12 - Técnicas Assépticas

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TÉCNICAS ASSÉPTICAS E SEMEADURA 
DE MICRO-ORGANISMOS. 
UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ 
DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA 
OBJETIVOS DA PRÁTICA 
Treinar os alunos na manipulação de meios e 
culturas em condições de assepsia. 
Executar técnicas de semeadura de micro-
organismos em meios sólidos e líquidos. 
INTRODUÇÃO 
O isolamento, cultivo e identificação dos micro-
organismos requerem técnicas adequadas de 
inoculação em meios de cultura que permitam o 
rápido crescimento, livre de contaminações. 
Técnicas assépticas  estabelecimento de uma 
zona de esterilidade na qual se deve trabalhar, a fim 
de preservar a pureza do cultivo e minimizar os 
riscos de infecção ou intoxicação no laboratório. 
Produto estéril  quando não contém nenhuma 
forma de micro-organismo vivo. 
Deve-se trabalhar em áreas 
previamente limpas e desinfetadas 
para evitar a contaminação. 
Há várias técnicas de inoculação de 
micro-organismos. 
Assepsia 
 Série de procedimentos utilizados para 
impedir a contaminação durante a 
manipulação de culturas e meios de cultura 
estéreis. 
Técnicas assépticas 
Formas de transferência do inóculo 
Líquido Sólido 
Semi-sólido Inclinado 
Técnicas de Semeadura 
 Inoculação por estrias em placas  
utilizado para obtenção de culturas puras 
(isoladas) e estudo de caracteres culturais. 
Envolve o isolamento em toda placa ou em 
quadrantes 
Inoculação em tubos  pode ser feito em 
meios sólidos (camada alta ou inclinado), 
semi-sólidos e líquidos. 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
EM MEIO LÍQUIDO: 
 Trabalhar em áreas previamente limpas e desinfectadas. 
 Flambar a alça de inoculação ao rubro, e a seguir 
deixá-la esfriar próximo à chama. 
 Tomar o tubo a ser inoculado e identificá-lo. 
 Tomar o tubo com a cultura e agitá-lo levemente. 
 Retirar o tampão de algodão com o dedo mínimo e 
flambar a boca do tubo. 
 Introduzir a alça até tocar o meio e retirá-la após 
colocar uma gota da suspensão. 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
EM MEIO LÍQUIDO: 
 Flambar novamente a boca do tubo e recolocar o 
tampão de algodão. 
 Tomar o tubo com o meio esterilizado, retirar o 
tampão, flambar a boca do tubo. 
 Introduzir a alça carregada de micro-organismo no 
interior do tubo. 
 Retirar a alça e flambar novamente a boca do tubo e 
recolocar o tampão de algodão. 
 Colocar o tubo na estante; flambar a alça e recolocá-
la na estante. 
INOCULAÇÃO EM TUBOS 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
 EM MEIO SEMI-SÓLIDO EM TUBO: 
 Trabalhar em áreas previamente limpas e desinfectadas. 
 Flambar a agulha de inoculação ao rubro, e a seguir deixá-la 
esfriar próximo à chama. 
 Tomar o tubo a ser inoculado e identificá-lo. 
 Tomar o tubo com a cultura e agitá-lo levemente. 
 Retirar o tampão de algodão com o dedo mínimo e flambar a 
boca do tubo. 
 Introduzir a agulha até tocar o meio e retirá-la, após colocar uma 
gota da suspensão. 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
 EM MEIO SEMI-SÓLIDO EM TUBO : 
 Flambar novamente a boca do tubo e recolocar o tampão de 
algodão. 
 Tomar o tubo com o meio esterilizado, retirar o tampão e 
flambar a boca do tubo. 
 Introduzir a agulha carregada de micro-organismo no interior do 
tubo; levando-a delicadamente ao interior do meio semi-sólido. 
 A inoculação deverá ter profundidade de 2/3 do meio semi-sólido e 
apenas uma picada. 
 Retirar a agulha, flambar novamente a boca do tubo e recolocar o 
tampão de algodão. 
 Colocar o tubo na estante; flambar a agulha e recolocá-la na 
estante. 
INOCULAÇÃO EM TUBOS 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
EM MEIO SÓLIDO INCLINADO: 
 Trabalhar em áreas previamente limpas e desinfectadas. 
 Flambar a agulha ou alça de inoculação ao rubro, e a 
seguir deixá-la esfriar próximo à chama. 
 Tomar o tubo a ser inoculado e identificá-lo. 
 Tomar o tubo com a cultura e agitá-lo levemente. 
 Retirar o tampão de algodão com o dedo mínimo e 
flambar a boca do tubo. 
 Introduzir a agulha/alça até tocar o meio e retirá-la 
após colocar uma gota da suspensão. 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
 EM MEIO SÓLIDO INCLINADO : 
 Flambar novamente a boca do tubo e recolocar o tampão 
de algodão. 
 Tomar o tubo com o meio esterilizado, retirar o tampão, 
flambar a boca do tubo. 
 Introduzir a alça carregada de micro-organismo no interior 
do tubo; levando-a delicadamente ao interior do tubo e 
fazendo estrias na superfície do ágar com a alça; se agulha, 
inocular em linha reta. 
 Retirar a alça ou agulha, flambar novamente a boca do tubo e 
recolocar o tampão de algodão. 
 Colocar o tubo na estante; flambar a agulha/alça e recolocá-
la na estante. 
INOCULAÇÃO EM TUBOS 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
EM MEIO SÓLIDO EM PLACA: 
 Mesmo procedimento do sólido inclinado, só 
que em placas, inocular com a alça, podendo as 
estrias serem simples ou em quadrantes (3 
ou 4). 
 Tem-se que obter rarefação suficiente do 
material para que se formem colônias isoladas. 
TÉCNICAS DE SEMEADURA 
 O sucesso da semeadura está em: 
 Haver um grande número de estrias. 
 Não se perfurar o meio. 
 Não se voltar a alça sobre a estria. 
 Pegar pequena quantidade de material para semear. 
INOCULAÇÃO 
Esgotamento por estrias 
Técnica de semeadura por esgotamento