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Unidade 10 Métodos de controle microbiano (1)

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MÉTODOS DE CONTROLE 
MICROBIANO	
MICROBIOLOGIA BÁSICA
PROF. MARIANA CALDEIRA RODRIGUES 
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CONTROLE MICROBIANO: HISTÓRIA
O estudo do controle do crescimento microbiano teve início a cerca de 100 anos...
Pasteur provou para os pesquisadores que os micróbios poderiam ser causa de grande parte das patologias conhecidas. 
Meados do século XIX: Utilização de algumas práticas de controle microbiano para procedimentos médicos: higienização das mãos e a utilização de técnicas cirúrgicas assépticas. 
Até aquele momento as infecções hospitalares matavam cerca de 10% dos pacientes cirúrgicos e 25% das parturientes. 
há registros de que cirurgiões limpavam seu bisturi na sola de sua bota durante a Guerra Civil Americana.
Tema da Apresentação
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COMO REALIZAR O controle microbiológico?
AGENTES QUÍMICOS OU FÍSICOS....
Aplicação sobre os microrganismos antes que estes entrem em contato com os hospedeiros ou atravessem a barreira cutânea.
23 de outubro de 2016
Tema da Apresentação
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ONDE ESSES AGENTES DEVEM SER APLICADOS?
Alimentos, água, objetos em geral ou sobre a pele/mucosa.
 
É importante, que haja um equilíbrio entre o grau de eliminação de microrganismos que se deseja alcançar e a natureza do agente a ser utilizado, bem como sua intensidade de aplicação. 
Havendo essa adequação, é possível planejar desde uma inibição até a destruição dos microrganismos. 
Tema da Apresentação
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FUNDAMENTOS DO CONTROLE MICROBIANO 
FORMAS DE CONTROLE:
Destruição ou remoção de “todos” os microrganismos presentes;
Destruição ou remoção de um “determinado grupo” de microrganismo;
Prevenção da multiplicação de microrganismos presentes num determinado ambiente ou hospedeiro.
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Tema da Apresentação
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Destruir, Remover, Inibir 
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controle microbiológico pode ser realizado:
INIBIÇÃO: Inibe a multiplicação. Agente capaz de bloquear as funções fisiológicas, sem causar a morte microbiana – ação microbiostática.
Quando a inibição não é muito prolongada, o processo é reversível, pois o agente microbiostático determina apenas um bloqueio metabólico sem causar lesões permanentes.
MORTE: Perda irreversível da capacidade de reprodução. Morte do MO: ação microbicida.
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IMPORTÂNCIA DO CONTROLE
PREVENIR:
Transmissão de doenças.
Contaminação ou crescimento de microrganismos nocivos.
Deterioração e dano de materiais.
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CONCEITOS IMPORTANTES
Assepsia: ausência de microrganismos em uma área. Técnicas assépticas previnem a entrada de microrganismos.
Antissepsia: são medidas tomadas para evitar o crescimento e desenvolvimento de microrganismos causadores de doenças, mais usado em tecidos vivos. Prevenção de infecção.
Desinfecção: processo em que se utiliza uma substância química para destruir microrganismos patogênicos. Material inerte, superfícies inanimadas. DESINFETANTE: agente químico, substância aplicada em objetos inanimados, mata formas vegetativas, mas não necessariamente formas esporuladas.
 
Esterilização: através da ação de procedimentos químicos e físicos, há a eliminação TOTAL de microrganismos (vírus, bactéria, fungos, protozoário, esporos). Ex: autoclave - Exposição ao vapor a uma temperatura de 121 graus).
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Taxa de morte microbiana
Critério de morte de um microrganismo: baseado na capacidade de se reproduzir – perda da capacidade de reprodução. 
A morte microbiana ocorre na forma exponencial. Após uma rápida redução da população, a taxa de morte torna-se mais lenta devido à sobrevivência de células mais resistentes.
Tema da Apresentação
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Ex: inicialmente há 1 milhão de bactérias – após 1 minuto de ação, elimina-se 90% delas (sobram 100.000 bactérias). Após um minuto, 90% das 100.000 são mortas e assim sucessivamente.
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23 de outubro de 2016
Tema da Apresentação
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FATORES QUE INFLUENCIAM A ATIVIDADE DO AGENTE ANTIMICROBIANO
 Tamanho da população microbiana; 
 Intensidade ou concentração do agente microbicida; 
 Tempo de exposição ao agente microbicida; 
 Temperatura em que os microrganismos são expostos ao agente microbicida; 
 Natureza do material do microrganismos (ex: presença de carboidrato aumentam a resistência térmica); 
 Tipo do material do microrganismos (esporos x formas vegetativa; céls + jovens são mais fáceis de destruir).
Tema da Apresentação
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PRINCIPAIS MECANISMOS DE AÇÃO DOS PROCESSOS DE CONTROLE
 Alteração de membrana plasmática 
Rompimento celular
 Desnaturação de proteínas 
Alteração de ácidos nucléicos 
Oxidação 
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23 de outubro de 2016
Tema da Apresentação
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Tema da Apresentação
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Calor: úmido ou seco 
Filtração
Radiação
Baixas temperaturas – controla não esteriliza!!
Pressão osmótica - controla não esteriliza!!
Alta pressão 
MÉTODOS FÍSICOS
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MÉTODOS FÍSICOS
“O método mais empregado para matar microrganismos é o calor, por ser eficaz, barato e prático. Microrganismos são considerados mortos quando perdem a capacidade de multiplicar.”
CALOR ÚMIDO: 
 Causa desnaturação de proteínas, ruptura de DNA e perda da integridade da membrana.
IMPORTANTE:
 Água fervente e pasteurização: destruição apenas de formas vegetativas dos microrganismos (não ocorre esterilização).
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Ex: AUTOCLAVE, PASTEURIZAÇÃO E ÁGUA EM EBULIÇÃO.
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MÉTODOS FÍSICOS
AUTOCLAVE (vapor d”água sobre pressão 121 GRAUS/ 15MIN)
Processo mais utilizado em microbiologia;
Destrói células vegetativas e esporos
Esterilização de meios de cultura, vidrarias, material contaminado...
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MÉTODOS FÍSICOS
PASTEURIZAÇÃO
Aquecimento do material a uma temperatura relativamente baixa por um tempo relativamente longo.
É um método de desinfecção utilizado para grandes quantidades de líquidos que não podem ser fervidos.
62 graus / 30 min./ resfriamento rápido – lenta.
O tratamento térmico é breve para evitar alterações de sabor e valor nutricional;
Não elimina todos os MO;
Tem como alvo MO patogênicos presentes em alimentos;
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 EBULIÇÃO (100 graus/ 30 min.)
 Mata forma vegetativas dos patógenos bacterianos, quase todos os vírus e os fungos em 10 minutos;
 
 Vírus da hepatite pode sobreviver até 30 minutos;
 
 Alguns esporos sobrevivem 20 horas;
 Nem sempre é confiável.
Tema da Apresentação
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MÉTODOS FÍSICOS
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CALOR SECO:
 Causa oxidação dos constituintes orgânicos da célula;
 É necessário maior temperatura e tempo de exposição do que no calor úmido;
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Ex: ESTUFA DE ESTERILIZAÇÃO, INCINERAÇÃO E FLAMBAGEM
MÉTODOS FÍSICOS
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MÉTODOS FÍSICOS
 INCINERAÇÃO
Processo drástico de eliminação de MO, que destrói o produto.
 FLAMBAGEM
Processo onde o produto é submetido diretamente ao fogo. (bico de busen ou lamparina à álcool)
 ESTUFA
160 - 180 graus/ 2 horas;
Amplamente utilizado (óleos, material 
cirúrgico, de corte, utensílios dentários)
Tema da Apresentação
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RADIAÇÕES ELETROMAGNÉTICAS
Efeitos da radiação depende de: comprimento da onda, intensidade, distância da fonte, duração.
 Atua no DNA celular.
Utilizado na esterilização de produtos
farmacêuticos, materiais descartáveis odontológicos e médicos. 
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MÉTODOS FÍSICOS
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23 de outubro de 2016
Tema da Apresentação
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Micro-ondas: Os fornos de micro-ondas são cada vez mais utilizados em laboratórios e as radiações emitidas não afetam o microrganismo, mas geram calor. O calor gerado é responsável pela morte dos microrganismos.
MÉTODOS FÍSICOS
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FILTRAÇÃO
Passagem de soluções ou gases através de filtros.
Retêm os microrganismos, podendo ser empregada na remoção de bactérias e fungos. Não retém a maioria dos vírus. 
O ar pode ser filtrado através de filtros de alta eficiência - HEPA (High Efficiency Particulate Air) muito usados em cabines de segurança biológica, hospitais, câmaras de fluxo laminar. Removem 99,97% de partículas de 0,3 µm. 
 
Tema da Apresentação
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MÉTODOS FÍSICOS
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FILTRAÇÃO
Tema da Apresentação
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MÉTODOS FÍSICOS
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 BAIXAS TEMPERATURAS
Temperatura de refrigerador: 0 a 7oC – taxa metabólica da maioria dos MO é tão reduzida que eles não podem se reproduzir ou sintetizar toxinas – efeito bacteriostático.
Congelamento: preserva alimentos, enzimas. 
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Tema da Apresentação
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MÉTODOS FÍSICOS
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 ALTA PRESSÃO
Se a pressão for alta o suficiente, as estruturas moleculares das proteínas e dos carboidratos serão alteradas: inativação das células vegetativas;
 PRESSÃO OSMÓTICA
A alta concentração de sais ou açúcares cria um ambiente hipertônico que provoca a saída de água do interior da célula microbiana. 
23 de outubro de 2016
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MÉTODOS FÍSICOS
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MÉTODOS QUÍMICOS
SOLUÇÃO
GASOSO
Tema da Apresentação
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MÉTODOS QUÍMICOS
AGENTE QUÍMICO IDEAL: 
 Atividade antimicrobiana (alta, intermediária, baixa); 
 Solubilidade em água ou solventes; 
 Estabilidade durante armazenamento; 
 Ausência de toxicidade para homem e animais; 
 Atividade em temperaturas ambiente; 
 Poder de penetração limitado ao local de aplicação; 
 Ausência de poderes corrosivos e tintoriais; 
 Disponibilidade e baixo custo. 
Tema da Apresentação
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AVALIAR!!
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MÉTODOS QUÍMICOS
FENÓIS E DERIVADOS FENÓLICOS:
Alguns fenóis (creolina) não são mais usados como desinfetantes ou antissépticos - toxicidade para os tecidos. 
Atuam desnaturando proteínas e rompendo membranas. 
Entretanto, tem odor desagradável e são irritantes para pele. 
Tema da Apresentação
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MÉTODOS QUÍMICOS
ÁLCOOIS:
Muito usados, efetivos, confiáveis e baratos, atuando como bactericidas, fungicidas e contra vírus envelopados. 
Etanol e isopropanol, nas concentrações entre 70 e 80%. 
Atuam desnaturando proteínas e dissolvendo lipídeos de membrana. 
Nível de desinfecção: médio e baixo
Tema da Apresentação
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MÉTODOS QUÍMICOS
HALOGÊNIOS:
Iodo: antisséptico para a pele a 2%, ou em solução com iodeto de potássio. 
Eficaz contra bactérias, fungos, vírus e protozoários parasitas; 
Oxida componentes celulares e proteínas; 
Em concentrações elevadas elimina esporos; 
Desvantagens: danos à pele, manchas e alergias.
Cloro: muito utilizado no tratamento de águas e nas indústrias de laticínios e alimentos. 
Pode ser aplicado na forma de gás, hipoclorito de Na+ ou ácido hipocloroso.
Eficaz contra fungos, bactérias e vírus; 
É eficiente, barato, de fácil uso. 
Tema da Apresentação
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MÉTODOS QUÍMICOS
METAIS PESADOS: 
acredita –se que íons metálicos inibam certas enzimas bacterianas. (ex: prata – nitrato de prata 1%, única aplicação na primeira hora após o nascimento)
DETERGENTES:
Ex: quaternário de amônio
Alta atividade microbicida
Alta solubilidade
Tema da Apresentação
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MÉTODOS QUÍMICOS
ÓXIDO DE ETILENO:
Vapores irritantes e inflamáveis 
mata células vegetativas e esporos
Incoveniente: tempo
GLUTARALDEÍDO:
Solução aquosa 2% apresenta largo espectro de atividade antimicrobiana
Material cirúrgico de uro, lentes de instrumentos, equipamentos respiratórios, endoscópicos...
FORMALDEÍDO:
Extremamente tóxico
Solução – esteriliza equipamentos
Gás – esteriliza ambientes
Tema da Apresentação
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ATENÇÃO
A DESINFECÇÃO E A ESTERILIZAÇÃO 
NÃO 
SUBSTITUEM A LIMPEZA E 
NUNCA 
SERÃO ATINGIDAS COM O MATERIAL SUJO!!!
Tema da Apresentação
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ATENÇÃO
Aparelhos com cânulas não deverão ser esterilizados mais por imersão em agentes químicos (ex: glutaraldeído 2%), usar preferencialmente calor úmido.
Tema da Apresentação
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SELEÇÃO DE UMA SUBSTÂNCIA QUÍMICA ANTIMICROBIANA DEVE LEVAR EM CONSIDERAÇÃO:
 Natureza do material a ser tratado: tecido vivo ou objeto inanimado;
 Tipo de microrganismo;
 Condições ambientais: tempo de contato, temperatura, pH, presença de matéria orgânica, presença de água, etc.
Tema da Apresentação
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