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métodos de estudo das células

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Métodos de Estudo da Célula 
Aline Gonzaga Cunha
TECNOLOGIA DA BIOLOGIA CELULAR E 
MOLECULAR
• Os conhecimentos sobre as células progridem
paralelamente ao aperfeiçoamento dos métodos de
investigação;
• Microscópio óptico ou microscópio de luz;
• Técnicas citoquímicas: localização de diversas
moléculas;
• Microscópios eletrônicos (resolução).
CONFECÇÃO DE CORTES PARA ESTUDO 
NOS MICROSCÓPIOS ÓPTICO E 
ELETRÔNICO
• Células fixadas e coradas - Melhor demonstração dos
seus componentes;
• Um preparado ideal deveria mostrar as células com a
mesma estrutura microscópica e composição
química que possuíam quando vivas – artefatos-
alterações.
1ªETAPA: FIXAÇÃO
• Evitar autólise;
• Impedir atividade e proliferação de bactérias;
• Endurecer as células;
• Aumentar a afinidade das estruturas celulares pelos
corantes usados na microscopia óptica e aumentar o
contraste na microscopia eletrônica.
Lâminas permanentes
GRUPAMENTOS 
AMÍNICOS DAS 
PROTEÍNAS
GRUPAMENTOS 
AMÍNICOS DAS 
PROTEÍNAS
FIXADORES MAIS UTILIZADOS 
EM MICROSCOPIA ELETRÔNICA:
• TETRÓXIDO DE ÓSMIO;
• GLUTARALDEÍDO.
COAGULAM AS PROTEÍNAS 
PRODUZINDO ALTERAÇÕES 
MÍNIMAS
FORMOL
2ª ETAPA: MICROTOMIA
• Cortes em fatias.
• O fragmento de tecido fixado deve ser protegido em
um material que o envolve e nele penetra;
• Inclusão em parafina ou em resinas plásticas
especiais- microsc. Óptico: -navalhas de aço;
• Inclusão em resinas epóxi- microsc. Eletrônico:
- navalhas de vidro ou diamante.
3ª ETAPA: COLORAÇÃO
• Quase todas as organelas são transparentes e
incolores;
• Corantes básicos- grupamento cromóforo é catiônico
grupamentos aniônicos (ácidos)
Ex; DNA, RNA são basófilos(afinidades por
corantes básicos)
Azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina.
Responsável 
pela cor
• Corantes ácidos- grupamento cromóforo é aniônico
grupamentos catiônicos (básicos)
Ex; Proteínas citoplasmáticas são acidófilos
(afinidades por corantes ácidos)
Eosina, Orange G e Fucsina ácida
O
 M
ic
ro
sc
ó
p
io
 Ó
p
ti
co
AUMENTO: OBJ X OCULAR 
As partes do microscópio
Oculares
Tubo
Asa de transporte
Adaptador de 
iluminação
Platina
Indicador da 
Intensidade 
Luminosa
Botão 
Liga/Desliga
Charriot
Revólver
Presilha
Parafuso 
Macrométrico
Parafuso 
Micrométrico
Aumento total
Aumento visual total: Aumento da objetiva X Aumento da ocular
FINALIDADE DO CONDENSADOR
• Chama-se poder de resolução de um sistema óptico
a sua capacidade de separar detalhes. Na prática, o
poder de resolução é expresso pelo limite de
resolução, que é a menor distância que deve existir
entre dois ptos para que eles apareçam
individualizados;
• Riqueza de detalhes- limite de resolução e não pelo
aumento dos objetos;
• O limite de resolução depende da objetiva, a ocular
não pode acrescentar detalhes à imagem.
LR: K x comprimento de onda
(obj.) AN
MICROSCÓPIO DE POLARIZAÇÃO
• O microscópio de polarização é semelhante a
microscópio de luz, acrescido de dois prismas ou dois
discos polaróides, que permitem estudar certos
aspectos da organização molecular dos constituintes
celulares.
• O microscópio de polarização serve para
individualizar a estrutura que se quer analisar.
Um fragmento de mesentério do rato
Sob luz polarizada, as fibras de colágeno 
exibem intensa birrefringência e aparecem 
brilhantes ou em amarelo. Aumento médio.
Imagem retirada do Livro: JUNQUEIRA & 
CARNEIRO, Histologia Básica, 10ª ed., 
Ed.Guanabara Koogan (Pg. 5 - Fig. 1.4)
MICROSCÓPIO 
DE CONTRASTE 
DE FASE
• É empregado no
estudo de células
vivas.
• Conforme a densidade
do material, a luz o
atravessa com mais ou
menos intensidade,
diferenciando a
coloração do objeto.
MICROSCÓPIO CONFOCAL
• Iluminação feita por
feixes de raios laser;
• Soluciona o problema
da imagem borrada
fornecida pelo
microscópio óptico.
Construção 3D de Células da Mesoderme de 
Embriões de Galinha (Gallus gallus)
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO
• Feixe de elétrons, acelerados por diferença de
potencial de 60.000 volts, têm um comprimento de
onda de 0,005nm;
• Dificuldades em se preservar as células e em se obter
cortes extremamente finos;
COMPONENTES 
DE UM MICROSC. 
ELETRÔNICO
• Os elétrons são obtidos
pelo aquecimento de um
filamento de tungstênio- o
cátodo- que emite elétrons;
• Estruturas elétron-densas:
estruturas nas células que
não formarão imagem;
• Tela de ZnS ou sobre um
filme fotográfico.
• Trajeto de elétrons é feito 
no vácuo;
• Visualização de células 
fixadas;
• Fixação: Glutaraldeído 
tamponado a pH 7,2 e 
com tetróxido de ósmio;
• Ósmio atua como 
contraste- desvio de 
elétrons;
• Espessura: 20-100nm 
(resina epóxi);
• Micrótomos: navalhas de 
vidro ou diamante.
• Além dos contrastes,
usa-se também a
coloração negativa;
• Corante fica entre as
estruturas e penetra em
suas depressões
• Ressaltar a forma dos
bacteriófagos.
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE 
VARREDURA
• Usa também um feixe de 
elétrons;
• Fornece imagens 
tridimensionais, mas não 
tem alto poder de resolução 
quanto o microsc. 
eletrônico,
• O material não precisa ser 
cortado;
• Objetos de 1cm ou + podem 
ser observados inteiros.
• Estudo da superfície de 
células mantidas em cultivo.
Citoquímica
• Estuda a localização intracelular das diversas 
substâncias que compõem as células ;
• Reação indicativa pela intensidade da cor: conc. da 
substância a ser analisada;
• DNA: Reação de Feulgen (complexo de cor vermelha);
• RNA: digestão pela ribonuclease - azul de toluidina
(corante básico);
• Catecolaminas: reação com formaldeído- produzindo 
compostos fluorescentes.
• Proteínas: identificação de aminoácidos;
• Polissacarídeos: PAS (glicogênio)- cor vermelha;
• Enzimas: reação substrato-enzima.
Imunocitoquímica localiza moléculas 
protéicas específicas
• Reação antígeno-anticorpo.
• Imunocitoquímica direta
Recentemente
ME
• Imunocitoquímica indireta (+usada)
Por centrifugação é possível obter 
organelas citoplasmáticas e estudar 
suas propriedades
• Centrifugação com sacarose (mantém a integridade dos 
componentes celulares e evita a tendência de as organelas 
aglutinarem-se quando as células se rompem)
Partículas separadas contra gradiente 
de densidade
É possível separar as células de um 
tecido e isolar um determinado tipo 
celular .
Estudo de células vivas e culturas de 
células animais e vegetais- corantes 
supravitais- verde jano.

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