Biomol - exercícios para P1

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LISTA 1
1. Quais as diferenças de composição e estrutura entre RNA e DNA. Como se distingue entre uracila e timina, e entre ribose e desoxirribose? 
Existem duas diferenças principais entre o DNA e o RNA. O açúcar que os compõe - DNA possui uma molécula de desoxirribose e o RNA, uma de ribose; a composição de bases nitrogenadas - Timina é somente encontrada no DNA e Uracila é somente encontrada no RNA.
A Timina possui um grupo metil a mais do que a Uracila - é uma base nitrogenada de 5'-metil-uracila. A principal diferença entre a ribose e a desoxirribose (ambas são pentoses), é a presença da hidroxila na posição 2 da ribose, que é ausente na desoxirribose.
2. Escreva os nomes das bases, ribonucleosídeos, desoxirribonucleosídeos, ribonucleotídeos e desoxirribonucleotídeos do DNA e RNA.
3. RNA é facilmente hidrolizado por álcali, enquanto DNA não o é. Explique
O grupamento 2’ hidroxila do açúcar (ribose) do RNA está diretamente envolvido neste processo, pois os grupamentos hidroxila são os primeiros a serem rapidamente hidrolisados pela ação de um álcali, produzindo uma mistura de nucleosídeos 2’ e 3’ monofosfatos. Como o DNA não possui o grupamento 2’ hidroxila (desoxirribose), não é facilmente hidrolisado em condições alcalinas, o que torna o esqueleto do DNA mais estável quando comparado ao RNA.
4. Escreva a seqüência de bases da fita complementar do DNA dupla fita que apresenta uma fita simples com a seguinte seqüência: (5') ATGCCGTATGCATTGCATTC (3') Exprima, em porcentagem, a composição de bases do DNA de fita dupla.
(3') TACGGCATACGTAACGTAAG (5')
Total de bases das 2 fitas = 40
Então, 40 = 100%. Aplicando a regra de 3, teremos:
%Adenina= %Timina
40 - 100%	X= 27,5% de cada
11 - X%
Guanina= %Citosina
40 - 100%	X= 22,5% de cada
9 - X
5. Como são chamadas as ligações covalentes que unem dois nucleotídeos consecutivos nas moléculas de ácidos nucleicos? Esquematize estas ligações. E quais são as ligações não covalentes que unem as duas fitas?
Os nucleotídeos estão ligados por ligações covalentes que são chamadas ligações fosfodiésteres, entre o açúcar de um nucleotídeo e o grupo fosfato de outro.
As duas fitas do DNA são mantidas unidas por ligações de hidrogênio (ligações não covalentes) entre as bases nitrogenadas de cada uma das fitas.
 
6. Uma molécula de ácido nucleico tem a composição de bases abaixo. O que você pode afirmar sobre esta molécula? C = 24,1% G = 18,5% T = 24,6% A = 32,8%
É uma molécula de DNA fita simples. Como tem timina, é DNA; porém no DNA fita dupla as quantidades de guanina e citosina e de adenina e timina seriam iguais.
7. Explique por que ácidos nucleicos são desnaturados quando submetidos a alta temperatura ou pHs extremos. Uma molécula de DNA desnaturada por aquecimento pode ser renaturada? Como?
As duas fitas da dupla hélice do DNA podem ser reversivelmente separadas por altas temperaturas ou por exposição a pH elevado (pH 13). Isto porque ocorre ruptura das pontes de hidrogênio entre os pares de bases. Esse processo é denominado desnaturação. Durante a desnaturação nenhuma ligação covalente é desfeita, ficando, portanto, as duas fitas de DNA separadas. Quando o pH e a temperatura voltam ao normal, as duas fitas de DNA espontaneamente se hibridizam, formando novamente o DNA dupla fita, o que chamamos de renaturação. Este processo envolve duas etapas: a primeira é mais lenta pois envolve o encontro casual das fitas complementares de DNA, formando um curto segmento de dupla hélice. A segunda etapa é mais rápida e envolve a formação das ligações de hidrogênio entre as bases complementares reconstruindo a conformação tridimensional.
Os agentes desnaturantes têm maior facilidade em romper as duas pontes de hidrogênio que ligam as bases A e T, do que as três pontes de hidrogênio que ligam as bases C e G. Portanto, são necessárias temperaturas mais elevadas, pH mais alcalino e maiores concentrações de agentes desnaturantes para romper as bases C e G, doque as bases A e T.
8. O valor de Tm para o DNA pode ser calculado usando-se a fórmula: 
Tm = 69,3 + 0,41(%GC), onde GC é a porcentagem de Guanina + Citosina 
a) DNA de E. coli contém 50% GC. Calcular o valor de Tm para o DNA desta bactéria.
Tm (E.coli) = 69,3 + 0,41 (GC%) = 69,3 + 0,41 (50) = 69,3 + 20,5 = 89,8°C
b) As curvas de fusão da maioria dos DNAs que ocorrem naturalmente revelam que a Tm é normalmente maior do que 65ºC. Por que isto é importante para a maioria dos organismos?
Visto que a estabilidade da dupla hélice resulta em parte do grande número de pontes de hidrogênio entre os pares de bases, o valor de Tm indica a estabilidade da dupla fita do DNA. Como Tm é a temperatura necessáriapara desnaturar 50% da fita dupla do DNA e isto ocorre pelo rompimento das pontes de hidrogênio, isto indica que o DNA da maioria dos organismos se mantém estável a temperaturas superiores a 65°C, o que é muito importante pois, exceto em alguns vírus, o DNA contém os genes, responsáveis pelo comando da atividade celular e pelas características hereditárias.
c) Como varia o valor da Tm com a força iônica da solução? 
	Quanto maior a concentração de sal da solução (maior a força iônica), maior a temperatura na qual o DNA irá de desnaturar. Os esqueletos das duas fitas de DNA contêm grupos fosforila, que possuem carga negativa. Essas cargas negativas estão bastante próximas entre as duas fitas, facilitando a sua separação. Em condições de força iônica elevada, as cargas iônicas estão protegidas por cátions, estabilizando a hélice. Ao contrário, em baixas forças iônicas, as cargas negativas desprotegidas tornam a hélice menos estável.
d) O que acontece com a Tm quando se adiciona etanol (solvente relativamente não polar) à solução de DNA? (Lembre-se que forças hidrofóbicas entre as bases são muito importantes para a estabilidade do DNA).
	Como o etanol é um solvente relativamente não polar e a estrutura do DNA é mantida majoritariamente por interações majoritariamente hidrofóbicas, o DNA é desidratado na presença de etanol (que interage com as ligações hidrofóbicas) e a Tm diminui (facilita desnaturação). O DNA é uma molécula polar que tende a não ser solúvel em álcool e, deste modo, suas moléculas se agrupam.
9. Descreva os principais experimentos que indicaram que o DNA é o material genético.
Experimento de Oswald Avery
A maioria dos cientistas dizia que o responsável pela transferência de material genético entre as células era as proteínas. Mas após repetir a experiência muitas vezes, Avery provou que era o DNA o responsável pela transferência de material genético entre células num processo chamado "transformação". A descoberta sugeria que o DNA seria o material genético básico da célula, fato que veio a ser confirmado por cientistas posteriores.
Experimento de Hersey e Chase
Evidência adicional indicando que o DNA é o material genético resultou de um estudo com o bacteriófago (fago) T2. Hersey e Chase fizeram uma série de experimentos para determinar se a proteína ou o DNA do fago era transmitido na reprodução. Cultivaram o fago T2 em dois meios separados; bactérias E. coli foram infectadas pelos fagos contendo ou suas proteínas ou o seu DNA marcados com isótopos radioativos; as cápsulas dos fagos foram separadas das células e as partículas dos fagos suspensas. Viram que o DNA do vírus entra na célula hospedeira, enquanto a capa de proteína fica fora da célula. Como a prole do vírus é produzida dentro da célula, concluiu-se que a informação genética que dirige a síntese tanto das moléculas de DNA quanto das capas de proteína da prole viral deve estar presente no DNA parental.
LISTA 2
1. Cite os principais tipos de RNA encontrados nas células e como eles se diferenciam quanto à estrutura, tamanho, abundância e função.
tRNA: Aproximadamente 15% do total de RNA celular correspondem aos tRNAs. Para desempenhar seu papel na síntese de proteínas, eles ativam os aminoácidos que serão transportados para os ribossomos e transferem-nos para a cadeia polipeptídica nascente;
e reconhecem a informação contida nos códons (seqüência de três nucleotídeos adjacentes em um ácido nucléico, que codifica um aminoácido específico) do mRNA, assegurando que o aminoácido correto seja incorporado à cadeia peptídica crescente. Os tRNAs são relativamente pequenos. Apresentam uma estrutura secundária semelhante a uma folha de trevo.
rRNA: representa cerca de 80% do RNA presente na célula. É o RNA de maior peso molecular e constituinte majoritário do ribossomo, organóide relacionado à síntese de proteínas na célula. Os ribossomos são sempre constituídos de duas subunidades de tamanhos diferentes. Cada subunidade é formada de uma a três moléculas de rRNA e inúmeras proteínas diferentes. Os rRNAs possuem estrutura estável devido à associação com as proteínas ribossomais. 
mRNA: são os menos abundantes, entre 5 e 10% do RNA celular total. As seqüências de bases do mRNA determinarão a ordem dos aminoácidos nas proteínas sintetizadas nos ribossomos. Apresentam muita variação no tamanho, pois eles codificam proteínas (determinam a seqüência de aminoácidos nas cadeias polipeptídicas) dos mais diversos tamanhos. Responsáveis pela transferência de informação do DNA até ao local de síntese de proteínas, na célula. Durante a transcrição a RNA-polimerase faz a cópia de um gene do DNA para o mRNA.
2. Após a infecção de E. coli com o bacteriófago T2, quais dos seguintes eventos ocorrem e em que ordem?
(a) novas proteínas são sintetizadas 
(b) novos RNAs são sintetizados 
(c) novos ribossomos são sintetizados 
(d) novos RNAs se associam a novos ribossomos 
(e) novos RNAs se associam a ribossomos pré-existentes
	b - e - a
3. Uma fita de um fragmento de DNA isolado de E. coli tem a seguinte sequência: 5'...AGGTTACCTAGTTGC...3' Suponha que um mRNA seja transcrito a partir deste DNA usando a fita complementar como molde. Qual será a seqüência deste mRNA? Por que pode ocorrer formação de um híbrido RNA-DNA?
	Molde: 3’... TCCAATGGATCAACG ...5’
	mRNA: 5’... AGGUUACCUAGUUGC ...3’
	Após a formação da primeira ligação fosfodiéster e a dissociação da subunidade S, inicia-se a fase de alongamento. Durante essa fase, o RNA recém-sintetizado pareia-se temporariamente com a fita molde de DNA formando um híbrido RNA-DNA em que as fitas são complementares: U-A, C-G. Uma vez iniciada, a transcrição segue numa velocidade de aproximadamente 50 nucleotídeos por segundo, estando a RNA polimerase ligada à fita molde de DNA até encontrar o sinal de término da transcrição.
4. Qual é a seqüência do polipeptídeo que seria codificado pelo mRNA sintetizado na questão 3? Assuma que o quadro de leitura começa com o primeiro nucleotídeo mostrado.
	5’... AGGUUACCUAGUUGC ...3’
	AGG = arginina; UUA = leucina; CCU = prolina; AGU = serina; UGC = cisteína.
5. Baseando-se na lista de códons e aminoácidos abaixo, quais das seguintes afirmações são corretas? 
AGU = serina; AGC = serina; AAU = asparagina; AAC = asparagina; AUG = metionina; AUA = isoleucina 
(a) o código genético é degenerado
	Verdadeiro, pois diferentes códons podem codificar um mesmo aminoácido.
(b) a alteração de um único nucleotídeo no DNA que dirige a síntese destes códons poderia levar à substituição de uma serina por uma asparagina no polipeptídeo. 
	Verdadeiro, pois a troca da segunda base da serina (G) por A pode levar à formação de uma asparagina no polipeptídeo.
(c) a alteração de um único nucleotídeo no DNA que dirige a síntese destes códons necessariamente levaria à substituição de um aminoácido no polipeptídeo codificado. 
	Falso, pois o código genético é degenerado.
(d) um tRNA com o anticódon ACU se ligaria a um ribossomo na presença de um destes códons.
	Verdadeiro, pois o anticódon 5’... ACU ...3’ tem como códon 3’... UGA ...5’ (polaridades opostas), ou seja, liga-se à serina (3’... UGA ...5’ = 5’... AGU ...3 = serina’).
6. Uma globina de 146 aminoácidos sofreu uma mutação no códon correspondente ao sexto aminoácido da cadeia. A análise do DNA indicou uma mudança de (5')TTC(3') para (5')TAC(3') na fita molde. Pergunta-se: 
(a) A mutação provocou a troca de um aminoácido por outro? Em caso afirmativo, qual é este aminoácido? 
	Sem mutação
Molde: 5’... TTC ... 3’
mRNA: 3’... AAG ...5’ = ácido glutâmico (GAA)
Com mutação
Molde: 5’... TAC ...3’
mRNA: 3’... AUG ...5’ = valina (GUA)
(b) Quais podem ser as implicações para a estrutura da proteína?
A valina é um aminoácido de carga neutra e o ácido glutâmico apresenta carga negativa. A entrada da valina nesta posição favorece a polimerização e a formação de tactoides, capazes de deformar o eritrócito, fazendo com que o mesmo assuma a forma de foice e consequente hemólise. Ou seja, essa troca pode causar a anemia falciforme.
(c) Qual seria o resultado se a mesma troca ocorresse na base do lado (5') do DNA, ou seja a troca para (5’) ATC (3’)?
	Com mutação
Molde: 5’... ATC ...3’
mRNA: 3’... UAG ...5’ = ácido aspártico (GAU)
LISTA 3
1. Combine as características da coluna da direita com o tipo de hélice do DNA da coluna da esquerda 
(a) A-DNA 	(1) As pirimidinas estão na configuração anti 
(b) B-DNA 	(2) Os fosfatos na cadeia estão em ziguezague 
(c) Z-DNA 	(3) A sua formação é favorecida por superenovelamento negativo 
(4) Apresenta um sulco maior relativamente largo e profundo 
(5) Apresenta uma estrutura helicoidal no sentido dextrógiro 
(6) Tem 10,4 pares de bases por volta 
(7) Tem a estrutura similar àquela do RNA de fita dupla 
(8) As fitas na hélice são anti-paralelas
	1b, 2c, 3b, 4a, 5b, 6b, 7a, 8c
2. Descreva o experimento de Meselson-Stahl. Qual seria o resultado deste experimento se a replicação do DNA fosse conservativa?
Meselson e Stahl imaginaram que, se as duas cadeias polinucleotídicas de uma molécula de DNA fosse marcadas, seria possível fazer uma previsão sobre o destino dessas cadeias no decorrer das gerações celulares subsequentes.
Segundo a previsão: a) após uma replicação, ambas as moléculas filhas estariam marcadas e cada uma delas conteria metade da marcação da molecula mãe original. b) após duas replicações, metade das moléculas estaria marcada e, a outra metade não. A metade marcada, conteria a mesma marcação que as moléculas originais (que foram geradas na primeira replicação).
Meselson e Stahl marcaram as moléculas parentais de DNA com um isótopo pesado, mas não radioativo, do nitrogênio, o 15N. Eles fizeram isso cultivando Escherichia coli em um meio de cultura no qual a única fonte de nitrogênio disponível era um sal contendo o isótopo 15N. Após 14 gerações nesse meio de cultura, pôde-se prever que todo o DNA das bactérias continha 15N ao invés de 14N. As bactérias foram, então, transferidas para um meio de cultura contendo apenas a forma leve do nitrogênio, o 14N. Assim, todo o DNA sintetizado a partir desse momento, seria sintetizado com o 14N, e não mais com 15N.
De acordo com a hipótese da replicação semiconservativa era previsto que, após um ciclo de replicação no novo meio de cultura (contendo apenas 14N), cada nova molácula de DNA conteria 50% de 15N e 50% de 14N; e, após dois ciclos de replicação, metade das moléculas de DNA conteria apenas 14N enquanto que a outra metade seria 50% 15N e 50% 14N.
Os resultados experimentais concordaram, portanto, com a previsão da hipótese da replicação semiconservativa do DNA, a qual foi, então, aceita como verdadeira.
Se a replicação fosse conservativa:
3. Combine as propriedades ou funções na coluna à direita com a DNA polimerase na coluna da esquerda: 
(a) DNA polimerase I 	(1) envolvida na replicação 
(b) DNA polimerase II 	(2) requer um iniciador e um molde 
(c) DNA polimerase III 	(3) envolvida no reparo de DNA 
(4) sintetiza a maior parte do DNA durante a replicação 
(5) remove o iniciador e preenche as lacunas durante a 
 replicação 
1c, 2a, 3b, 4c, 5a
4. O fragmento de DNA no esquema abaixo é de fita dupla em ambas as extremidades, porém de fita simples no meio. As extremidades da fita superior estão indicadas. 5'____________________________3'
__________P HO__________ 
a) O fosfato (P) indicado na fita inferior está na extremidade 5' ou 3' do fragmento ao qual ele pertence? (Indique no esquema). 
	5’ (polaridade oposta ao superior)
b) Como você esperaria que a lacuna fosse preenchida pelo processo de síntese do DNA "in vivo" ? 
	A enzima DNA polimerase I estenderia o fragmento que possui OH na extremidade 3’ até o fragmento que possui P na extremidade 5’. Como se trata de uma síntese in vivo, existem enzimas ligase, responsáveis por fazer a última ligação fosfodiéster, ou seja, unindo os fragmentos e tornando a fita inferior contínua.
c) Quantos fragmentos você esperaria encontrar na fita inferior se o experimento fosse realizado "in vitro", na presença de todos os desoxirribonucleotídeos-trifosfato e DNA polimerase ?
	A enzima DNA polimerase I cumpriria a mesma função que desempenhou na síntese in vivo, porém, devido à ausência de enzimas ligase na síntese in vitro, não haveria a formação da última ligação fosfodiéster e seriam encontrados, ainda, dois fragmentos na fita inferior.
5. a) Explique porque certas variedades mutantes da DNA polimerase I podem apresentar atividade de DNA polimerase praticamente ausente, mas podem ter atividade de exonuclease 5' → 3' praticamente normal. 
	A DNA polimerase I é formada por dois fragmentos distintos: o pequeno, responsável pela atividade da exonuclease 5’-3’; e o grande (de Klenow), responsável pela atividade da polimerase e da exonuclease 3’-5’. Se houver muitação no fragmento grande, a atividade da polimerase e da exonuclease 3’-5’ serão prejudicadas, mas não haverá interferência na atividade da exonuclease 5’-3’ (as atividades dos fragmentos são independentes).
b) Qual a atividade da DNA polimerase III que é responsável pela editoração durante a replicação?
	A atividade da exonuclease 3’-5’.
6. A técnica de PCR (polymerase chain reaction) é utilizada para obter grandes quantidades de DNA a partir de amostras contendo quantidades ínfimas de DNA.
a) Descreva os passos envolvidos nesta técnica utilizando a sequência de uma das fitas do DNA abaixo: 5’ -------------GACCTGTGGAAGC ------------- CATACGGGATTG ------------- 3’ 
	1) denaturação, que significa separação da fita dupla de DNA em duas fitas únicas;
2) anelamento de oligonucleotídeos do tipo primers à seqüência molde de DNA; 
3) extensão do primer ao longo da seqüência alvo de DNA; 
4) formação de novas fitas duplas de DNA.
b) Que tipo de DNA polimerase é normalmente utilizada na PCR? 
	Taq polimerase
c) Exemplifique aplicações desta técnica.
	A PCR encontra sua principal aplicação em situações onde a quantidade de DNA disponível é reduzida. Uma das principais aplicações da PCR é na medicina forense, onde pequenas amostras de DNA retiradas da cena de um crime são amplificadas para serem analisadas pelo método de fingerprinting. 
O PCR também é rotineiramente utilizado em procedimentos científicos de Biologia Molecular como amplificação para gerar mutagênese, detecção de mutações ou preparação de fragmentos de DNA para clonagem (inserção em plasmídeo, por exemplo), como também pode ser utilizado para identificação de patógenos que estão presentes em amostras como por a exemplo identificação de agentes como Cândida sp, Chlamydia trachomatis, HPV Vírus do papiloma humano e seus genótipos, HIV Vírus da Hepatite B. etc. 
A PCR também é utilizada na paleontologia para o sequenciamento gênico de animais pré-históricos. Também é muito utilizada na identificação de microrganismos, tendo em vista que apenas 1% dos microrganismos são cultiváveis e podendo ser isolados. A PCR é o primeiro passo para o posterior sequenciamento. Após obter as sequencias geradas pelos equipamentos pode-se consultar bases de dados na internet para tentar localizar suas possiveis origens, sendo bactérias, archeas ou etc.
LISTA 4
1. a) Que propriedade da DNA polimerase I (codificada pelo gene polA1) é responsável pela observação de que bactérias mutantes polA1 são mais sensíveis à luz ultravioleta?
	O gene polA1 é responsável pela atividade de reparação da DNA polimerase I. Se uma bactéria sofrer uma mutação pela luz UV nesse gene, o mecanismo de reparo do DNA será prejudicado, fazendo com que a reparação não seja eficiente.
b) Descreva brevemente as três etapas de reparo do DNA lesado por luz UV citando as enzimas envolvidas.
	O DNA é exposto a UV que irá gerar dímeros de pirimidina (T). Um dímero de timina tem um anel ciclo-bitano que liga os anéis nitrogenados originais das duas timinas adjacentes; Esta lesão impede a replicação do DNA. Uma enzima chamada DNA fotoliase reconhece este tipo de ligação e na presença de luz visível é ativada e cliva a ligação pirimidina – pirimidina, isto é, cliva o anel ciclobutano.
	Este mecanismo envolve 3 etapas: uma exonuclease de reparo do DNA ou complexo enzimático se liga e remove a base ou nucleotídeo danificado; a DNA polimerase é recrutada e preenche o espaço usando o filamento não danificado como molde; e a DNA ligase sela as quebras deixadas.
2. Como a maquinaria de reparo de E. coli identifica a fita de DNA que tem um nucleotídeo não complementar incorporado durante a replicação?
	Na primeira etapa, MutS se liga ao par de bases mal pareadas, estabilizando o complexo MutS - MutH. MutS pode utilizar 2 sítios de ligação ao DNA: o primeiro reconhece especificamente o erro, e o segundo não possui especificidade por sequência ou estrutura e é utilizado para o deslocamento ao longo do DNA até que uma sequência GATC seja encontrada. A hidrólise de ATP é utilizada para gerar energia para o deslocamento. Devido ao fato de MutS estar ligada tanto ao DNA do local que contém a lesão como a regiões de DNA adjacentes enquanto efetua o deslocamento, ela cria uma alçade DNA nessa região. O reconhecimento da sequência GATC faz com que a endonuclease MutH se ligue ao complexo MutSL. Essa nuclease cliva a fita não metilada. Essa fita é removida desde a sequência GATC até o local da lesão. A excisão pode ocorrer tanto na direção 5’-3’ (pela ação de RecJ ou da exonuclease VII) como na direção 3’-5’ (pela ação da exonuclease I), e é assistida pela helicase UvrD. A nova fita de DNA é sintetizada pela DNA polimerase III.
3. Visto que U pareia com A tão bem quanto T pareia com A, por que somente T é encontrado no DNA? Como U é retirado do DNA?
	Porque a uridina (nucleotídeo composto de uracila) não é capaz de se ligar à DNA polimerase, a enzima que constrói as fitas de DNA. Os ribonucleotídeos, inclusive a uridina, possuem um grupo hidroxila (OH) na posição 2' da ribose, que não está presente nos nucleotídeos do DNA (conhecidos como desoxirribonucleotídeos). Esse grupo hidroxila a mais torna a molécula muito grande para se encaixar no sítio da DNA polimerase.
	A Timina é praticamente igual a Uracila quanto a fórmula estrutural molecular. Além disso, Timina, Citosina e Uracila são bases nitrogenadas do tipo pirimidina, sendo muito parecidas. Se tivesse Uracila no DNA, consequentemente teríamos vários erros durante a replicação da molécula.
	A DNA glicosilase cliva a ligação da base nitrogenada com a desoxirribose, formando um gap no interior do DNA, A endonuclease reconhece o gap e recruta a fosfodiesterase, clivando a desoxirribose que o recobre. A polimerase adociona então a base correta e a ligase une o fragmento pela última ligação fosfodiéster.
4. Bromouracila é um mutagênico que produz troca de bases, enquanto acridina causa adições ou deleções de uma base no DNA. Mutações causadas por acridina frequentemente podem ser compensadas por mutações secundárias, distantes vários nucleotídeos da primeira mutação, enquanto aquelas causadas por bromouracila geralmente requerem mudanças dentro do mesmo codon. Explique. 
5. Explique como algumas cepas da bactéria Salmonella são usadas para detectar substâncias carcinogênicas. Por que o extrato de fígado de mamífero está envolvido no teste?
	Algumas cepas da bactéria Salmonella mutagênica não produzem a histidina que é responsável pelo seu crescimento. Por
esse motivo, elas são usadas para detectar substâncias carcinôgênicas. No experimento, adiciona-se à Salmonella mutada concentrações da substância a ser testada e também de histidina. Se neste primeiro teste não se verificar o crescimento de Salmonella é adicionado o extrato de fígado. O extrato de fígado está envolvido por muitas substâncias que ao passar pelo fígado se tornam carcinogênicas devido às diversas transformações que ocorrem com elas.
6. O que são transposons. Exemplifique algum tipo de alteração gênica que eles podem causar?
	Pedaços lineares pequenos de DNA que se movem de um sítio para outro no DNA celular ou entre o DNA de bactérias, de plasmídeos e de bacteriófagos. São denominados de "genes saltadores". Não são capazes de se duplicar independentemente. Codificam enzimas relacionadas à resistência a drogas e podem causar mutações. Em sua terminação possuem sequências palindrômicas.
	Transposons podem causar mutações gênicas através da inserção (adição) de nucleotídeo(s).
7. Descreva as condições necessárias para que duas bactérias conjuguem com sucesso. O que é uma célula Hfr (alta [High] frequência de recombinação)? Qual a diferença entre fator F e F'.
	
8. Suponha que uma cepa Hfr de E. coli sensível à estreptomicina (StrS ), capaz de sintetizar os aminoácidos Leu e His, é misturada em meio de cultura com uma cepa F- que é resistente à estreptomicina e incapaz de sintetizar Leu e His. Após certo tempo, a conjugação é interrompida, colocando-se a mistura em um liquidificador e transferindo-se amostras da cultura para placas seletivas para testar se houve ou não conjugação. 
(a) Ocorre algum crescimento bacteriano quando as bactérias são transferidas para um meio contendo estreptomicina e na ausência de Leu e His? Explique este resultado. 
	
(b) Suponha que você repetiu o experimento com menor tempo de incubação antes de colocar a mistura no liquidificador. Explique porque agora as bactérias resistentes à estreptomicina crescem na ausência do Leu, mas necessitam de His.