Imobilização de ácidos nucléicos

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Imobilização de Ácidos Nucléicos
Imobilização de ácidos nucléicos
“Necessidade de caracterizar ácidos 
nucléicos em uma mistura complexa 
destes elementos”
mistura eletroforese hibridização
Imobilização de ácidos nucléicos
southern blot northern blot western blot
DNA RNA Proteína
hibridização imunocitoquímica
in situ
Southern blot
- localizar ou identificar fragmentos específicos 
de DNA
- fragmentos provenientes da PCR ou clivagem 
por enzimas de restrição
- sonda é um DNA marcado
Southern blot
- imersão do gel em solução de pH alcalino
- transferência do DNA para a membrana
- incubação da membrana com a sonda
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Southern blot
Northern blot
- método utilizado para determinar se um gene 
é expresso através da detecção de RNA
- RNA proveniente de células ou de vírus
- sonda é um cDNA marcado
- baixa sensibilidade se o gene transcrito for de 
baixa concentração
Sonda de cDNA
Northern blot
- imersão do gel em solução de pH alcalino
- transferência do RNA para a membrana
- incubação da membrana com a sonda
Northern blot
Hibridização in situ
- detecção de atividade genômica diretamente 
em células ou em tecidos fixados
- sondas de DNA ou cDNA marcados
- utilizado para a detecção de HPV, Epstein-Barr, 
HBV e marcadores tumorais
Hibridização in situ
Fluorescência
Sonda DIG
Sonda Biotina
Reação do Indicador BCIP/NPT
Western blot
- utiliza ligação específica de anticorpos a proteínas
- sistema detector representado por anticorpo 
secundário
- imunocitoquímica é o equivalente no tecido
Western blot
Dot blot
- aplicação direta do ácido nucléico na 
membrana que se deseja submeter a 
sonda
- resultado positivo ou negativo frente a 
sonda específica
Dot blot
Hibridização
- Fase Sólida:
Southern blot, Northern blot e Dot blot
- Fase Líquida:
Captura híbrida
Captura Híbrida
luminômetro
	Imobilização de Ácidos Nucléicos
	Imobilização de ácidos nucléicos
	Imobilização de ácidos nucléicos
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Southern blot
	Northern blot
	Sonda de cDNA
	Northern blot
	Northern blot
	Hibridização in situ
	Hibridização in situ
	Fluorescência
	Sonda DIG
	Sonda Biotina
	Reação do Indicador BCIP/NPT
	Western blot
	Western blot
	Dot blot
	Dot blot
	Hibridização
	Captura Híbrida