Relatório COLORAÇÃO DE GRAM

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FACULDADE SANTA RITA – FASAR
2º PERÍODO DE FARMÁCIA e BIOMEDICINA.
Aula prática 1: Morfologia e coloração da célula bacteriana pelo método de Gram.
Alunos(as): ALUNUNOS
Conselheiro Lafaiete – MG
Outubro de 2017
 Objetivos:
a-    Aprender a preparar esfregaço de bactérias;
b-    Realizar a técnica de Coloração de Gram;
c-    Aprender o fundamento do método de coloração de Gram;
d-    Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;
e-    Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.
2) Procedimentos:
Com o auxílio da alça de platina, inicia-se pelo processo de esterilização sob o bico de Bunsen, até a alça torna-se incandescente. Após a esterilização, aguarda-se alguns segundos e recolha-se uma pequena quantidade de colônia bacteriana, minuciosamente, assim adicionado a solução salina sobre a lâmina , espalhando-a em movimentos circulares, obtendo o esfregaço homogêneo. Após foi feita a secagem do esfregaço, ao menos 10 cm de distância do bico de Bunsen. Posteriormente a fixação do esfregaço, passando a lâmina 3X na chama azul do Bico de Bunsen. A seguir foi coberta toda a lâmina com solução violeta genciana (corante roxo) e aguardamos 1 minuto.
Com a lâmina inclinada foi feito e escorrimento do lugol (mordente) e logo após descorar pelo esfregaço do álcool, deixando assim cair gota a gota sob a lamina, o esfregaço só foi considerado descorado quando o álcool não retirar mais o corante. Após foi feita a lavagem da lâmina com água corrente. e após cobriu-se , com o fucsina de Gram e aguardamos 30 segundos. Em seguida, lavamos a lâmina em água corrente, e foi feita a secagem com o auxílio de papel de filtro. Logo após com o auxílio da professora, colocou-se uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão, para a observação no microscópio. A lâmina foi posicionada no microscópio e este foi ajustado com a objetiva de 100x ampliando assim 1000X.
Resultados dos experimentos: 
Nosso experimento não obteve o êxito como o esperado. Equívocos como ,
a preparação do esfregaço requer cuidados e minuciosidade Alguns fatores
 que levaram ao equívoco como por exemplo, a etapa de fixação,na hora de abri a placa de cultura e tocar na côlonia de bactérias escolhidas para retirada da amostra, e na questão do esfregaço com movimentos de rotação da alça bacteriológica que não foi eito minuciosamente , para se obter um esfregaço correto.A quantidade de reagentes utilizados, como na hora de pinga uma gota de salina fisiológica, que foi uma quantidade mais do que esperado, levando assim a demora para secar. No processo de descoramento para mais ou para menos é resultante da incorreta diferenciação pelo álcool-acetona,leva ao principal inexatidão do experimento. Não conseguimos ter a observação da morfologia da bactéria por consequência, Ademais, conseguimos observar a lâmina de outros colegas atráves do microscópio óptico que tiveram o procedimento da coloração de Gram bem sucedido e com isso aprender o fundamento do método de coloração de Gram.
4) Observações
O descoramento para mais ou para menos é resultante da incorreta diferenciação pelo álcool.
Se houver um questionamento acerca da Gram-positividade ou da Gram-negatividade da cultura, uma coloração de Gram paralela é aconselhável. Para isto, deve-se usar culturas bacterianas conhecidas como Gram-positivas, tal como Staphylococcus aureus e Gram-negativas, tal como Escherichia coli. 
Observou-se a morfologia da célula bacterina, fundamental para nossa aprendizado de taxonomia.
5) Referência bibliográfica:
• Ribeiro, M. C.; Soares, M. M. S. R.; Microbiologia prática: roteiro e manual; Atheneu; 1993; 
        5-8pp.
• TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, CL. Microbiologia. 10. ed., Porto Alegre: Artmed, 2010.