aula de citologia e embriologia

Prévia do material em texto

INTRODUÇÃO À CITOLOGIA E SUAS TÉCNICAS 
 
 
UNINASSAU 
Disciplina de Citologia e Embriologia 
Enfermagem 
Prof.: Celso Alexandre 
Bacharel em Ciências Biológicas 
Mestre em Biologia Celular e Molecular Aplicada 
Doutorando em Genética 
Células: 
Aspectos 
Gerais 
Microscopia 
òptica 
Microscopia 
Eletrônica 
Métodos de 
estudo das 
células e 
tecidos 
INTRODUÇÃO À CITOLOGIA 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Citologia: Kytos (célula) + logos (estudo) 
 
• Unidades funcionais e estruturais dos organismos 
• Possuem obrigatoriamente 
• Membrana 
• Citoplasma 
• Organelas 
• Material Genético 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• A diversidade celular é gigantesca 
• Células microscópicas (<0,1mm) 
• Células macroscópicas (>01mm) 
 
Ovócito I de 
Gallus gallus 
Alvéolos da 
laranja Óvulo Humano na ponta 
de um alfinete 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Existem dois grandes domínios na Natureza 
• Prokaryota ou Prokarya 
• Eukaryota ou Eukarya 
 
• Critério de classificação 
• Organização do material genético 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Domínio Prokaryota 
• Conhecidos como Seres Procariotos 
• Reino Monera 
• Bactérias 
• Arqueobactérias (Arqueas) 
• Eubactérias 
• Seres Unicelulares 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Organização Estrutural dos Procariotos 
• Células sem Carioteca (Membrana Nuclear) 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Cápsula 
• Parede Celular (Gram + ou -) 
• Membrana Plasmática 
• Hialoplasma (Citoplasma) 
• Ribossomos -> Polirribossomas 
• Cromossomo Bacteriano e Plasmídeos 
• Flagelos e Fímbrias 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Cápsula – bactérias patogênicas 
• Rigidez e Proteção contra: 
• Fagocitose 
• Desidratação 
• Bacteriófagos 
• Componentes 
• Glicoproteínas 
• Polissacarídeos 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Parede Celular 
• Composta principalmente de peptidoglicano 
• Mureína 
• Proteção física 
• Tensão, dissecação e lise 
• Confere a classificação de Gram 
• Positivo ou negativo 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Membrana Plasmática 
• Composição 
• Fosfolipoglicoproteica (bicamada fosfolipídica) 
• Permeabilidade Seletiva 
• Processos de transporte 
• Glicocálice 
• Sinalização celular 
• Respiração bacteriana 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Hialoplasma (Citosol) 
• Encontra-se no Citoplasma (espaço celular) 
• Composição altamente variável 
• É onde se encontra as organelas celulares e o 
material genérico bacteriano 
• Onde ocorre a maioria das reações químicas 
celulares 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Ribossomos 
• Organela responsável pela síntese proteica 
• Podem se aglomerar e formar os 
polirribossomos 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Cromossomo Bacteriano 
• DNA circular e desnudo 
• Possui aproximadamente 1mm de comprimento 
• Unido à membrana plasmática 
• Comporta a informação genética 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Plasmídeos 
• DNA circular 
• Possui genes que conferem resistência à 
antibióticos 
• Possuem replicação independente 
• Estão livres no hialoplasma 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Flagelos 
• Composição 
• Flagelina 
• Função motora 
• Diversos tipos 
• Monótricas (A) 
• Lofótricas (B) 
• Anfítricas (C) 
• Perítricas (D) 
 
 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Procariotos 
• Fímbrias – exclusividade de Gram - 
• Composição 
• Pilina e adesinas 
• Fímbrias de adesão 
• curtas, finas e rígidas 
• Fímbrias sexuais (pili) 
• Maiores e servem como duto de passagem de 
DNA 
 
 
 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Domínio Eukaryota – Células com Carioteca 
• Conhecidos como Seres Eucariotos 
• Reinos 
• Protoctista - Unicelulares 
• Fungi 
• Plantae 
• Animalia 
Protista Mastigophora 
Fungo Neotyphodium 
coenophialum 
Célula Epitelial Humana Alga Elodea 
canadensis 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Parede Celular – Fungos e Plantas 
• Membrana Plasmática 
• Hialoplasma 
• Organelas especializadas 
• Membrana Nuclear ou Carioteca (Núcleo) 
• Cromossomos 
• Flagelos e cílios 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Parede Celular 
• Fungos 
• Quitina 
• Plantas 
• Celulose 
• Proteção física e osmótica 
• Comunicação entre as células 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Parede Celular - Fungos 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Parede Celular - Vegetais 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Membrana Plasmática 
• Mesma estrutura e função dos procariotos 
• Pequenas diferenças 
• Principalmente no Glicocálice 
• Não é responsável pela respiração 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Membrana Plasmática 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Hialoplasma 
• Mais complexo que os procariotos 
• Diversidade maior de organelas 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Hialoplasma 
• Organelas 
 
 
MITOCÔNDRIAS 
Respiração 
celular 
RIBOSSOMOS 
Síntese Proteica 
RETÍCULO 
ENDOPLASMÁTICO 
RUGOSO 
Síntese e transporte 
proteico 
RETÍCULO 
ENDOPLASMÁTICO 
LISO 
Síntese e Transporte 
de Lipídeos 
COMPLEXO DE 
GOLGI 
Secreção 
Armazenamento 
Lisossomos 
Acrossomo 
LISOSSOMOS 
Digestão Celular 
CENTRÍOLOS 
Formam cílios, 
flagelos e o fuso 
mitótico 
Não existe em 
células vegetais 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Membrana Nuclear ou Carioteca 
• Duas membranas concêntricas 
• Continuação à membrana do Retículo 
Endoplasmático 
• Possui poros – entrada e saída controlada 
de substâncias 
• Principalmente proteínas sinalizadas 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Membrana Nuclear ou Carioteca 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Cromossomos 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Cromossomos – Empacotamento do DNA 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Flagelos e cílios 
• Composição 
• Microtúbulos – tubulina 
• Têm origem dos centríolos 
• Locomoção (espermatozóide), defesa do 
organismo (células epiteliais da traqueia), 
deslocamento de outras células (óvulo na 
tuba uterina) 
 
 
CÉLULAS: ASPECTOS GERAIS 
 
• Componentes Estruturais dos Eucariotos 
• Flagelos e cílios 
 
 
Flagelo 
Células: 
Aspectos 
Gerais 
Microscopia 
òptica 
Microscopia 
EletrônicaMétodos de 
estudo das 
células e 
tecidos 
INTRODUÇÃO À CITOLOGIA 
 
 
MICROSCOPIA ÓPTICA 
 
• Hans e Zaccharias Janssen (1590) 
• Aparelho com duas lentes que chamaram de 
microscópio 
 
• Robert Hooke (1665) 
• Analisa um pedaço de cortiça 
• Dá o nome aos espaços 
de células (pequenas celas) 
MICROSCOPIA ÓPTICA 
 
• Theodor Schwann (1839) 
• Observa existência de células nos animais e 
vegetais 
 
• A partir de então os microscópios ópticos se 
modernizaram 
MICROSCOPIA ÓPTICA 
 
• Princípio da microscopia óptica 
• Utilizar um conjunto de lentes para ampliar o 
espectro luminoso originário da amostra, e assim 
ampliar em N vezes o tamanho da imagem 
formada 
MICROSCOPIA ÓPTICA 
 
• Dimensões Biológicas 
Dimensões Ramo Estrutura Método de Análise 
0,1 mm ou mais Anatomia Órgãos Olho nu ou lupa 
100-10µm Histologia Tecidos Microscopia Óptica 
10-0,2µm (200nm) Citologia Células Eucariotas Microscopia Óptica 
Bactérias Microscopia de Raio X 
200-1nm Morfologia 
submicroscópica 
Componentes celulares Microscopia de Polarização 
Ultra-estrutura Vírus Microscopia Eletrônica 
Menos de 1nm Biologia Molecular Moléculas Microscopia Eletrônica 
Estrutura Molecular e 
Atômica 
Disposição dos Átomos Difração de raios X 
MICROSCOPIA ÓPTICA 
 
MICROSCOPIA ÓPTICA 
 
Células: 
Aspectos 
Gerais 
Microscopia 
òptica 
Microscopia 
Eletrônica 
Métodos de 
estudo das 
células e 
tecidos 
INTRODUÇÃO À CITOLOGIA 
 
 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
• Princípio da microscopia eletrônica 
• Ao invés de utilizar a luz (fóton) como na 
microscopia óptica, esta se baseia na interação de 
elétrons incidentes sobre a amostra a ser estudada 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
• Porque a resolução do microscópio eletrônico é maior 
que a do óptico? R:tamanho da onda eletromagnética 
Fótons Elétrons 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
• Microscopia eletrônica de Transmissão 
• geram imagens ou figuras de difração 
• São facilmente moldáveis 
• Campo claro 
• Campo escuro 
• Alta resolução 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
• Microscopia eletrônica de Varredura 
• Alta resolução 
• Mostra variações espaciais (relevo, textura) 
• Os sinais de maior interesse: 
• Elétrons secundários 
• fornecem imagem de topografia 
• Elétrons retroespalhados 
• fornecem imagens características de 
variação de composição 
. 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
 
• Microscopia eletrônica de Varredura 
Células: 
Aspectos 
Gerais 
Microscopia 
òptica 
Microscopia 
Eletrônica 
Métodos de 
estudo das 
células e 
tecidos 
INTRODUÇÃO À CITOLOGIA 
 
 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• É um conjunto de operações empregado em um 
material organizado (tecido biológico), com o 
objetivo de possibilitar seu estudo por meio de um 
microscópio, possibilitando a observação de 
estruturas não visíveis ao olho nu 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• É um conjunto de operações empregado em um 
material organizado (tecido biológico), com o 
objetivo de possibilitar seu estudo por meio de um 
microscópio, possibilitando a observação de 
estruturas não visíveis ao olho nu 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Passos que podem existir na Técnica Histológica 
• Obtenção 
• Espalhamento e Fixação do material 
• Lavagem e Desidratação 
• Inclusão 
• Microtomia 
• Coloração e Montagem 
• Observação 
 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Obtenção 
• Etapa muito importante 
• Delimita a qualidade de seu material 
• Deve ser realizada com o máximo de assepsia 
• Pode-se obter material de diversas maneiras 
 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Obtenção 
• Esfregaço 
bucal 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Obtenção 
• Sangue periférico 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Obtenção 
• Biópsia 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Obtenção 
• Necrópsia 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Espalhamento e fixação 
• Permite uma análise de estruturas de forma 
separada 
• Prepara o material para os procedimentos 
seguintes 
• Diversas maneiras de espalhar e fixar o 
material 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Espalhamento 
• Estiraço 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Espalhamento 
• Esmagamento 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Espalhamento 
• Gotejamento 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Fixação 
• Uso de substância fixadora 
• Fromol 
• Carnoy (3 etanol:1 ác. Acético) 
• Acetona 
• Glutaraldeído 
• Tetróxido de Ósmio 
 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Lavagem e Desidratação 
• Com o material fixado retira impurezas e o 
excesso de água 
• Diversas substâncias (ácidas, básicas, 
salinas...) 
• Desidratação pode ser a vácuo, com uso da 
temperatura, com uso de álcool ou outras 
substâncias 
 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Inclusão 
• Utiliza-se principalmente a parafina 
• resinas plásticas, como o glicol metacrilato 
• Prepara o material para o uso do micrótomo 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Microtomia 
• Utilizando o micrótomo, visa “fatiar” o tecido 
para a visualização no microscópio 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Coloração 
• Impregnar as estruturas a serem visualizadas 
com uma substância que dá contraste 
• Natureza química do corante define sua 
afinidade por determinada estrutura ou 
molécula celular 
• Maioria de natureza orgânica e aromática 
• ligação eletrostática ou salina 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Coloração 
• Básicos 
• Azul de metileno e Água iodada – núcleo 
• Vermelho neutro – Vacúolos 
• Ácidos 
• Eosina e Fucsina ácida – Citoplasma 
• Neutros 
• Violeta de Genciana – Cromossomos 
• Soluto de lugol - Amido, paredes celulósicas 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
Corante 
 
O que detecta 
 
Tecido e Órgão 
 
Cores 
 
Giemsa Células hematopoiéticas Medula óssea e baço 
Núcleos - azul; granulações 
acidófilas - rosa; granulações 
basófilas - azul 
Reticulina Fibras reticulares Tecido hepático 
Fibras de reticulina - preto; 
núcleos - vermelho 
Orceína Fibras elásticas 
Tecido pulmonar, artérias de 
grande calibre 
Fibras elásticas - castanho 
escuro; núcleos - azul; fibras de 
colagénio e restantes estruturas 
- incolores 
Tricómio de Masson Fibras de colagénio Útero, apêndice 
fibras - azul; núcleos - 
azul/preto; músculo, 
citoplasma, eritrócitos e 
queratina - vermelho; grânulo 
argirófilos - preto ou vermelho 
Metanamina Prata Membrana Basal Rim 
membranas basais - preto; 
fundo - verde ou vermelho 
PAS com e sem diastase Glicogénio Fígado 
núcleos - azul; mucinas neutras 
e algumas mucinas ácidas - 
magenta; membrana basal - 
magenta; parede de fungos - 
magenta; glicogénio - magenta 
no sem diastase e incolor nocom diastase 
 
 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
 
Azul de Alcian pH=1 Mucinas ácidas sulfatadas Intestino delgado 
mucinas ácidas sulfatadas - azul 
pálido; núcleos - rosa 
avermelhado 
PAS com Azul de Alcian Mucinas ácidas e neutras Rim 
Mucinas ácidas - azul; mucinas 
neutras - magenta; mistura de 
mucinas ácidas e neutras - 
púrpura; núcleos - azul pálido 
Vermelho de congo Amilóide 
Tecido com amilóide (é uma 
substância - parte de patologia) 
núcleos - azuis; amilóide - 
vermelho (com o polarizador é 
verde birrefringente - amarelo) 
Oil Red Lípidos neutros 
Qualquer um (todos os tecidos 
contêm lípidos 
Lípidos - vermelho; núcleos - 
azul 
Perl's Pigmentos férricos Pulmão ou fígado com patologia 
pigmento férrico - azul de 
prússia; citoplasma (fundo) - 
rosa avermelhado 
Halls Pigmentos biliares Fígado ou vesícula biliar 
bilirrubina (pigmento biliar) - 
verde esmeralda; colagénio - 
vermelho; citoplasma (fundo) - 
amarelo 
Zhieh-Neelson Micobactéria AAR 
Tecido infectado pelo 
M.Tuberculosis 
micobactérias - rosa 
avermelhado; componentes 
acidófilos (fundo) - verde 
Giemsa modificado Helicobacter pylori Tecido gástrico infectado 
Microorganismos tipo 
Helicobacter pylori - azul 
escuro; fundo - vários tons de 
azul 
MÉTODOS DE ESTUDO DAS 
CÉLULAS E TECIDOS 
 
• Técnica Histológica 
• Montagem 
• Visa preservar a lâmina 
pelo maior espaço de tempo 
possível 
• Pode-se usar Xilol para 
lavagem 
• Meio de montagem como o 
Bálsamo do Canadá 
REFERÊNCIAS 
- De Robertis, E. M. F. Biologia Celular e Molecular. 14ª ed. Guanabara, Rio de 
Janeiro, 2003. 
 
- JUNQUEIRA, L.C.; CARNEIRO, J. Biologia celular e molecular. 8ª ed. Rio de Janeiro: 
Guanabara Koogan. 2005. 
 
- Alberts et al. Biologia Molecular da Célula. 5ª ed. Artmed, Ncaional, 2010. 
 
- Cooper, G. M. Hausman, R. E. A célula: uma abordagem molecular. 3ª ed. 
Artmed, Nacional, 2007. 
 
- MAILET, P. Biologia Celular. São Paulo: Editora Santos, 2003. 
 
- PADOVAN, P.A;. PADOVAN, I.P.; TAVARES, L.A. Atlas de Morfologia Microscópica. 
Fotomicrografias e eletromicrografias para o estudo da Citologia. 2.ed. Recife: 
Editora Universitária da UFPE, 2005. 
 
- Carvalho, H. F.; Recco-Pimentel, S. M. A célula. 3ª ed. Roca, 2013.