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Bactérias Fitopatogênicas Universidade Federal de Goiás Escola de Agronomia Disciplina: Fitopatologia I Bactérias Fitopatogênicas Prof. Renato Andrade Teixeira 2014 Definição • procariotos • unicelulares • heterotróficos• heterotróficos Bactérias são procariontes Procariontes: organismos unicelulares e microscópicos que não possuem núcleo organizado O tamanho das bactérias geralmente varia de 0,5 a 5 µm CARACTERISTICAS Só podem ser vistas com microscópio Sem microscópio é possível ver as colônias DIMENSÕESDIMENSÕES •Bactéria é um organismo unicelular, procarionte, que pode ser encontrado na forma isolada ou em colônias e pertencentes aos domínios Bacteria e Archaea. •Microrganismo constituído por uma célula sem envoltório nuclear e nucleóide. Diferenças entre procariotos e eucariotos Reino Procaryotae Bacteria Divisão Gracilicutes (Gram negativa) Classe Proteobacteria Família Enterobacteria PseudomonadaceaePseudomonadaceae Rhizobiaceae Divisão Firmicutes (Gram positiva) Classe Firmibacteria Thallobacteria Mollicutes (membrana celular e ausência de parede) Divisão Tenericutes Classe Mollicutes Família SpiroplasmataceaeFamília Spiroplasmataceae (ainda desconhecida) Agrios (2004) Formas das células bacterianas BACTÉRIAS: MORFOLOGIA Estreptococos BacilosCocos Espiroquetas Vibrião Formas e arranjos das células bacterianas Formas e arranjos das células bacterianas Estrutura da Célula BacterianaEstrutura da Célula Bacteriana Estrutura FlageloFlagelo - Motilidade • 15.000 rpm • Deslocamento até 50 µm/s - Quimiotaxia • Atração• Atração • Repelência Importância na sistemática Difícil visualização FlageloFlagelo: Estruturas alongadas, delgadas, sinuosa e natureza protéica (Flagelina) Ondulatório e Helicoidal Tipos de flagelosTipos de flagelos Monotríquia Xanthomonas spp. Lofotríquia Burkolderia spp. Tipos de flagelosTipos de flagelos Peritríquia Erwinia spp. Atríquia – Clavibacter spp. PilusPilus ((PiliPili) e) e FímbriasFímbrias • Não tem função de mobilidade → recombinação bacteriana – pili • Aderência ao hospedeiro (Fímbrias) • Variabilidade (pili) -conjugação -transdução Pilus de conjugaçãoPilus de conjugação CápsulaCápsula Cobertura viscosa de natureza polissacarídica (Exopolissacarídeo {EPS}– mais externo a capsula) • Aderência • Proteção contra dessecamento• Proteção contra dessecamento • Patogenicidade (algumas bactérias) • Toxina • Virulência • Não essencial a vida Parede celularParede celular • Envoltório rígido (20% do peso da célula) – Pressão de 2 atm • Principal componente: peptídeo-glicano • Estrutura e composição diferente : • Gram + (Menor permeabilidade – solúvel ) {Sem fio} – Uma camada de PC • Gram – (Maior permeabilidade - insolúvel) {Fio} – Pelo menos duas camadas de PC P a r e d e c e l u l a r P a r e d e c e l u l a r P a r e d e c e l u l a r P a r e d e c e l u l a r Membrana citoplasmáticaMembrana citoplasmática • Permeabilidade seletiva – entra ou sai • Síntese da parede celular • Geração de energia (mesossomas - invaginações) • Transporte ativo de proteínas • Rotação flagelar • Replicação do cromossomo (divisão celular) CitoplasmaCitoplasma • Nucleóide: material genético DNA (cromossomo circular – 1mm) • Plasmídeos: anéis de DNA com 1 ou 2 genes • Ribossomos – síntese de proteínas síntese de proteínas PlasmídeosPlasmídeos �Pequenos fios de DNA � Idênticos em estrutura ao cromossomo da bactéria, diferindo em: � Tamanho� Tamanho � Essencialidade � Tipos de genes �Podem ser perdidos ou transferidos Genes em plasmídeosGenes em plasmídeos • Auto-replicação • Auto-transferência • Resistência a antibióticos • Resistência a metais pesados • Produção de alguns pigmentos • Síntese de algumas toxinas EndósporoEndósporo Sobrevivência (Gram +) Bacillus e Clostridium � Responsável pela resistência da Endósporo Célula de repouso Sobrevivência (Gram +) � Responsável pela resistência da bactéria em ambientes desfavoráveis; � Resistência ao calor e ao dessecamento; Bacillus e Clostridium Esporulação Streptomyces ReproduçãoReprodução Variabilidade Genética Mecanismos de variabilidadeMecanismos de variabilidade: Mutação Transferência de genes Transformação Transdução Conjugação Mecanismos de variabilidadeMecanismos de variabilidade: 1) Conjugação – transferência direta de genes de uma célula bacteriana para outra, utilizando plasmídeos de conjugação. Pili de conjugação 2) Transdução Transferência de fragmentos de DNA de uma bactéria a outra por intermédio de bacteriófagos (fagos – vírus que infectam bactérias) TRANSDUÇÃO Fago Integração Profago DNA do fago com genes da bactériaO fago infecta nova bactéria. Genes de outra bactéria são introduzidos e integrados ao DNA da bactéria hospedeira. Causa a morte da bactéria 3) Transformação Incorpora fragmentos de DNA livres no ambiente ♦♦Pouca frequência na naturezaPouca frequência na natureza ♦♦Muito usado em engenharia genéticaMuito usado em engenharia genética MORTE LISEMORTE LISE CÉLULA BACTERIANA FRAGMENTOS DE DNA ADSORÇÃOPENETRAÇÃOINSERÇÃO Consequência da variabilidade • Alteração na composição do DNA • Surgimento de população morfologicamente idênticas porém com habilidade patogênica distinta: - Biovar – fisiologicamente e / ou bioquimicamente especiais - Patovar – habilidade patogênica - Patovar – habilidade patogênica Xanthomonas axonopodis pv. phaseoliXanthomonas axonopodis pv. citri Crescimento bacteriano Crescimento bacteriano –– exponencialexponencial Consequências de um crescimento exponencialConsequências de um crescimento exponencial 1 célula com tempo de geração de 30 minutos; Depois de 72 h de crescimento exponencial: 2114 células ou 22 x 1042 células Uma célula pesa 10-12 gramas – peso total da cultura de 22 x 1030 gramas ou 22 x 1024 toneladas Massa maior que a massa da Terra DC Fase de Morte ou Declínio Fase Estacionária Fase Lag ou de Adaptação Curva de Crescimento de Uma População Bacteriana E BA Fase Exponencial ou Logarítmica - Lag fase: pequena população bacteriana. - Fase logaritmica ou exponencial: multiplicação em velocidade máxima.em velocidade máxima. - Fase estacionária: número de células viáveis cte. - Fase morte: número células mortas maior que se dividem. Classificação bacterianaClassificação bacteriana Procariotas Procariotas fitopatogênicosfitopatogênicos - Fastidiosas – meio de desenvolvimento mais rico - Fastidiosas – meio de desenvolvimento mais rico em nutrientes – feixe vascular - Não fastidiosos: menor exigência nutricional Crescimento em meio de cultura de rotina (fastidiosas) - Meio NA (Nutriente-Ágar)- Meio NA (Nutriente-Ágar) - Meio 523 (Kado & Heskel, 1970) Não fastidiosas Pseudomonas sp. Xanthomonas sp. Técnica da risca → obtenção de uma colônia de bactéria Morfologia das colônias circular enrolado Forma da colônia inteiro borda Elevação Ondulado levantada Plano Convexo Bactérias fastidiosasBactérias fastidiosas • Xilema→ Xylella (Gram -) • Floema→ Liberibacter (Gram -) e Spiroplasma (Gram +) Métodos para identificação Métodos para identificação 1) Teste da exsudação em folha 2) Teste da exsudação em haste 3)3) Coloraçãode Gram Coloração de Gram Resultado da coloração de Gram Staphylococcus sp. (Gram +) Pseudomonas aeruginosa (Gram -) 4) Diferenciação de Gram no teste de solubilidade em KOH – hidróxido de potássio (alternativo) -Gram -→ insolúvel - fio -Gram + → solúvel – sem fio 5) Catalase (peróxido de hidrogênio) 5) Catalase (peróxido de hidrogênio) 6) Teste da Oxidase (fitas de oxidase) Determina se a bactéria é - aeróbia obrigatória (+) ou - anaeróbia facultativa (-) Ex.: Erwinia (-) e Agrobacterium (+) 7) Teste da urease
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