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07/06/2017 1 Disciplina: Imunologia Clínica Plano de aula: Imunodiagnóstico de infecções virais Parâmetros para Validação de Teste Diagnóstico demonstração do patógeno ou de seus produtos nos tecidos ou fluidos O diagnóstico correto Ausência do patógeno Falta de sensibilidade dos métodos Falhas técnicas Período longos para o resultado laboratorial Manipulação inadequada da amostra Impedimentos 07/06/2017 2 Métodos Diretos Métodos Indiretos Detecção do antígeno (isolamento) Detecção do genoma viral (PCR) Pesquisa de anticorpos específicos (por métodos sorológicos) Métodos Sangue (total, soro ou plasma) Urina Fezes Líquidos corporais (espinhal, amniótico, etc...) Tecidos (biópsias, raspagem, etc...) Secreções (escarro, esperma, vaginal, uretral, etc...) A escolha para a amostra biológica dependerá das vias de entrada Tipos de amostras biológicas Infec. Respiratória, urogenital e ocular Infecções Entéricas Infecções do SNC Qualquer infecção Infecções Dérmicas Infecções Entéricas 07/06/2017 3 Imunofluorescencia Identificação e diagnóstico laboratorial Método Indireto Imunoensaios enzimáticos Identificação e diagnóstico laboratorial Método Indireto 07/06/2017 4 Fixação do complemento Identificação e diagnóstico laboratorial Método Indireto 1- Citometria de fluxo Permite contagem de LT CD4 e 8, Carga viral 2- Biologia molecular Permite: Quantificação de RNA e/ou DNA viral Sensibilidade Estudo sobre o polimorfismo Diagnóstico laboratorial com monitoramento Métodos Diretos 07/06/2017 5 Vírus: tamanho e características Estruturas dos vírus Partícula viral = Virion Ácido nucleico (DNA ou RNA, ou os dois) sempre envolto por uma cápsula proteica (capsídeo). As proteínas que compõe o capsídeo são específicas para cada tipo de vírus. 07/06/2017 6 Defesa contra vírus Agentes etiológicos de hepatites 07/06/2017 7 Vírus da hepatite A 07/06/2017 8 Vírus da Hepatite A - HAV Enterovírus Picomavírus com somente um sorotipo Infecção primária e transmissão 1. No intestino infecta os enterócitos (local propício para propagação) ; 2. Disseminação pelo sangue e chegam ao fígado, atacando os hepatócitos (células que apresentam receptores membranares ). A disseminação e excreção se dá a partir do canal biliar e destina-se por via ampola de Vater no duodeno, sendo assim expelido nas fezes. Período de incubação = 30dias Sem infecções crônica nem latente 07/06/2017 9 Um dos vírus mais estáveis no ambiente Infecciosidade mantida mesmo após processos de tratamento e desinfecção da água Vírus da hepatite A: persistência no ambiente Proteção e diagnóstico Vigorosa resposta humoral Anti-HAV- IgM: infecção recente pelo HAV Anti-HAV -IgG: infecção passada pelo HAV – resistência a futuras infecções Pesquisa de anticorpos: 07/06/2017 10 Imunoterapia protetiva Saneamento básico, Higiene Proteção: “Pool” de IgG humana a cada 3-6 meses Vacina inativada Vírus da hepatite B 07/06/2017 11 Possibilidade de evolução para cirrose e hepatite fulminante; Um dos principais agentes do hepatocarcinoma celular (HCC) 1-2 milhões de óbitos/ano 100 vezes mais infeccioso do que o HIV Vírus da Hepatite B - HBV Vírus da Hepatite B - HBV sangue, agulhas e materiais cortantes contaminados, tintas das tatuagens e relação sexual, transfusão de sangue, acupuntura e transfusão perinatal. Transmissão 07/06/2017 12 Marcadores Reconhecimento dos antígenos viral pelos linfócitos T citotóxicos e linfócitos B HBsAg no soro = multiplicação viral HBeAg = multiplicação viral em alta HBcAg = baixas quantidades no sangue Anticorpos específicos são formados contra todos os antígenos relacionados ao HBV Hepatite B aguda Resolução 90% Hepatite fulminante 1% Hepatite B crônica 9% Hepatite B crônica ativa Portador inativo de HBsAg Cirrose HCC Curso clínico da hepatite B em adultos 07/06/2017 13 Alta (108 – 109 PV/ml) Moderada (105 – 107 PV/ml) Baixa/Não Detectável sangue sêmen urina soro fluido vaginal fezes exsudatos de feridas saliva suor lágrima leite materno Concentração do HBV em diversos fluidos orgânicos Testes laboratoriais específicos: ELISAs para: - HBsAg - anti-HBsAg - anti-HBcAg - HBeAg – indica infecção crônica - antiHBeAg Diagnóstico sorológico O exame deste sistema Ag-Ac, permite o acompanhamento curso da infecção 07/06/2017 14 Curso sorológico da hepatite B aguda e crônica HBsAg: Interpretação A persistência indica infecção crônica Marcador sorológico HBsAg Anti-HBc IgM Tratamento Vacina: HBbsAg recombinante dias 1, 30 e 5 meses Vacinação: após 3 doses, 95% reagentes Hepatite B crônica: Antivirais (adefovir dipivoxil, interferon alfa + Lamivudina). Transplante de fígado – para pacientes com hepatopatias em estágio terminal. 07/06/2017 15 Imunoterapia Vírus da hepatite C 07/06/2017 16 Vírus da hepatite C - HVC Durante o curso da infecção pelo HCV no indivíduos, desenvolve-se um grande nº de variantes do genotipo infectante, denominadas de quasispecies. Sequenciamento de amostras de HCV em várias partes do mundo demonstrou uma grande variação na sequência de nucleotídeos, levando a sua classificação em 6 genótipos (1- 6) e mais de 70 subtipos (a-c). ALT - via parenteral - usuários de drogas injetáveis - sexual - contatos familiares - transfusões - profissionais da saúde - desconhecida Transmissão do HVC 07/06/2017 17 Pode ser sintomática ou não - maioria permanece ~ 10 anos sem sinais - em alguns: fadiga, fraqueza, ascite - morte por colapso hepático => 20-25% dos casos - indicação para transplante Hepatite C crônica Perfil sorológico sinais anti- HCV ALT Normal 0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 Título Meses Anos Tempo após exposição 07/06/2017 18 Imunoterapia - Anticorpos anti-HCV (ELISA) - detecção do genoma por PCR Diagnóstico
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