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Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Triângulo Mineiro Campus Uberaba Disciplina de Microbiologia Geral Prof. Gabriel Nascentes Roteiro de Aulas Práticas Prática 2 (4,0 pontos) Ubiquidade dos microrganismos Os microrganismos são os menores seres vivos existentes, encontrando-se em uma vasta diversidade de ambientes e desempenhando importantes papeis na natureza. Esse grupo caracteriza-se por ser completamente heterogêneo, tendo com única característica comum o pequeno tamanho dos organismos. Acredita-se que cerca de metade da biomassa do planeta seja constituída pelos microrganismos, sendo os 50% restantes distribuídos entre plantas (35%) e animais (15%). O próprio corpo humano é habitado por 100 trilhões de células microbianas (10x mais o número de células humanas). A ubiquidade dos microrganismos é baseada em três características principais: tamanho reduzido e alta taxa de multiplicação, que permite uma grande capacidade de dispersão; variabilidade e flexibilidade metabólica, que permite se adaptar e tolerar rapidamente às condições ambientais desfavoráveis; e sua grande capacidade de transferência horizontal de genes, que lhes permite recombinar e coletar caracteres positivos e persistir durante um longo tempo adaptando-se às condições ambientais instáveis. Em termos de habitat, os microrganismos são encontrados em quase todos os ambientes, tanto na superfície, como no mar e subsolo. Desta forma, podemos isolar microrganismos de fontes termais, com temperaturas atingindo até 130°C, de regiões polares, com temperaturas inferiores a -10°C; de ambientes extremamente ácidos (pH=1) ou básicos (pH=13). Alguns sobrevivem em ambientes extremamente pobres em nutrientes, assemelhando-se à água destilada. Em termos metabólicos, temos também os mais variados tipos, desde aqueles com vias metabólicas semelhantes à de eucariotos superiores, até outros que são capazes de produzir ácido sulfúrico, ou aqueles capazes de degradar compostos pouco usuais como o petróleo, amônio, entre outros. Uma vez que os microrganismos precederam o homem em bilhões de anos, pode-se dizer que nós evoluímos em seu mundo e eles em nosso. Dessa forma, não é de se estranhar que a associação homem-microrganismo mostra-se com grande complexidade, com os microrganismos habitando nosso organismo, em locais tais como a pele, intestinos, cavidade oral, nariz, ouvidos e trato genitourinário. Embora a grande maioria destes microrganismos não cause qualquer dano, compondo a denominada “microbiota residente”, algumas vezes estes podem originar uma série de doenças, com maior ou menor gravidade. Nesta classe de organismos estão aqueles denominados patogênicos e potencialmente patogênicos. O estudo prático sobre a ubiquidade tem importância em várias ciências humanas, sendo as principais áreas de estudo: - Biotecnologia / Ciências Agrárias: Uso de microrganismos com finalidades industriais, como agentes de biodegradação, de limpeza ambiental, na forragicultura devido ao processo fermentativo em silagens, bem como na produção de plantas transgênicas, inseticidas biológicos, entre outros. - Alimentos: Doenças transmitidas por alimentos, controle de qualidade, produção de alimentos (queijos, bebidas fermentadas). - Biologia: Aspectos básicos e biotecnológicos, produção de antibióticos, hormônios (insulina, GH), enzimas (lipases, celulases), insumos (ácidos, álcool), despoluição (petróleo), biofilmes, etc. - Medicina, Enfermagem / Veterinária, Zootecnia: Doenças infecciosas. - Odontologia: Estudo de microrganismos associados à placa dental, cárie dental e doenças periodontais. Materiais utilizados: - Meios de cultura previamente preparados: água peptonada, PCA, BDA - Swabs estéreis - Estufa bacteriológica - Álcool 70% - Bico de Bunsen - Contador manual de colônias Procedimentos: 1. Para avaliação da presença de microrganismos no ambiente, expor a placa de Petri aberta por tempos diferentes de exposição (5, 10 e 15 minutos). 2. Nas coletas de superfície, umedecer o swab na água peptonada, retirar o excesso na parede do tubo e coletar a amostra do material a ser investigado. 3. Utilizando o swab do material coletado, fazer estrias no meio de cultura (método do esgotamento) e identificar a placa de Petri lateralmente. 4. Incubar as placas em estufa com temperatura de 37°C para o crescimento de bactérias por 24 horas (placas invertidas) ou a 22-25 o C por 3-5 dias para o crescimento de fungos. Análise macroscópica das colônias: - As colônias podem ser classificadas de acordo com as seguintes características: Tamanho Cor Textura: cremosa, cotonosa, aveludada Aspecto: brilhante ou opaco, úmido ou seco Superfície: lisas ou rugosas Borda: regular, irregular, filamentosa Perguntas: 1. (1,0 ponto) Descreva os resultados observados na análise microbiológica das placas que ficaram abertas no ambiente, comparando as características das colônias de fungos e bactérias e quanto aos diferentes tempos de exposição. 2. (1,0 ponto) Considerando a amostra biológica cultivada pelo grupo, compare os resultados do crescimento de bactérias e fungos. 3. (1,0 ponto) Um aluno do curso de Agronomia tinha como objetivo analisar a presença de fungos (bolores e leveduras) em amostras de folhas de cafeeiro. Ao observar a presença de colônias cremosas e brilhantes na placa, ele soube que precisaria analisar as células ao microscópio. Por que isso é necessário? 4. (1,0 ponto) Quais são as características que tornam os microrganismos capazes de serem encontrados em todas as regiões do planeta?
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