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Artigo sobre Bioimpressão de trombose em Chip

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Fator de Impacto: 6.045
Introdução 
Trombose
Doenças Cardiovasculares
Embolia Pulmonar 
Coágulo Permanente
Síndrome Pós-trombótica
Introdução 
Trombo fibrótico
Migração 
Fibroblastos - endotélio danificado
Colágeno I
Síndrome pós-trombótica
	Edema
	Dor
	Ulcerações
Plaquetas se aderem - vWF. 
Simultaneamente a cascata de coagulação. 
Clivagem de fibrinogênio - fibrina através da trombina
Introdução 
Fator de Von Willebrand
Introdução
tPA			
Ativador de Plasminogênio Tecidual
Plasminogênio - Plasmina
					 Fibrina
Fibrinólise
Este agente converte o plasminogênio na plasmina, que degrada a fibrina (fibrinólise)
Investigar a hemodinâmica associada à trombose.
 Mimetizar os microambientes vasculares.
Bioimpressão em 3D - Gerar um modelo biomimético de trombose humana em um chip.
Canais ocos revestidos com uma camada confluente de endotélio incorporada em GelMA
Objetivo
Materiais e Métodos
Materiais e Métodos
Células endoteliais de veia umbilical humana (HUVECs)
HUVECs que expressam GFP.
Fibroblastos dérmicos humanos.
5% GelMA + SFB + 0,2% Fotoiniciador
GelMA + 3 x 106 células/mL
Materiais e Métodos
Molde - 8mm × 4 mm × 4 mm
GelMa - UV em ambos os lados
PBS a 4ºC - 15 minutos - Remoção do Pluronic
Remoção dos canais com uma seringa
12 x 106 células/ml - endotelial - 30min
No caso de um canal direto, a introdução de um coágulo sanguíneo levaria ao bloqueio completo do canal e, portanto, proibiria estudos de perfusão. Para estudar a dinâmica do fluxo
Dinâmica do Fluxo:
PBS contendo microbeads fluorescentes suspensas.
 
Microscópio de Fluorescência.
Image J - velocidade do fluido na entrada, ponto de bifurcação e de saída.
Materiais e Métodos
bomba de seringa (New Era Pump Systems) equipada com seringas de 3 mL conectadas às amostras através de um tubo Tygon (Cole-Parmer) e conectores metálicos (Instech).
Resultados e Discussão
Resultados e Discussão
Endotelização dos canais.
CD31 e núcleos.
A molécula de adesão celular endotelial plaquetária
Resultados e Discussão
Indução da coagulação - 10% de uma solução aquosa de 0,1M CaCl2 em PBS junto ao sangue. 
Sangue injetado nos microcanais por agulha e seringa.
Resultados e Discussão
Em 10 minutos - coagulação
Resultados e Discussão
Análise Histológica
Um índice de fluxo intermediário de 1 mL h-1 foi selecionado para os estudos subseqüentes de trombólise 
Resultados e Discussão
Uso de tPA.
Dissolução dos coágulos nos canais para trombos não fibróticos.
Incapacidade de análise quantitativa.
A perfusão contínua com tPA foi utilizada para avaliar a dissolução dos coágulos não fibróticos e demonstrar a relevância clínica do modelo. 1mg/ml
A perfusão com tPA foi realizada a uma taxa de fluxo de 1 mL h até 2 h
Resultados e Discussão
Influência da exposição UV na viabilidade dos fibroblastos:
Resultados e Discussão
Morfologia dos Fibroblastos encapsulados dentro do GelMA.
Após 7 dias de cultura
Resultados e Discussão
Proximidade com ambiente in vivo.
Resultados e Discussão
Bom modelo para se estudar trombose, trombólise e fibrólise.
Melhorar modelos existentes na literatura.
Permitiu criar estruturas realistas.
Observar a interação entre diferentes componentes.
Inclusão das células musculares lisas.
Conclusões

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