Brucelose: Controle e Prevenção

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Microbiana – 07.10.16 – aula 5
BRUCELOSE- PNCEBT
HISTORICO 
Programa Nacional PNCEBT
No ano de 2000 , prof. tentou se credenciar no Ministério da Agricultura, para ser credenciado tinha que estar formado e depois no M Agricultura passaria algumas palestras para posteriormente se credenciar. Um grupo de 5 veterinarios montaram um programa junto ao governo chamado de PROGRAMA NACIONAL DE CONTROLE E ERRADICACAO DA BRUCELOSE E TUBERCULOSE – PNCEBT. O grupo padronizaram o diagnostico , com a meta de 10 anos erradicar a Brucelose para tal pegariam tds os veterinários cadastrado que deveriam fazer curso de 1 semana apos deveria fazer prova visando o recredenciamento dos MVet. 
O Professor ira passar as normas do Ministério da Agricultura que todo padronizado.
DEFINIÇÃO:
Doença infecto-contagiosa provocada por bactérias do gênero Brucella. Contagiosa que Passa de um animal para o outro. Está muito relacionada ao sistema reprodutivo.
E um Cocobacilo gram- não esporulado , pequeno que fica intracelular , tem crescimento lento em meios de cultura, sao feitos imunodignosticos
MANIFESTAÇÕES:
Abortos – diminui a produção de leite, de carne, causa diminuição na produção.
Existe vacina que é a prevenção contra a doença.
Os animais a serem incluídos em um plantel devem ficar em quarentena.
Nascimentos pré maturo ou natimorto, Não cresce saudável como deveria ficar.
Esterilidade – pode ocorrer tanto em machos como em fêmeas.
Baixa produção de leite, de carne : Podendo ter 25% da produção acometida ,ou seja , ¼ da sua produção.
Não ha morte do animal, tem aumento no custo de produção. Diferente da Febre aftose pq leva morte do animal.
É uma zoonose- Eh altamente contagiosa, quando manipula animal com quadro abortivo pode entrar na pele integra ou com lesão sendo então transmissível para o homem, sendo o tratamento de controle, vacina produzida com bactéria viva (cai na prova). Sintomas: febre, dor testicular , para diagnosticar se faz titulação. 
Sendo a uma das portas de entrada pela sistema respiratório-nasal , quando inala o cheirando o aborto ou ate mesmo lambendo, sendo esta porta de entrada a oral. Ela pode ser tornar viável em ate 750 dias no ambiente, local com sangue atrai mosca , inseto que pode ir de uma propriedade para outra, ou ate mesmo cão que pode pegar e arrastar o resto do aborto para propriedade toda ou ate outra, urubu também pode carregar e ate o tatu esta envolvido o aborto mantem o coco bacilos viável.
Porque se encontra no Aparelho reprodutor feminino ?
R: Ela eh um MOs’ que faz fermentação que busca o açúcar Eritritol presente no sistema reprodutivo nos cotilédones, que faz com que aumente a afinidade da Brucella.
O aborto ocorre em torno do 7o mês de gestação, pq o eritritol tem seu pico máximo de concentração, onde tem condição máxima, tendo o pico máximo de Brucella fazendo um bloqueio do sangue(nutrientes e O2) entre mãe e feto e apos sua morte ele eh abortado/expulso pós 24-48 horas da morte do feto, contamina com restos fetais, placentas
No macho este também está presente nos líquidos nutritivos dos espermatozoides (pdz no testículo). No epidídimo (EZP são armazenado) eh a onde tem a nutrição do espermatozoide através de açúcares (frutose eritritol) e quando o ejaculado vai para o exterior o coco bacilos vai junto. No macho então faz EPIDIMITE e claro que para chegar o testículo eh muito fácil por isso pode fazer esterilidade do macho muito mais que a femêa.
Um touro cobre 20 -25 por estação de monta em IA se insemina 100 vacas quando diluímos o sêmen podendo transmitir muito mais vacas e ainda eh depositado diretamente no útero.
Macho: orquite uni ou bilateral ou epididimite e na femêa faz aborto.
Equinos: faz uma lesão na cernelha uma nodulação-forma um abcesso que fistula que rompe e fica com extravasamento de secreção rica em Brucella. A Brucella do cavalo eh a mesma do boi. Pode acometer caprinos e ovinos.
Cães: No cão pode fazer epididimite cuidado com imunodiagnostico que são muita das vezes falhos. Não eh contagiosa para o homem.
Contaminação
Através de ingestão de agua e alimentos, pele integra ou lesada, inalação, insetos, copula e IA , leite colostral e principal fonte de contaminação femêas (eritrol). 
A vaca é curiosa e todas ficam lambendo o feto para tentar reanimar e assim tem o contagio direto.
Normalmente ela sai com os restos placentários (cocobacilos que fica suspensão no ar), ou resíduos no locais onde este animal passou e fica a concentração de Brucella que contamina outras vacas. Contaminação Via oral ou nasal.
Outros animais que se aproximam do material do aborto também são capazes de levar o agente para outros locais. Ex: urubu.
O ideal é dar um fim nos resíduos no local onde estava, de forma a enterrar no mesmo local, antes deve-se forrar a cova com cal, coloca o feto e cobre também com cal.
O tempo fica viável dependo das condições do ambiente ,o ideal eh sangue e temperatura , em esgoto pode ser mantida em ate 700 dias, agua potável, que eh contaminada com cai ou eh jogada nos rios, cao carrega , enterra. Veiculadores pode ser o tatu, urubu que carrega em outros lugares – disseminação. 
Ingestão do alimento : leite cru e queijo e derivados. 
Contaminação:
Ingestão de agua e alimentos, copula (lesões testiculares recentes), através da pele integra ou lesada, inalação, insetos, IA, leite colostral – gde no de bactérias e pp fonte de contaminação femêa (eritritol).
ETIOLOGIA: 6 espécies
_Brucella abortus (bovinos e bubalinos, equinos)
Brucella mellitensis (caprinos e ovinos) faz colônia lisa e brilhante
Brucella suis (suínos e Homens)
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Brucella ovis (ovinos e caprinos) são de rugosas nao faz zoonoses
Brucella canis (cães) 
Brucella neotomae (rato do deserto)
As três primeiras espécies são as mais virulentas e faz colônias lisas( ter mais camada LPS 21%).
As três últimas são menos virulentas e faz colônia rugosa , ou seja , tem menos camada LPS.
Quem trabalha com cães tem menos problemas, já com bovinos pode ter contaminação por Brucella abortus.
A contaminação pelo sangue é mais difícil, mais pode acontecer. Mais se tem maior concentração nas secreções placentárias e no leite também.
Vacina tem bactéria Brucella Abortus atenuada, quando injeta pode se contaminar . Vacina eh BB19
COCOBACILOS GRAM NEGATIVOS CURVOS, OXIDASE +, EXIGENTES
 
EPIDEMIOLOGIA
Disseminada por todo o país
1975 – sul (4%) ; sudeste (7,5%) ; centro-oeste (6,8%) ; nordeste (2,5%) ; norte(4,1 %)
A realidade é outra, só que o que acontece é que na região Sudeste tem mais testes.
Alguns estados realizaram estudos por amostragem
Perdas econômicas:
-25% produção de leite e carne; diminuição 15% na produção de bezerros e 1 em cada 5 vacas infectadas aborta.
O produtor só acredita quando vê os números da perda. E com isso se vê a necessidade de se fazer a prevenção e o controle.
RESISTÊNCIA
RESITÊNCIA DE Brucella sp A ALGUMAS CONDIÇÕES AMBIENTAIS
CONDIÇÃO AMBIENTAL_TEMPO DE SOBREVIVÊNCIA__LUZ SOLAR DIRETA_4 – 5 h__SOLO_ __SECO_4 DIAS__ÚMIDO_66 DIAS__A BAIXAS TEMPERATURAS_151 – 185 DIAS__FEZES_120 DIAS__DEJETOS_ __ESGOTOS_8 – 240 / 700 DIAS__ALTAS TEMPERATURAS_4 HORAS - 2 DIAS__ÁGUA_ __POTÁVEL_5 – 114 DIAS__POLUÍDA_30 – 150 DIAS__FETO À SOMBRA
EXSUDATO UTERINO_180 DIAS
200 DIAS__
MECANISMO DE TRANSMISSÃO
No animal infectado: baço; fígado; aparelho reprodutor masculino; útero e úbere
VIAS DE ELIMINAÇÃO: fluidos e anexos fetais, eliminados no parto ou abortamento; leite e sêmen.
O touro deve ser controlado para não haver contaminação.
Nem sempre a vaca aborta, as primíparas abortam, as multíparas pode nascer morto ou nascer doente.
PORTA DE ENTRADA – TRATO DIGESTIVO – ingestão de água e alimentos contaminados ou pelo hábito de lamber as crias, Cheirar os restos abortados também.
PERÍODO DE INCUBAÇÃO: poucas semanas até meses ou anos. Depende da resposta do hospedeiro.
COITO X INSEMINAÇÃO
No coito umtouro bom cobre no máximo 25 fêmeas, na inseminação artificial sem controle, se insemina 200 vacas alem de colocar direto no útero.
Em cães também acontece a mesma coisa.
PATOGENIA
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Interior de macrófagos, porque é um cocobacilo pequeno.
SINAIS CLÍNICOS E LESÕES
BOVINOS E BUBALINOS – Aborto em torno do sétimo mês de gestação. Após o primeiro aborto são mais frequentes a presença de natimortos e o nascimento de bezerros fracos, podem sobreviver ou morrer.
Pico de eritritol é no 7º mês de gestação, normalmente é quando aborta porque descola a placenta.
Feto é abortado 24 – 72 horas depois de sua morte
Machos – orquite uni ou bilateral, transitória ou permanente.
Lesões articulares também podem ser observadas. Como poliartrite, por acumulo de complexo antígeno-anticorpo.
EQUINOS
Fazem granuloma em cernelha, já não é comum o aborto.
Obs: leptospira faz aborto em bovinos e eqüinos, diagnostico diferencial.
HOMEM
Também ocorre aborto na mulher e orquite e esterilidade no homem.
A vacina é feita com Brucella viva (B19)
***DIAGNÓSTICO 
Sequencia: TT (TAL: + e ATT:+ (TC + ABATE ***
Sequencia: TT (feito vet. credenciado) (TAL inconclusivo e ATT inconclusivo ( 
dentro conclusivo – posso fazer re-teste ( comparativo prova lenta ou faz um fixação de complemento) tenho inconclusivo – pode ser + ou se inconclusivo então eh + (feito por ver oficial)
TESTE DE TRIAGEM : (feito pelo medico veterinário credenciado) que são de 2 tipos: faz um levantamento dos animais TESTE DO ANEL DO LEITE e TESTE SOROAGLOTINACAO. Feito pelo medico credenciado.
TESTE CONFIRMATORIO –feito pelo medico veterinário oficial para confirmação. Se for + faz um P de positivo na cara e vai para o abate. OBS: Se tiver um animal com SC e feito o soro aglutinação com + pode abater direto sem o teste confirmatório. 
1) TESTE DO ANEL EM LEITE (TAL) – saí anticorpo
De cada galão de leite faz um teste. Ex: 10 vacas enchem 1 galão e daí faz 1 teste. Usa antígeno com corante. 1 galao 1 amostra em um tambor 5 amostra.
Depois faz o exame individual para cada vaca, isso se houver alguma positiva.
Mistura de leite – antígeno (4 %) corado com hematoxilina, cor azul – positivo ( antígeno com anticorpo aglomerado).O que eh o anel = antígeno + anticorpo na cor azul 
O ideal é fazer o teste todo ano, se tem vaca nova fazer antes de introduzir no plantel.
Laboratório oficial mais próximo é em São Paulo ou Minas Gerais.
Pega a Brucella mata e o que vale é a parede. Faz o anticorpo contra camada LPS.
A prova azul reagia IgM e IgG. Se tinha gram ( - ) qualquer um gerava.
Prova atual mais especifica avalia IgG1 e a antiga avaliava IgM e IgG que IgM é resposta recente da doença.
O teste confirmatório é feito 30 a 60 dias após o teste de triagem.
 
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2) TESTE DE SOROAGLUTINAÇÃO COM ANTÍGENO ACIDIFICADO TAMPONADO CORADO ROSA BENGALA (AAT) = antígeno
Material usado – sangue (soro) de cada animal eh verificar se eh ou +.
Preparado com antígeno na concentração de 8 % (Brucella eh morta), 	tamponado em pH ácido e corado com rosa Bengala 	– 	leitura especifica de IgG1 , onde antes a prova clássica reagia IgM (não especifica) e IgG – podendo dar positivo para qq infecções recentes e o animal ia para o abate. Se espera 60 dias fara o confirmatório que dará + , porem se der negativo pode voltar para fazenda isso pq foi + por reação cruzado.
Quando faz AAT deu + e se der inclusivo 2 vezes – Para o MAgricultura vai para o abate.
ANTÍGENO ACIDIFICADO TAMPONADO – ROSA BENGALA POSITIVO, ai faz o individual. 
 Bacilo gram – com camada LPS a E. Coli causa colibacelose que gram – com camada LPS, a IGM pega camada de LPS , todos fazem resposta ao IgG inespecífica. 
1o teste com laboratório credenciado e depois outro que oficial do M.A.P.
Se der positivo no leite faz o soro aglutinação que eh o mais fidedigno.
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PROVA DO ANEL DO LEITE – RING TEST POSITIVO
TESTES CONFIRMATÓRIOS (medico veterinário do ministério) eh um teste comparativo ( entre 2 coisas).
Comparativo: 2-mercaptoetanol com soro aglutinação lenta (SAT) ou com fixação de complemento( so no nordeste) faz um ou outro 
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TESTE DO 2 – MERCAPTOETANOL (2 – ME) comporativo entre 2. 
Detecta a presença de IgG no soro. Deve ser realizada em paralelo com a prova lenta em tubo. Soro com predomínio em IgM mostram reações negativas. confirma se foi positiva , se foi positiva no teste de triagem e – neste ela eh negativa. 
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não cai na prova o quadro !
TESTE DE SOROAGLUTINAÇÃO LENTA EM TUBOS (SAT)
	Resultado em 48 horas. Sempre compara como o 2 –ME.
FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO – entraria como confirmatório e 2 –ME e F. Complemento ( eh mais caro)
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	Recomendado pela O. I . E. Detecta tanto IgG1 como IgM , forma os botões.
 
IDENTIFICAÇÃO DO AGENTE POR MÉTODOS DIRETOS OU PELA DETECÇÃO DE ANTICORPOS EM MÉTODOS INDIRETOS
Método direto não faz
Material de isolamento em meio de Farrel.
2ME - 2 – MERCAPTOETANOL
Positivo = turvo
Negativo = límpido
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PROVA 2 – MERCAPTOETANOL POSITIVO
INTERPRETAÇÃO DA PROVA DO 2 – ME COMPARADA COM SOROAGLUTINAÇÃO LENTA
FÊMEAS COM IDADE IGUAL OU > 24 MESES E VACINADOS 3 – 8 MESES
 2-ME
SAL_NR_25 I_25_50 I_50_100 I_100_200 I_200__NR_-_ _ _ _ _ _ _ _ __25 I_-_-_ _ _ _ _ _ _ __25_-_-_+_ _ _ _ _ _ __50 I_-_-_+_+_ _ _ _ _ __50_-_-_+_+_+_ _ _ _ __100 I_-_-_+_+_+_+_ _ _ __100_Inc_Inc_+_+_+_+_+_ _ __200 I_Inc_Inc_+_+_+_+_+_+_ __200_Inc_Inc_+_+_+_+_+_+_+__
INTERPRETAÇÃO DA PROVA DO 2 – ME COMPARADA COM SOROAGLUTINAÇÃO LENTA
FÊMEAS NÃO VACINADAS E MACHOS COM IDADE SUPERIOR A 8 MESES DE IDADE
 2-ME
SAL_NR_25 I_25_50 I_50_100 I_100_200 I_200__NR_-_ _ _ _ _ _ _ _ __25 I_-_-_ _ _ _ _ _ _ __25_-_-_+_ _ _ _ _ _ __50 I_-_-_+_+_ _ _ _ _ __50_Inc_Inc_+_+_+_ _ _ _ __100 I_Inc_Inc_+_+_+_+_ _ _ __100_Inc_Inc_+_+_+_+_+_ _ __200 I_Inc_Inc_+_+_+_+_+_+_ __200_Inc_Inc_+_+_+_+_+_+_+__
ISOLAMENTO concurso e prova 
A partir de material de aborto (feto; conteúdo estomacal do feto, placenta) ou secreções
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Após o sacrifício a carne pode ser parcialmente utilizada.
2+ vai para o sacrifício. 2 inclusivo = e + sacrifício. se tiver clinica vai para o sacrifício , se não tiver clinica e foi um inconclusivo pode não ser sacrificado.
CAI NA PROVA 
Diagnostico bacteriológico- 
Meio de Farrell: Agar triptose + soro (5%)
(Polimixina B, Bacitracina, Cicloheximide, Acido Nalidíxico, Nistatina, Vancomicina)
Vaca: linfonodos parotídeo, pré-escapular, bronquial, ilíaco interno, supra-mamário, swabe vaginal, baço, leite. Feto: linfonodo bronquial, conteúdo estomacal, baço , fígado, pulmão, swabe retal.
aula 13/09/2013
VACINAÇÃO CAI NA PROVA
	VACINA B19 – é uma amostra de B. abortus lisa ( + LPS por isso resposta boa)-viva (induz anticorpo anti LPS) – no Brasil é obrigatório a vacinação de bezerras com idade 3 meses ate 8 meses (recebe 01 vacina tem que fazer marcação). Não se vacina machos se não ele desenvolve orquite e epidermite. Elas aumentam anticorpos com 3 meses diminui se faz o teste com 9 + 3 meses da resposta Imune se fizer o teste aos 12 meses dará + por isso so ate 8 meses. Para não dar problema de dar positivo pela vacina faz três meses antes para não dar um falso + quando fizer a sorologia . Marcada com ferro V e ano de vacinação. V5=2005 ou P = positivo. OBS: se tomar picada da vacina pode ficar doente como febre e ate mesmo ficar histerectomizada. 
	VACINA RB 51 – é uma amostra de B. abortus-rugosa (pegou uma A.Lusa) que sofreu passagens sucessivas em meio de cultura contendo concentrações sub-inibitórias de rifampicina (droga de eleição para que tem Brucella+) ate perder a concentração de camada de LPS então será uma abortus rugosa , não induz formação de anticorpos anti-LPS e não interfere no diagnóstico sorológico, pq a resposta do anti-corpo eh contra a camada LPS , ela gera resposta contra Brucella e não contra a camada LPS, Por isso faz em que não fez no período de 3-8 meses, para não dar positivo.
A colônia ficou rugosa por ter menos camada LPS, pelouso de rifampicina.
A B19 (Brucella viva), vacina RB 51 (Brucella viva, tem rifampicina, não se sabe o que usar se houver um acidente com a vacina). Não tem controle.
A imunidade é igual na B 19 e na RB51, só que ela dá para vacinar fora da idade. Ainda não tem no Brasil.
Ele induz resposta , porem se tiver a doença ele não terá tratamento porque já uso rifampicina para retirar sua camada LPS.
Os testes nos animais são feitos apos 1 ano pq se não estarão sujeito a resposta vacinal, pq ira responder a titulação com 3 meses apos fazer a vacina.
OBS: Cão com Brucella tem camada LPS pequena por isso eh menos patogênica para o homem
***CAMADAS LPS das BACTERIAS – antígeno O, cenne e endotoxina E abaixo esta Brucella. A sorologia faz observação do antígeno para LPS , então se não tenho as camadas ela não ira fazer anti-corpo contra a camada LPS então não terá um + para reação vacinal, porem esta imune a Brucella. 
CONCEPÇÃO GERAL DO PNCEBT
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