Diagnostico de Infeccoes bacterianas

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Imunodiagnóstico das Infecções Bacterianas
Profa. Mabel Proence
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Microbiota normal
Duas funções importantes:
Competição (espaço e alimento) com espécies patogênicas
Estimulação do sistema imune da mucosa
Patogênica – podem cair na circulação
Lesões mecânicas de tecidos
Queimaduras e acidentes
Imunodeficiência celular T 
Imunodeficiência humoral IgA
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Proteção x Infecção
Resposta imune
Imunidade inata, Acs naturais (Ex. IgA), Inflamação, mediadores inflamatórios e citocinas, ativação do sistema complemento, resposta humoral e celular
Mecanismos de agressão ao hospedeiro
Exotoxinas, endotoxinas, utilização de nutrientes do hospedeiro causando lesões teciduais, processos imunopatogênicos
Mecanismos de Evasão bacteriana
Inibição da cascata do complemento, inibição da fagocitose, da fusão fagolisossoma, proteases contra IgA, variações antigênicas
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Resposta Imune a Bactérias 
A Resposta Imune pode ser Inata ou Específica
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IMUNIDADE HUMORAL - bactérias extracelulares
• Clostridium tetani
• Corynebacterium diphtheriae
• Streptococcus pyogenes
• Staphylococcus aureus
• Neisseria meningitidis
• Vibrio cholerae
• Escherichia coli
IMUNIDADE CELULAR – Bactérias intracelulares
• Mycobacteruim tuberculosis e leprae
• Listeria monocytogenes
• Legionella pneumophila
Ref. Calich & Vaz – Imunologia, Revinter, 2001
Imunidade na Infecção Bacteriana
http://www.craigleithhill.co.uk/images
http://ceficad.com/images/escherichia_coli_gram%20negative.jpg
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Diagnóstico Imunológico
BACTÉRIAS CAPSULARES 
Haemophilus influenzae, 
Neisseria meningitidis,
 Streptococcus pneumoniae
• Testes de aglutinação em látex coberto com Acs
- Ex. amostras de LCR (meningites)
 Contraimunoeletroforese 
http://www.craigleithhill.co.uk/images
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Diagnóstico 
CONTRA-IMUNOELETROFORESE 
ou ELETROIMUNODIFUSÃO DUPLA LINEAR
 Ag e Ac (com cargas opostas) colocados em poços perfurados no gel de ágar 
 Submetidos à eletroforese um contra o outro
 Os Ags migram para o positivo e o Ac para o pólo oposto, negativo
 Entre os orifícios ,observa-se uma linha de precipitação
 Maior vantagem: rapidez e maior sensibilidade que a Imudifusão dupla
http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/immuno-port-chapter7.htm
Testes Imunológicos
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BACTÉRIAS INTRACELULARES 
Mycobateruimtubererculosis
 
Testes intradérmicos de hipersensibilidade tardia (48- 96hs) -
Reação de Mantoux ou PPD (Derivado Protéico Purificado) 
 
http://www.healthyinfo.com/clinical
http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006
0 – 5 mm = Não reator
5 – 9 mm = Reator fraco
≥ 10 mm = Reator forte
Obs: Diagnóstico confirmatório para Tuberculose: Imagem (RMN, TC) e microbiológicos 
( baciloscopia e cultivo)
extrato solúvel bruto de M.bovis atenuado
mistura de Ags comuns às cepas do complexo M. tuberculosis e da cepa vacinal BCG (Bacilo de Calmette-Guérin). 
Diagnóstico Imunológico
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BACTÉRIAS INTRACELULARES 
• Lysteria monocytogenes, Brucella abortus:
Testes imunológicos para detecção de anticorpos (ELISA)
Diagnóstico Imunológico
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BACTÉRIAS TOXIGÊNICAS
Clostridios (C. tetani, C. botulinum), Corynebacterium diphtheriae, Vibrio cholerae
Testes imunológicos- Importantes na produção de soros e vacinas para comprovar a imunogenicidade do antígeno
Alguns casos temos a detecção da toxina em produtos alimentares (ex. toxina botulínica)
Instituições de pesquisa e empresas produtoras de alimentos têm interesse
Testes Imunológicos
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Imunoensaios – detecção Ags:
Testes rápidos 
swabs de secreções e feridas
Testes de aglutinação
Testes Imunoenzimáticos
Imunoensaios – detecção Acs:
Detecção de Acs ASLO* 
Aglutinação rápida, Tubidimetria, nefelometria
* ASLO= anti-estretolisina O
Streptococcus Pyogenes (grupo A , beta-hemolíticos)
Diagnóstico Imunológico
BACTÉRIAS TOXIGÊNICAS
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Treponema pallidum 
Sífilis
Testes cardiolipínicos
VDRL ( Veneral Diseases Research Laboratory)
Suspensão alcoólica de cardiolipina, cristais de colesterol e lecitina
Leitura de microflocos em microscópio óptico ou lupa de aumento
RPR (rapid plasm reagin) e Carbotest 
Micropartículas de carvão, cardiolipina, cristais de colesterol e lecitina
Leitura a olho nu em fundo branco
Reação de Floculação (variante da aglutinação indireta)
http://whiteraven68.blogspot.com/2010/05/vdrl-for-treponema-pallidum.html
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Anticorpo
Micropartículas de colesterol
Cardiolipina (Ag)
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Imunucomplexo (floculado)
Fonte: Adaptado de Vaz, A. J; Takei, K; Bueno, E.C. Imunoensaios – Fundamentos e Aplicações., Editora Guanabara Koogan, 2007
VDRL
Princípio: Floculação= interação Ag-Ac em meio líquido formam imunocomplexos, detectáveis com auxílio de lupas ou microscopia óptica
lecitina
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Anticorpo
Micropartículas de colesterol
Cardiolipina (Ag)
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Imunucomplexo (floculado)
Fonte: Adaptado de Vaz, A. J; Takei, K; Bueno, E.C. Imunoensaios – Fundamentos e Aplicações., Editora Guanabara Koogan, 2007
RPR
Micropartículas de carvão
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Testes treponêmicos
Usam Ags do T.pallidum 
Hemaglutinação, microaglutinação de partículas, IF, ELISA (extrato solúvel total)
A técnica mais usual é: FTA-abs (fluorescent treponemal antibody absorption) - Imunofluorescência Indireta
Usa a bactéria íntegra como Ag
Treponema pallidum 
Sífilis
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Leptospirose
Teste de referência é MAT 
( Microscopic Agglutination Test)
Cultura de cepas vivas de diferentes sorogrupos prevalentes
Soro do paciente é incubado em diferentes diluições com suspensão bacteriana de cada cepa
Leitura : microscopia de campo escuro
A aglutinação indica presença de Acs
http://leptolab.ut.ac.ir/en.htm
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Leptoteste ou SAT (Slide Agglutination Test)
Cepa não patogênica (L. biflexa) 
Feita em lâmina em apenas 1 diluição da amostra
Leitura visual ( lupa contra luz)
Amostras positivas podem ser confirmadas 
(laboratórios de referência)
ELISA 
Detecção de IgM
http://www.splammo.net/bact102/102xsal.html
Leptospirose
http://www.thailabonline.com/leptospira-latex.htm
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Leptospirose
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Referências
Ferreira, A. W; Ávila, S.L.M. Diagnóstico Laboratorial das principais Doenças Infecciosas e auto-imunes, 2 Ed, Guanabara Koogan, 2001
Vaz, A. J; Takei, K; Bueno, E.C. Imunoensaios – Fundamentos e Aplicações., Editora Guanabara Koogan, 2007
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