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Universidade Federal de Ouro Preto Departamento de Ciências Biológicas CBI 618 – Microbiologia Taxonomia e Filogenia de Microrganismos Taxonomia – É a ciência de nomear e classificar organismos vivos. Permite estabelecer relações entre grupos de organismos de modo que possamos diferenciá-los. Tipicamente, baseia-se em características fenotípicas: morfologia (estrutura), fisiologia e bioquímica dos organismos vivos. Taxa (sing. Taxon) – Grupos taxonômicos onde são agrupados organismos que compartilham características comuns. Filogenia – É a ciência que estuda a relação evolutiva de diferentes organismos visando estabelecer a história evolutiva destes organismos. Utiliza principalmente métodos moleculares para comparar características genotípicas. Conceitos Básicos Esquemas de classificação Reinos/ Domínios Organismos incluídos no esquema de classificação Carolus Linnaeus (1753) Plantas Animais Bactérias, fungos, algas e plantas Protozoários e animais superiores Ernest Haeckel (1865) Plantas Animais Protistas Algas multicelulares e plantas Animais Bactérias, protozoários, algas, fungos e leveduras Robert Whittaker (1969) Plantas Animais Protistas Fungos Monera Algas multicelulares e plantas Animais Protozoários e algas unicelulares Fungos filamentosos e leveduras Todas as bactérias (procariotos) Carl Woese (1977) Archaea Eubacteria Eucarya Metanogênicos, halofílicos e termoacidófilos Bactérias patogênicas, do solo, da água, fotossintetizantes, etc. Protozoários, algas, fungos, plantas e animais Principais sistemas de classificação dos organismos vivos O Sistema de Cinco Reinos Robert Whittaker (1969) Teoria Endossimbiótica Baseia-na na hipótese de que as células eucarióticas evoluíram de células procarióticas a partir de eventos de fusão celular. Mitocôndrias teriam evoluído quando uma proteobactéria tornou- se um “endosimbionte” numa célula hospedeira. Cloroplastos evoluíram pelo engolfamento de uma bactéria capaz de realizar fotossíntese oxigênica (cianobactéria). Cyanophora paradoxa Teoria Endossimbiótica Evolução de mitocôndrias Evidências a Favor da Teoria Endossimbiótica Filogenia Molecular Primeiras tentativas utilizaram seqüências de proteínas (1965 – 1977): Sequenciamento de proteínas foi desenvolvido antes do sequenciamento de DNA. Algumas proteínas podem ser isoladas facilmente. Mudanças na seqüência de proteínas geralmente refletem mudanças na seqüência de DNA. Filogenia Molecular Carl Woese e seus colaboradores escolheram o rRNA como uma ferramenta para estudos de sistemática molecular (cronômetro molecular): 1. Encontrado em todas as células e mesmo no genoma de organelas (mitocôndrias e cloroplastos). 2. Abundante e fácil de ser isolado e purificado. 3. Possui a mesma função em todas as células. 4. As seqüências de rRNA possuem regiões com taxas de evolução distintas. 5. Interage com várias moléculas de RNA e proteínas 6. Possui tamanho adequado para estudos comparativos e análise estatística. 30S Ribosossomo 70S rRNA 16S (~ 1500 pb) 21 Proteínas rRNA 23S rRNA 5S 34 Proteínas 50S O Sistema de Três Domínios Carl Woese (1977) A árvore da vida representa uma hipótese evolucionária e provavelmente ainda será refinada. Embora os detalhes ainda sejam debatidos, a noção fundamental dos três domínios é amplamente aceita. O melhor entendimento da história evolutiva dos seres vivos não virá da comparação de seqüências de proteínas ou rRNA, mas sim da comparação de genomas inteiros! Características que diferenciam os três domínios Classificação de Microrganismos Nomenclatura científica Sistema binomial: Gênero + epíteto específico (espécie) Espécie Bacteriana População de células com características similares. Classificação de Bactérias Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology Classificação de Microrganismos Hierarquia taxonômica Espécie Gênero Família Ordem Classe Divisão (ou Filo) Reino Domínio Métodos Para Classificação e Identificação de Microrganismos Características morfológicas (estruturais) (Identificação) Forma, arranjo, presença de flagelos, endosporos, etc. Coloração diferencial (Classificação e Identificação) • Bactérias Gram-positivas x Gram-negativas • Bactérias álcool-ácido resistentes (coloração de Ziehl-Neelsen) Características Metabólicas (Identificação) Características Metabólicas (Identificação) Características Antigênicas (Classificação e Identificação) Teste de aglutinação em lâmina Western Blotting Fagotipagem (Identificação) Sequenciamento de Aminoácidos (Classificação) Aminoácidos conservados Perfil de Ácidos Graxos (Identificação) Culturas Bacterianas Comparação do padrão de picos com os padrões de um banco de dados Cromatografia Gasosa Extração de ácidos graxos Identificação do microrganismo Q u an ti d ad e Picos de vários ácidos graxos (metil ésters) Fingerprinting de DNA (Identificação) A B C D E F G Origem Fragmentos de DNA + - DNA Clivagem com enzimas de restrição ...G AATTC... ...CTTAA G... Ex: EcoRI Sequenciamento de RNA Ribossomal (Classificação) Hibridização de Ácidos Nucléicos (Classificação e Identificação) Utilização de Sondas de DNA (Classificação e Identificação) Chaves Dicotômicas x Cladogramas Integração da Classificação Fenotípica e Filogenética: Taxonomia Polifásica
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