Apostila Prática

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DISCIPLINA DE BIOQUIMICA 
AULAS PRÁTICAS
PROFESSOR: MÁRCIO FRITZEN
Trabalho prático nº01
 
Determinação de pH
Objetivos específicos
No final desse trabalho prático, o estudante deverá saber: 
1. Determinar o pH de soluções.
2. Reconhecer a capacidade tamponante das soluções.
3.Relacionar os conhecimentos adquiridos ao funcionamento dos tampões de importância biológica.
Fundamento:
Segundo as definições de Bronsted-Lowry, ácidos são substâncias que doam prótons, e bases aceitam prótons.
HCl + H2O � H3O+ + Cl-
Ácido Base Ácido conjugado da base H2O Base conjugada do ácido HCl
NH3 + H2O � NH4+ + OH- 
Base Ácido Ácido conjugado da Base NH3 Base conjugada do ácido H2O
Os ácidos podem ser classificados como ácidos fortes e fracos de acordo com a facilidade com que doam seus prótons em solução aquosa.
A água pode agir tanto como um ácido como uma base.
Tampões são sistemas aquosos que tendem a resistir às alterações no pH quando pequenas quantidades de ácido (H+) ou base (OH-) são adicionadas.
Definição de pH
É o potencial de hidrogênio iônico, que expressa a concentração de prótons em uma solução. Como os valores de concentração de prótons e íons hidróxido em soluções diluídas são muito pequenos, introduziu-se o termo pH como forma mais prática de expressar a concentração de prótons.
Então: pH
 pOH = 
 
Substituindo esses termos na equação do produto iônico da água.
 pH + pOH = 14
Determinação do pH de uma solução:
Para determinar o pH de uma solução, podemos usar certos compostos que tem capacidade de mudar de cor em função da [H+]. Esses compostos são conhecidos como indicadores ácido-base, que são ácidos fracos que mudam de cor se estão protonados ou desprotonados. 
Os papéis indicadores são papéis impregnados de um indicador ou de mais indicadores e são usados para determinação aproximada do pH.
O método potenciométrico é o mais preciso, para isso, é utilizado um aparelho chamado pHmetro, que consiste de um eletrodo de vidro e um sistema para medida de voltagem.
Procedimento experimental
	Tubo
	Amostra
	Volume
	HCl 
0,1 mol/L
	NaOH 
0,1 mol/L
	pH
	Classificação
	1
	Água destilada
	5,0
	-
	-
	
	
	2
	Água destilada
	5,0
	1 gota
	-
	
	
	3
	Água destilada
	5,0
	-
	1 gota 
	
	
	4
	Refrigerante
	5,0
	-
	-
	
	
Determinar o pH de cada tubo utilizando papel indicador e classificar as soluções de acordo com os resultados observados.
Trabalho prático nº02
Caracterização de Proteínas
I – Introdução:
As proteínas, que são macromoléculas de peso molecular definido, são eletrólitos cujo comportamento se ajusta aos mesmos princípios físicos de eletrólitos de massa molecular menor. A natureza química dos radicais R (cadeias laterais) dos aminoácidos que compõe a estrutura primária das proteínas determinam a sua estrutura secundária e/ou terciária.
II – Objetivos específicos
No final deste trabalho prático o aluno estará familiarizado com as propriedades físico-químicas das proteínas, bem como com as técnicas e reações de identificação das mesmas.
III – Reação do Biureto
3.1 Fundamento
A reação do biureto ocorre com substâncias que contenham grupos –C=O e grupos nitrogenados. Sendo assim, essa reação é positiva para todas as proteínas e peptídeos graças às suas ligações peptídicas. Estas moléculas, quando tratadas com uma solução diluída de sulfato de cobre, em meio alcalino, dão coloração púrpura característica, devido à formação do complexo de coordenação entre o átomo de cobre e 4 átomos de nitrogênio.
3.2 - Procedimento
Montar uma bateria com:
	Tubos
	Amostra
	CuSO4 a 0,5%
ml
	NaOH a 10%
ml
	1
	Água, 2ml
	0,5
	0,5
	2
	Clara de ovo(a), 2ml
	0,5
	0,5
	3
	Leite(c),2ml
	0,5
	0,5
Observar que alguns tubos haverá formação de uma coloração violeta, característica da reação positiva, enquanto que no tubo contendo apenas água e os reagentes verificar-se-á uma cor azul escura característica do cobre em meio alcalino (formação de Cu(OH)2 e de óxidos de Cu(I).
Trabalho Prático nº 03
Enzimas 
Objetivos específicos:
Ao final deste trabalho prático o estudante deverá saber:
- Manipular experimentalmente soluções de enzimas;
- Identificar experimentalmente as propriedades de termolabilidade e especificidade;
- Manipular reações catalisadas por enzimas com a finalidade de determinar semi-quantitativamente a influência da concentração de enzima, temperatura e do pH na atividade enzimática.
Procedimento experimental
Atividade da Catalase
 
Enzima presente em quase todas as células animais.
a) Em um tubo de ensaio colocar:
5 gotas de sangue.
5ml de água destilada-homogeneizar.
1ml de H2O2 3% (10 volumes) - agitar.
b) Note a formação de espuma abundante. Procure uma explicação para o fato. Esquematize a reação ocorrida.
Trabalho prático nº 04
Identificação de Carboidratos
Introdução
Os carboidratos podem ser identificados por meio de várias reações. Algumas dessas reações envolvem a formação de complexos corados, e a especificidade da identificação depende da estrutura dos carboidratos. Assim, há reações gerais e outras para estruturas mais específicas, como aquelas para aldoses, cetonas, mono e dissacarídeos redutores, etc.
Objetivos específicos
No final deste trabalho prático, o estudante deverá saber:
- Executar testes qualitativos para reconhecimento de carboidratos.
- O significado dos seguintes testes: Seliwanof e Benedict.
1. Reação de Benedict
Utilizada para identificação de carboidratos redutores. Íons de metais como, cobre, prata, ferro, mercúrio, etc. são reduzidos por grupos aldeídicos ou cetônicos livres de vários carboidratos. Colocando-se hidróxido de cobre II, Cu (OH)2, de cor azul, em meio alcalino, forma-se uma suspensão que, sob aquecimento, se precipita como óxido de cobre II, CuO de cor preta. Mas se compostos redutores forem acrescentados à suspensão, o Cu (OH)2 é reduzido a Cu2 O, que se precipita e cuja cor se situa entre o amarelo e o vermelho. As reações abaixo mostram o que ocorre o Cu (OH)2 na presença e na ausência de agentes redutores, em meio alcalino e a quente.
Ausência de composto redutor:
			 Meio alcalino
Cu(OH)2 → CuO + H2O
(azul)	 aquecimento	 (preto)
Presença de composto redutor:
 
			 Meio alcalino
Cu(OH)2 → Cu2O + H2O
(azul)	 aquecimento	 (amarelo/vermelho)
Como não é prático utilizar uma suspensão de Cu2+, e também para se evitar que o CuO(preto) mascare o resultado da reação, acrescenta-se ao meio da reação um composto orgânico solubilizador que, em meio alcalino, adequado, reage com os íons metálicos, formando um complexo iônico solúvel. Este complexo se dissocia em grau suficiente para que haja, no meio da reação, íons metálicos disponíveis para se reduzirem. No caso do reagente de Fehling, emprega-se CuSO4 2% solubilizado por tartarato de Na+ e de K+ 10%.
Dissolvido em NaOH 2 M; no caso de reagente de Benedict (qualitativo), emprega-se CuSO4 2% solubilizado por citrato de Na+ 20%, dissolvido em Na2CO3 2M.
Os testes de carboidratosredutores são positivos para compostos com grupamento OH glicosídico livre, mas negativos para polímeros de cadeias longas. Assim, amido não dá reação positiva, a não ser após a sua hidrólise, e a reação é tanto mais positiva quanto maior a extensão da hidrólise.
Até alguns anos atrás, os testes de substâncias redutoras, sobretudo na urina, era empregado no diagnóstico de pacientes diabéticos, ou suspeito de sê-lo, de modo rotineiro. Atualmente, há testes mais sensíves para dosagem rápida de glicose, baseadas em ensaio enzimático (glicofita/glicose-oxidase) e que são muito mais práticos, por não exigirem a disponibilidade dos reagentes mencionados.
Procedimento experimental
Identificação de substâncias redutoras com reagentes de Benedict (qualitativo).
Preparar 5 tubos de ensaio:
	Tubo
	Amostra
	Volume
ml
	Reagente de Benedict
ml
	Resultado
	1
	Água
	1,0
	1,0
	
	2
	Glicose 0,1M
	1,0
	1,0
	
	3
	Frutose 0,1M
	1,0
	1,0
	
	4
	Sacarose 0,1M
	1,0
	1,0
	
	5
	Amido 0,1%
	1,0
	1,0
	
Aquecer todos os tubos em banho de água fervente, durante 5 minutos. Anotar os resultados obtidos (se positivo, numa escala de 1 a 4 cruzes, + a ++++), comparando com o tubo 1 ( controle). Explique os resultados obtidos.
Trabalho prático n° 05
Aula prática - Fermentação alcóolica:
Processo de fermentação
Objetivo: 
Observar as células de leveduras Sacharomyces cerevisae incubadas em diferentes condições. 
Material:
- células de Sacharomyces cerevisae (Fermento biológico seco).  Pesar 5g/ erlenmeyer
- agitador de bandeja
- solução de sacarose 10% ou glicose 10%
- erlenmeyer de 250ml e balões de borracha
 
Procedimento (4 erlenmeyers):
Erlenmeyer 1: Adicionar 5g de S. cerevisae (fermento biológico) e 50 mL de solução de glicose 10%. Vedar a saída de ar com um balão. Aquecer em banho maria 75 graus por 15 minutos. Agitar com frequência.
Erlenmeyer 2: Adicionar 5g de S. cerevisae (fermento biológico) e 50 mL de solução de glicose 10%. Vedar a saída de ar com um balão. Deixar sobre a bancada por 15 minutos. Agitar com frequência.
Erlenmeyer 3: Adicionar 5g de S. cerevisae (fermento biológico) e 50 mL de água destilada. Vedar a saída de ar com um balão. Deixar sobre a bancada por 15 minutos. Agitar com frequência.
Erlenmeyer 4: Adicionar apenas 50 mL de solução de glicose 10%. Vedar a saída de ar com um balão. Deixar sobre a bancada por 15 minutos. Agitar com frequência.
Observar os resultados, solicitar relatório e/ou distribuir questionário.
 	
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