1.COLORAÇÃO DE GRAM

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INTRODUÇÃO 
 
 Coloração de Gram é uma técnica para diferenciação de microrganismos 
através das cores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu 
este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. 
 
Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias, após serem 
tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas. Assim, as que 
ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, 
foram chamadas de Gram-negativas. A técnica de Gram é fundamental para 
a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como 
técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia. 
 
 A presente prática tem por objetivo realizar a diferenciação de culturas 
bacterianas em gram-positivas e gram-negativas, através do método de coloração 
de Gram. 
 
 
 
 
MATERIAL E MÉTODOS 
 
 Para a presente prática foram utilizados os seguintes materiais: Cristal-violeta, 
lugol, fucsina, álcool, água destilada, culturas bacterianas (Escherechia coli e 
Streptococus aureus), lâmina, alça de laboratório, lamparina, óleo de imersão e água 
esterilizada. 
 As práticas foram idênticas para as duas culturas bacterianas. Iniciando-se 
com a coleta da bactéria com uma alça devidamente esterilizada, o material foi 
depositado em uma lâmina com uma gota de água sobre ela e espalhado em 
movimentos circulares e então secado sob a chama de uma lamparina. 
 Com a lâmina seca, aplicou-se então o corante cristal violeta até cobrir o 
esfregaço, deixando-o por 1 minuto e após esse tempo lavou-se a lâmina com água. 
Então a solução foi coberta com lugol por 1 minuto, removendo o excesso do 
produto com álcool (95%) até que não se desprenda mais o corante. O excesso de 
álcool é então removido com agua e o esfregaço é então coberto com fucsina 
durante 30 segundos. A lâmina é então lavada e seca sob chamas. 
 O material final é então observado sob os aumentos de 40X, 100X e 400X e 
por último é aplicado uma gota do óleo de imersão e visualizado no micrométrico 
com o aumento de 1000X. 
 
 
 
 
QUESTÕES 
 
1- Desenhe os campos observados: microrganismo utilizado, forma, arranjo e 
cor predominante. Relatar a diferença obtida na coloração de Gram. 
 
 
 
 Os resultados observados foram em A: (Escherechia coli), possuem forma de 
bastão tendo cores avermelhadas como predominantes, sendo portanto um bactéria 
gram-negativa. Em B: (Streptococus aureus) foi observado a forma de cocos e a 
coloração arroxeada, típico de bactérias gram-positivas. 
 A diferença na coloração se deve ao material presente na parede celular das 
duas bactérias, que com o complexo corante-iodo presente no interior da célula, com 
a aplicação de álcool, este penetra apenas nas membranas das gram-negativas, 
dissolvendo o complexo e eliminando, fato que não ocorre nas gram-positivas. Com 
a adição de fucsina, as bactérias gram-negativas ficam visíveis da cor vermelha (cor 
do reagente) enquanto as gram-positivas permanecem arrocheadas (cor do 
complexo) 
 
 
2- Qual é o propósito da fixação do esfregaço pelo calor? 
 Para aderir as bactérias junto a superfície lâmina para poder aplicar os 
corantes fazendo com que elas não sejam levadas junto com a água de lavagem 
durante o processo 
 
3- Por que a coloração de Gram é importante em Microbiologia? 
 
 
 É importante para a diferenciação da composição química da parede celular 
das bactérias, através do qual estas são divididas em dois grupos: gram-positivas e 
gram-negativas. 
 
4- Qual o primeiro corante usado na coloração de Gram e qual a sua função? 
 O primeiro corante utilizado é o cristal violeta, que devido à ligação iônica 
entre os grupos básicos do corante e os grupos ácidos dos constituintes da 
membrana celular das bactérias, tanto as gram-positivas quanto as gram-negativas 
absorvem o corante. 
 
 
5- Qual a importância do Lugol (Iodo) na coloração de Gram? 
 O iodo do lugol penetra nos dois tipos de célula e acaba formando um 
precipitado com o cristal violeta (retirando-o da proteína ou combinando-se com ele 
in situ). 
 
6- Qual a função do álcool na técnica de coloração de Gram? 
 O álcool tem por função a dissolução e eliminação do complexo corante-iodo, 
fato que ocorre apenas em bactérias gram-negativas, pois passa facilmente pela 
membrana destas deixando-as incolores. Nas gram-positivas o álcool penetra com 
dificuldade e o complexo permanece nas células, retendo assim a sua coloração. 
 
 
 
REFERÊNCIAS 
 
MOREIRA, F. S.; SIQUEIRA, J. O. Microbiologia e Bioquímica do Solo. 
Editora UFLA; Lavras – MG; 2006.