Artigo imuno hiv1

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BNAbs tem três caracteristicas não usuais que são:
- alto nível de mutação somática(principal)
-long complementarity determining region 3 s (CDR3s)
-a higher than expected propensity to polyreactivity (alta propensão de polireatividade)
10MUT – antígeno mutado do env (BG505 – está na superfície do hiv-1)
10MUTKO- 10MUT mutado em alguns aa específicos (a perda desses aa específicos impede a 
ligação antígeno com antocorpo PGT121)
GLHL - linhagem germinativa 
MUTHGLL - cadeia madura
ENV = gene viral que codifica proteinas do envelope viral.
(várias proteínas foram testadas pela habilidade como imunógenos para o anticorpo PGT121, mas 
falharam)
Título figura:
Activation of GLHL 121 B Cells In Vivo
ELISA-Guided Sequential Immunization
Sequential Immunization in GLHL e MUT HGLL 121 Mice
Foi feito o design de uma proteína expressa pelo env mutada para interagir ESPECIFICAMENTE 
com o PGT121. O nome desse imunógeno é 10MUT , mutação da proteína BG505.
Foi verificado que o 10MUT interage com PGT121 de humanos infectados com HIV-1 (figura 1B)
Foi verificado que o 10MUT interage com os anticorpos dos camundongos humanizados – figura 
1A, na esquerda, o monômero não gerou resposta, enquanto o trímero (direita - SOSPI) gerou uma 
boa resposta.
(Com ambas as linhagens, porém esses anticorpos ainda não tem habilidade neutralizante – dados 
suplementares)
Figura 1C
Cronograma de imunizações sucessivas.
Foi feito um “degradê” de imunógenos, do mais mutado para o mais semelhante ao nativo (native-
like, ou wildtype)
A figura 1D mostra os imunógenos usados e se foram capazes ou não de gerar uma resposta imune 
dos anticorpos GLHL e MUT HGLL .
Vlc = variable loop cocktail ,
Após o degrade de imunogens mutados, foi usado o tipo selvagem e depois foi usado VLC, 
semelhantes ao tipo nativo, com mudanças nos loops variáveis.
Título do Slide: Sequential Immunization in GL HL 121 and Mut H GL L 121 Mice
Figura 2
Teste com ELISA longitudinal mostrou que o soro de camundongos imunizados sequencialmente 
tiveram a resposta de anticorpos aumentada em resposta a cada imunógeno (antígeno) e permaneceu 
específica para o epítope do PGT121.
No final da imunização todos, menos 1 GL HL 121 e todos Mut H GL L mostraram ligação aos 5 
VLC’s ( variant loop cocktail )
A- diagramda de imunização sequencial
B – Gráficos mostram o resultado de ELISA no soro coletado do tipo nativo e imunizado 
sequencialmente (triplicata de camundongos pra cada linhagem)
ELISA mostra a reatividade contra o imunógeno e a proteína de aumento (boosting protein) do 
próximo passo. Quando indicado, ligação ELISA do PGT121 bNAb humano também está 
mostrado.
Título slide: Broadly Neutralizing Antibodies
Fig 3
Para determinar se a imunização sequencial provocou bNAbs anti HIV-1 
Foi purificado soro de anticorpo dos camundongos controle e imunizados. 
Foi testado atividade neutralizante com ensaio TZM-bl (tipo de célula sensível ao HIV) que usou 
uma painel com 12 linhagens HIV-TIER-2 (moderadamente sensível a neutralização) e duas HIV-
1B.
Anticorpos do controle não mostraram atividade neutralizante, enquanto 5 de 7 GL e 7 de 7 Mut 
mostraram! (fig 3A)
Como esperado, nenhum dos anticorpos neutralizou a variante HIVR1166 (não possui o sítio que o 
PGT121 se liga).
Para determinar quando a atividade neutralizante surgiu, foram feitos ensaios em cada etapa da 
imunização sequencial (fig 3B). Foi detectado inicio a partir da imunização com 5MUT
Para determinar se doses repetidas do mesmo imunógeno ou um protocolo simplificado podem 
também provocar bNAbs, foram realizados outras sequencias de imunização sequencial (figuras 3C 
e 3D)
 
Título slide: Antibody Sequences from Sequentially Immunized Mice
Fig 4 
Legenda figura:
A- protocolo de imunização sequenciada
B- Número de mutação em nucleotídeos no IGK (cadeia leve) isolados de célula B de memória.
C- Mesmo que B, porém cadeia pesada.
B e C - Cada coluna representa um camundongo, cada ponto representa uma célula.
D e E – médias
Conclui que a imunização sequencial (com antígenos diferentes) gerou maior SHM (somatic 
hipermutation) do que as imunizações com antígeno repetido (10MUT) ou com 10MUT + wildtype
B: mutação por célula por camundongo
Percebe-se que a mutação na cadeia pesada do MUT foi menor que no GL, isso acontece pois o 
MUT “já está” mutado, pois trata-se da cadeia pesada madura. 
Vale ressaltar que não há mutações do tipo deleção ou inserção.