Apostila de aulas práticas

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Universidade Federal de Ouro Preto/ Microbiologia – CBI-618 
 
Profa. Dra.Maria Célia da Silva Lanna 
 
 NOVA EDIÇÃO 
Microbiologia Prática – Unidade I 
Aulas Práticas N°1,2,3,4,5 
 AULAS PRÁTICAS DE MICROBIOLOGIA CBI-618 EM 2013/2 
Professora: Maria Célia da Silva Lanna 
UNIDADE I: “Investigação da Microbiota do Corpo e do Ambiente” 
 (Aulas Praticas 1,2,3,4,5) 
 
Aula Prática N°1 
Desenvolvimento das aulas práticas 
 “Aula Prática do dia 07/10/2013” 
 
 
1.Apresentação do laboratório: Equipamentos (Microscópios, Bicos de Bunsen, 
Câmara de Fluxo Laminar, Estufa Incubadora, Autoclave de Esterilização e Estufa de 
Esterilização), Vidraria (Placas de Petri, etc), Reagentes, Corantes e Meios de Cultura, 
Princípios Metodológicos da Microbiologia. 
 
2. Normas de Biossegurança : Princípio básicos para o traballho experimental em 
Microbiologia 
 
3. Demonstração do Mecanismo de Esterilizaçâo da Autoclave e Demonstração do 
funcionamento asséptico da Câmara de Fluxo Lâminar. 
 
 
ESTERILIZAÇÃO PELO CALOR 
AUTOCLAVE : Esterilização Pelo 
 Calor Úmido 121° C/ 20 min (1,5 atm) 
ESTERILIZAÇÃO : 
 Outros Métodos de Esterilização 
 
 
 
 ESTERILIZAÇÃO POR MICROFILTRAÇÃO 
 ESTERILIZAÇÃO QUÍMICA 
 
1- COMPOSTOS DOS ALDEÍDOS 
 * Para instrumentos laboratoriais e cirúrgicos 
 
FORMALDEÍDO : 
 Formol pastilhas sólido/gás e Formol solução 5 a 10% 
 
GLUTARALDEÍDO: Solução a 2% 
 
2- ÓXIDO DE ETILENO GÁS a 45 mg % 
 
* Para instrumentos laboratoriais e cirúrgicos industrializados 
 
 
 
 
 DESINFECÇÃO 
“Elimina somente micro-organismos vegetativos, 
 Não Elimina Endósporos Bacterianos” 
 
1- DESINFECÇÃO PELO CALOR : 
• Fervura a 100°C 
•Pasteurização Convencional: Elimina maioria dos 
patogenos (microorganismos vegetativos) do leite e outras bebidas sem 
alterar o sabor a 63°C/30 min e resfriado a 4°C para evitar proliferação de 
bacterias residuais. 
 
• Métodos Equivalentes à Pasteurização: 
HTST(high-temperature, short-time) 72°C/15 seg 
UHT(ultra-high temperature) 140°C/≤ 5seg 
 
2-DESINFECÇÃO QUÍMICA 
 
 
DESINFECÇÃO : Vários Desinfetantes Químicos 
Observação: ALDEÍDOS únicos desinfetante/esterilizantes 
*São esterilizantes porque eliminam Endosporos Bacterianos 
 Aula Prática N°2: “Aula Prática do dia 14/10/2013” 
OBJETIVOS: 
 
 
 
 
 
 
 
 
Desenvolvimento das aulas práticas 
 
 1. Estudo da População Microbiana: 
 1.1- Microbiota do Corpo Humano 
 Predominam espécies de bactérias e raros fungos 
 1.2- Microbiota do Ambiente 
 Predominam espécies de fungos e algumas bactérias 
 
2. Técnicas para o Controle da População Microbiana do Corpo e Ambiente : 
 Métodos de Esterilização e Desinfecção 
ATIVIDADES: 
 
1º )EXPERIMENTO PARA COMPROVAR A PRESENÇA DA MICROBIOTA DO CORPO HUMANO E O SEU 
CONTROLE PELOS DESINFETANTES: 
Cada aluno recebeu uma placa de Petri contendo Ágar Nutriente e inoculou no 1º setor: “Dedo Sujo”(DS), no 2º 
setor: “Dedo Lavado com Sabão”(S), no 3º setor: “Dedo lavado e desinfetado com álcool 70% ou álcool iodado e 
no 4º setor:secreção nasal ou de oro-faringe e incubou a placa em estufa a 37°C/24 h para leitura na aula 
seguinte. 
2º )EXPERIMENTO PARA COMPROVAR A PRESENÇA DA MICROBIOTA AMBIENTAL : 
Cada grupo de alunos recebeu três placas de Petri contendo Ágar Nutriente e abriram estas placas ao ar 
atmosférico, respectivamente, por 5 , 10 e 15 minutos em um local escolhido e incubaram a temperatura 
ambiente para leitura na aula seguinte. 
 
 
 
 CONTINUAÇÃO DA Aula Prática N°2: “Aula Prática do dia 14/10/2013” 
 
TÉCNICA PARA A INOCULAÇÃO POR ESGOTAMENTO EM 
ÁGAR NUTRIENTE E EM ÁGAR MANITOL HIPERTONICO 
 
Cuidados: 
A alça de níquel-cromo deverá ser 
esterilizada por flambagem antes e 
após qualquer inoculação. Deve-se tomar o 
cuidado de esfriá-la antes da coleta. 
Os recipientes devem sempre ser abertos 
próximos à chama do bico de Bunsen. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Desenvolvimento das aulas práticas 
Aula N°3- “Aula do dia 21/10/2013” 
 
OBJETIVO : 
Obtenção das Culturas Puras bacterianas da Microbiota do “dedo sujo” do 
nariz e oro-faringe para identificar as espécies de cocos Gram positivos 
 
ATIVIDADE: 
Cada aluno recebeu uma placa de Ágar Nutriente e uma placa de Ágar 
Manitol Hipertônico estéreis, cada placa com os setores DS (dedo sujo) e 
N(Nariz) ou G(garganta) demarcados. Cada aluno deve “Pescar” uma 
única colônia das culturas crescidas provenientes de “dedo sujo” e de 
“nariz” ou “garganta” e inocular cada colônia no Ágar Nutriente e também 
no Ágar Manitol hipertonico nos setores DS e N ou G e incubá-las em 
estufa a 37°C/24 h para posterior identificação na aula pratica seguinte. 
 
 
 
 
 
 
 
Desenvolvimento das aulas práticas 
 Aula Prática N°4 : “Aula do dia 28/10/2013” 
OBJETIVO : Primeiras Reações Bioquímicas para Identificação dos gêneros 
e espécies bacterianas cocos Gram positivos previamente isolados da 
microbiota do Corpo Humano; dedo sujo, nariz e garganta. 
ATIVIDADE : 
 
 
 
 
 
 
Desenvolvimento das aulas práticas 
Meios utilizados para obtenção e identificação das culturas puras: 
Ágar Nutriente /Composição: Peptona, contem concentração isotônica de sais, água e 
ágar. Meio sólido enriquecedor permissivo ao crescimento de todos micro-organismos. 
Ágar Manitol-Hipertônico / Composição: Peptona, Concentração Alta de sal (7,5% de 
NaCl), Carboidrato Manitol, Indicador de pH Vermelho Fenol( pH neutro: vermelho e pH 
ácido: amarelo), água e ágar. Meio sólido com alta concentração de sal é seletivo para 
as tolerantes e indicador bioquímico das fermentadoras de manitol. 
 
Leitura e Interpretação dos Resultados: 
Gênero Streptococcus NÃO CRESCE 
 
Gênêro Enterococcus e Gênero Staphylococcus CRESCEM 
A espécie Staphylococcus aureus FERMENTA MANITOL muda o meio para AMARELO 
A espécie Staphylococcus epidermides NÃO FERMENTA MANITOL continua VERMELHO 
Desenvolvimento das aulas práticas 
CONTINUAÇÃO DA Aula Prática N°4 : “Aula do dia 28/10/2013” 
 
O Meio Ágar Manitol hipertonico antes da inoculação era todo vermelho pH: 7,0 
 
Leitura após o crescimento bacteriano 
 
1-Crescimento Com Fermentação do Manitol: Colônias brancas e o meio muda a 
cor para amarelo Ex: Staphylococcus aureus 
Observação: Espécie de maior virulência 
 
2-Crescimento Sem Fermentação do Manitol: Colônias brancas e o meio continua 
vermelho Ex: Staphylococcus epidermides 
 
 
 
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 Aula Prática N°6 : “Aula do dia 04/11/2013” 
OBJETIVO : Continuação do Método de coloração de Gram e das Reações 
bioquímicas para identificação cocos Gram positivos previamente isolados da 
microbiota do Corpo Humano; dedo sujo, nariz e garganta das espécies dos 
gêneros Staphylococcus, Streptococcus e Enterococcus. 
ATIVIDADE : Observação dos esfregaços das culturas puras dos generos 
Staphylococcus, Streptococcus e Enterococcuscorados pelo Metodo de 
Gram. Demonstração dos demais testes bioquimicos para identificação das 
espécies de Staphylococcus, Streptococcus e Enterococcus : 
 
 
 
 
 
 
 
Desenvolvimento das aulas práticas 
 
 
 
 
Teste da coagulase, Teste de crescimento e utilização da Bile-Esculina, Teste de 
hemólise e Ágar Sangue:Produção de halo de Hemólise tipo α hemolitico e β hemolitico. 
 
Leitura e Interpretação dos Resultados: 
Metodo e Coloração de Gram e Testes Bioquímicos: 
Gênero Staphylococcus : Cocos em cachos Gram positivos 
Staphylococcus aureus: Teste Coagulase Positivo/ S. epidermides: Coagulase Negativo 
 
Gênero Enterococcus e Streptococcus: Cocos em cadeias Gram positivos 
Genero Enterococcus:Teste da Bile-Esculina Positivo/Streptococcus:Bile-Escul:Negativo 
Streptococcus pneumoniae: α hemolitico, Streptococcus pyogenes: β hemolitico