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