seminario toxicologia forense

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Universidade Federal da Paraíba
Centro de Ciências da Saúde
Departamento de Ciências Farmacêuticas
Curso de Graduação em Farmácia
Disciplina: Toxicologia
 Ana Karolyne Cândido - 11424884
Nikole Durand Trigueiro - 11412622
Introdução
Objetivo principal da toxicologia forense:
Fornecer respostas às questões que surgem durante investigações criminais;
Detectar substâncias exógenas;
Concentração;
Relacionar com efeitos tóxicos no organismo.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.bioforense.com.br/web/?product=toxicologia-forense
https://blogmundofarmaceutico.wordpress.com/category/toxicologia/
Matrizes Biológicas
Principais: 
Sangue;
Urina;
Suor;
Cabelo;
Saliva;
Mecônio;
Humor vítreo.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
https://fortissima.com.br/2014/07/05/
Matrizes Biológicas
Escolha da matriz:
Natureza e integridade da amostra;
Tipo de investigação;
Facilidade de coleta;
Utilidade nas análises; forenses;
Informações que fornece.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
https://www.elblogdelasalud.info/Centro-Informacion-Medica
Urina
Amostra convencional;
Amplamente utilizada;
Investigação de metabólitos;
Coleta fácil e não invasiva; 
Grandes volumes disponíveis para análise; 
Armazenamento em longo prazo;
Facilmente adulterável;
Detecta apenas uso recente (2 a 5 dias).
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://tribunadoceara.uol.com.br/vida-saudavel/vida-saudavel
https://www.elblogdelasalud.info/Centro-Informacion-Medica
Sangue
Amostra Convencional;
Relaciona a concentração da droga e o estado clínico do indivíduo;
Prediz período decorrido após a administração;
Maior risco de contaminação;
Janela de detecção restrita para as drogas de abuso.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://cienciacontraocrime.blogspot.com.br
Sangue
Coleta : 
Invasiva;
Adição de anticoagulantes e conservantes depende do analito;
Heparina (pode interagir com alguns fármacos);
EDTA (não indicado para metais pesados).
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://soranadia.blogspot.com.br/2015/09/coleta-de-sangue-venosos.html
Sangue
Amostras post-mortem:
Redistribuição quando cessados os; fenômenos vitais podem modificar os valores encontrados;
Artéria subclávia, diretamente no coração ou veia femoral.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://cienciacontraocrime.blogspot.com.br
Sangue
Análise : 
Sangue total: quantificação da droga;
Plasma: sobrenadante obtido do sangue com; anticoagulantes e conteúdo precipitado;
Soro: plasma sem fatores de coagulação;
Pesquisa de metabólitos conjugados: clivagem hidrolítica com enzimas, ácidos ou base antes da extração;
Adição de tampão: obtenção do analito na forma apolar, facilita extração com solvente orgânico, diminui viscosidade do meio.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Fluido Oral
Amostra não convencional
Células da mucosa bucal, restos de alimentos e saliva;
As drogas são transferidas do sangue para a saliva por ultrafiltração ou difusão passiva;
Detectadas na forma não metabolizada;
Moléculas de alto peso molecular, drogas ionizadas ou ligadas a proteínas plasmáticas;
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
https://www.mindomo.com/mindmap/la-saliva
Fluido Oral
Coleta pouco invasiva e resultado Rápido;
Detecta várias drogas de interesse forense no fluido oral, como cocaína, anfetaminas, opióides, canabinóides, benzodiazepínicos e etanol;
Pode ser armazenada como prova;
Fácil contaminação e restrito número de estudos;
Dispositivos: Omni-Sal®, OraSure® e Salivette®
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.medicalexpo.com
Suor
Amostra não convencional; 
Monitoramento de drogas de abuso; 
As drogas são incorporadas no suor por difusão passiva e migração transdérmica;
Presença da droga original;
Coleta pouco invasiva, rápida, indolor e assistida;
Ampla janela de detecção (até 12 dias);
Coleta através de coletores “sweat patch”;
O preparo da amostra exige menos etapas;
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Suor
Desvantagens:
Falta de informações sobre a relação dose-resposta; 
Quantidade limitada de amostra; 
Literatura limitada.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.cienciahoje.org.br/noticia/v/ler/id/426/n/analise_de_suor_identifica_uso_de_cocaina
http://www.fiqueinforma.com/suor-excessivo-pode-indicar-problemas
Cabelo
Amostra não convencional;
Detecção pregressa (em torno de 3 meses);
Quantidade de melanina e natureza da droga interferem da incorporação;
Drogas de caráter básico, como cocaína e anfetaminas, se incorporam melhor que as de caráter ácido, como benzodiazepínicos;
Fatores naturais diminuem a concentração inicial;
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Cabelo
Coleta: 
Método não invasivo; 
Fácil transporte e armazenamento;
Difícil adulteração.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://revistacipa.com.br/seconci-sp-disponibiliza-exame-toxicologico-com-coleta-de-cabelo
www.autotransito.com/blog-da-autotransito/archives/02-2017/2
Cabelo
Análise: 
Recomenda-se a coleta de aproximadamente 100 mg de cabelo rente ao couro cabeludo;
Lavagem com surfactantes, solventes orgânicos ou produtos especiais;
Pulverização da amostra;
Digestão enzimática ou com solução de hidróxido de sódio e aquecimento;
Extração de analitos da matriz capilar;
Requer alta sensibilidade.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Mecônio
Verifica exposição uterina às drogas de abuso e outras substâncias;
Excretado pelo recém-nascido em até 5 dias após o parto;
Coleta fácil e não invasiva;
Amostra complexa e heterogênea;
Etapas adicionais e aumento de custo da análise.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.maximb.com/new-baby-diaper-grafico/
Humor Vítreo
Amostra não convencional;
Maior presença da droga original;
Grande estabilidade diante dos processos de putrefação;
A coleta pode ser feita por meio de punctura no canto lateral do olho, o volume coletado em torno de 2mL;
Drogas de alta afinidade proteica são pouco encontradas nessa matriz;
Requer poucas etapas de preparação;
Concentrações parecidas com o sangue periférico.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Humor Vítreo
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
https://www.dreamstime.com/royalty-free-stock-images-anatomy-eye-image24992479
Técnicas de preparo de amostra na toxicologia forense
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://atoxicologiaufsj.blogspot.com.br/2011/11/toxicologia-forense-uso-e-importancia.html
 O preparo da amostra reduz os interferentes que podem comprometer a seletividade e sensibilidade ao analito de interesse na matriz biológica.
 - Baixo custo.
- Baixo tempo de análise;
- Alta recuperação do analito; 
 
- Perda mínima da amostra com remoção eficaz de interferentes;
Exigem condições mínimas para serem aplicadas:
Precipitação protéica
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
 Consiste na desnaturação de proteínas presentes na matriz por adição de agentes precipitantes (ácidos ou bases fortes, solventes orgânicos,Temperatura).
Adição do agente precipitante na amostra;
 Agitação;
 Centrifugação.
 Possibilita a separação do precipitado protéico e o sobrenadante, utilizado para análise toxicológica.
https://biologiavegetal.com/aula/
Extração líquido-líquido (LLE)
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://slideplayer.com.br/slide/1469651/
 Baseia-se na partição da amostra
entre duas fases imiscíveis (orgânica e aquosa).
 A eficiência da extração depende da afinidade do analito pelo solvente, razão das fases e número de extrações.
Adição do solvente extrator;
 Agitação mecânica;
 Centrifugação da mistura;
 A fase de interesse é recolhida para análise.
Salting-out
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Caracteriza-se pela adição de um sal inorgânico á amostra aquosa e um solvente orgânico miscível em água, formando um sistema bifásico.
 Objetivo: auxiliar na separação do solvente miscível em água e melhorar extrações com solventes orgânicos apolares.
 A eficácia da extração depende das características físico-químicas do analito e o tipo de sal utilizado.
Extração em fase sólida (SPE)
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
 Baseia-se na separação por afinidade (como cromatografia líquida), consistindo na separação líquido-sólido.
 Retenção e eluição do analito do fluido biológico;
Remoção de interferentes;
Concentração da amostra.
 SPE está disponível nos modos de fase normal, fase reversa e troca iônica. 
Extração em fase sólida (SPE)
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
https://cromatografia.wordpress.com/2012/01/05/15/
 Os analitos contidos na matriz 
aquosa e os interferentes são extraídos após passarem por um cartucho contendo o sólido sorvente.
 Um solvente orgânico seletivo é utilizado para remover os interferentes, e outro solvente é utilizado para retirar os analitos de interesse da fase.
Extração com Ponteiras (DPX)
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.splabor.com.br/produto/ponteiras-sem-filtro-eppendorf-kasvi/
 Consiste em ponteira descartável de 1,0 ou 5,0 mL contendo fase sólida dispersa, na qual o analito entra em contato constante  equilíbrio entre a fase sorvente e a amostra a ser extraída.
Técnica rápida;
 Uso mínimo de solventes;
 Alta recuperação;
 Alta eficiência de extração;
 Rendimento e produtividade;
 Possibilidade de automação.
 Condicionamento da ponteira;
 Aspiração da amostra (promovendo o contato com a fase estacionária contida na ponteira);
Descarte da matriz;
Lavagem;
Eluição. 
Extração com Ponteiras (DPX)
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
https://www.researchgate.net/figure/258855968_fig1_Figure-1-Schematic-diagram-of-a-DPX-extraction-Diagram-obtained-from-the-online
Extração por Headspace (HS)
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://slideplayer.com.br/slide/3967567/
A amostra é inserida em recipiente hermeticamente fechado e termostatizado sob determinado tempo, permitindo equilíbrio entre as fases líquida e gasosa da amostra.
 Uma alíquota da fase gasosa da amostra é recolhida e analisada por CG. 
 Técnica aplicada para determinação de etanol e outros compostos voláteis pelo isolamento destes analitos da matriz.
Microextração em fase sólida (SPME) 
 Técnica utilizada para extração de compostos orgânicos voláteis e semi-voláteis em amostras aquosas, empregando uma seringa contendo um micro tubo de aço inoxidável com agulha interna.
 O micro tubo possui 1cm de fibra de sílica fundida revestida com um polímero orgânico.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422011000900021
A fibra de SPME é introduzida no recipiente contendo a amostra;
O protetor da agulha da fibra é retraído expondo a fibra de sílica ao meio onde ocorrerá a extração dos analitos;
O revestimento polimérico da fibra atua concentrando os analitos por absorção ou adsorção.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Microextração em fase sólida (SPME) 
https://www.youtube.com/watch?v=G2NAFD-vQq0
 O processo de SPME pode ser realizado de 2 formas: imersão direta da fibra na amostra ou utilização da técnica de headspace.
 Após extração, os analitos são analisados em CG ou CL.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Microextração em fase sólida (SPME) 
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422000000400016
Microextração dispersiva líquido-líquido (DLLME)
O solvente extrator e o solvente dispersor são injetados rapidamente na amostra aquosa, formando solução turva no tubo;
Centrifugação (partículas do solvente extrator são sedimentadas);
 A fase sedimentada é recolhida e submetida a análise toxicológica.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422013000700004
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Considerações finais
 Em toxicologia forense, a complexidade das matrizes biológicas e o aumento crescente na gama de substâncias a serem investigadas torna extremamente importante a escolha de métodos de preparo de amostras adequados para realização eficiente das investigações analíticas que contribuem para a elucidação de questões de interesse legal.
Técnicas de preparo de amostras biológicas com interesse forense
Universidade Federal da Paraíba
Centro de Ciências da Saúde
Departamento de Ciências Farmacêuticas
Curso de Graduação em Farmácia
Disciplina: Toxicologia
 anakarolyne.b.c@gmail.com
 durandnikole@gmail.com