REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE- PCR

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REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE- PCR
Objetivo da técnica
Replicação do DNA invitro através de métodos químicos e físicos.
Amplificação de qualquer sequencia de DNA de amostras biologias como sangue, urina, cabelo... Amostras de microorganismos, células vegetais ou animais. 
Desenvolvida pelo americano bioquímico Kary Mullis (EUA) em 1987.
Primeira amplificação feita foi a da betaglobulina humana.
1933: primeiro Nobel. 
Aplicações
Sequenciamento direto de produtos amplificados.
Detecção de mutações em genes específicos.
Estudos diagnósticos de doenças infecciosas.
Hereditariedade- teste de paternidade.
Mapeamento genético.
Medicina forense.
Para a reação é necessário:
Primers
TAQ polimerase
DNTP
MgCl2
Tampão
H2O
DNA 
Ciclo da PCR
Realizada em termocirculador, ciclos repetidos de aquecimento e resfriamento da mistura de reação. 
A cada ciclo, o DNA é amplificado exponencialmente.
3 etapas:
DESNATURAÇÃO
Separação da dupla fira de DNA através da elevação da temperatura de 92 a 95º C.
ANELAMENTO
Ligação dos primers na fita molde na temperatura de 55º C a 65º C
Depende do tamanho e composição dos primers.
EXTENSÃO
Formação da nova fita de DNA a partir da ação da TAQ polimerase em aproximadamente 72º C.
A partir de uma fita molde (DNA de interesse) a TAQ polimerase começa a agir no ponto onde os primers foram ligados, formando assim uma nova fita que servirá de molde para o próximo ciclo. 
PCR simples ou multiplex
SIMPLES: amplificação de apenas um loci.
MULTIPLEX: amplificação simultânea de dois ou mais loci em uma única reação.
Eletroforese
A eletroforese é uma técnica de separação de partículas de acordo com sua carga elétrica e peso molecular. Permite a separação de frações de moléculas orgânicas como RNA, DNA, proteínas e enzimas, pela migração destas em um gel durante a aplicação de um potencial elétrico. 
Assim, fragmentos de DNA obtidos da técnica de PCR, poder ser separados pela aplicação de uma voltagem. Ao final do processo, as cadeias de DNA estarão próximas ao polo positivo.
Moléculas de menor peso molecular terão mais facilidade de migrar pelo gel do que as de maior peso molecular, e percorrerão uma distancia maior ficando mais próximas do polo positivo.