04 Aula Análise de Proteínas

Prévia do material em texto

WWW.MEDSTRANSFERENCIA.COM.BR
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Métodos de análise de proteínas:
• Cromatografia
• Eletroforese em Gel
• Eletroforese Bidimensional
• Western Blot
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Cromatografia: método 
físico-químico de 
fracionamento.
• Fase estacionária: material 
sólido poroso com 
propriedades químicas 
apropriadas;
• Fase móvel: solução tampão;
• A amostra proteica percola a 
matriz sólida como uma 
banda em expansão dentro 
da fase móvel.
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Cromatografia iônica:
• Fase estacionária:
polímero sintético
contendo grupos
carregados ligados
(positivos ou negativos);
• Fase móvel: com certa
concentração de sais ou
com mudança gradual de
pH.
• Proteína coletada: de
mesma carga da fase
estacionária.
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Cromatografia por
peso/tamanho:
• Fase estacionária:
grânulos de polímero que
apresentam ligações
cruzadas, com poros ou
cavidades com tamanhos
determinados.
• Proteínas coletadas
primeiramente: proteínas
maiores.
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Cromatografia por 
afinidade:
• Fase estacionária: matriz
sólida ligada à uma molécula
pela qual a proteína de
interesse tem afinidade.
• Proteínas coletadas: Que
não têm afinidade pela
molécula da matriz
• Proteínas de interesse são
retidas.
• Lavagem das proteínas
retidas.
Mais 
específico!
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Eletroforese: Migração de proteínas carregadas por um
campo elétrico
• Gel do polímero de acrilamida com ligações cruzadas;
• Potencial elétrico Força que move as macromoléculas;
• SDS: Torna as proteínas negativas e desnaturadas (a massa se torna a
única diferença)
• Proteínas de baixo peso Percorrem maior distância
• Proteínas de alto peso Ficam retidas na parte superior
• Usa-se um corante para visualizá-las.
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
Concentração 
do gel
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
VANTAGENS: 
As proteínas podem ser tanto visualizadas quanto separadas, o
que permite estimar o número de proteínas distintas em uma
mistura ou o grau de pureza de uma preparação proteica
particular. Permite, também, saber o ponto isoelétrico e a massa
molecular aproximada.
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
• Eletroforese Bidimensional
• Eletroforese em SDS + Focalização Isoelétrica Mais sensível
ANÁLISE DE PROTEÍNAS
 Blotting:
- Após a realização da eletroforese, as proteínas do gel são transferidas para uma
membrana de nitrocelulose com a preservação da disposição gerada pela
eletroforese>> revelação colorimétrica.
 Western Blot:
- Proteínas são separadas por eletroforese em gel, é feita a transferência de
proteínas para a membrana que é cortada em tiras que são incubadas com o
soro do paciente e anti- IgG CONJUGADA.
Estude medicina onde sempre 
sonhou
WWW.MEDSTRANSFERENCIA.COM.BR
#vempramedicina
#vempromeds