Aula prática 1 Microscopia

Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original

*
Histologia e seus métodos de estudo
1-Tipos de Microscopias
Microscopia óptica (resolução 0,2 m; aumento 1000-1500 x)
• Microscopia de luz
• Microscopia de contraste de fase e de contraste
diferencial de interferência
• Microscopia de polarização
• Microscopia confocal
• Microscopia de fluorescência
Microscopia eletrônica (resolução 0,1 nm; aumento 120 000 x)
• Microscopia eletrônica de transmissão
• Microscopia eletrônica de varrimento
*
   
	
  
1 = ocular
2 = objetivas e revólver
3 = platina
4 = charriot
5 = macrométrico
6 = micrométrico
7 = diafragma no condensador
8 = condensador
9 = botão do condensador
10 = dois parafusos centralizadores do condensador
11 = fonte de luz
12 = controle de iluminação
13 = diafragma de campo (alavanca no lado
esquerdo do microscópio)
14 = dois parafusos de ajuste da lâmpada(esquerdo e direito)
15 = focalizadora da lâmpada (alavanca no lado direito do microscópio - não visível na fotografia)
*
Transmissão- observação de cortes ultrafinos; 
 Varredura - imagens de alta ampliação para a observação de superfícies; 
Tunelamento - visualização de átomos. 
 
3-PARTES DO MICROSCÓPIO
3.1 Identificação das partes do microscópio
*
1. Parte Mecânica
• Pé ou Base
• Braço ou Coluna
• Platina
• Charriot
• Parafuso Macrométrico
• Parafuso Micrométrico
• Canhão
• Revólver
2. Parte Óptica
• Sistemas de Iluminação (abaixo da platina):
- Fonte de luz
- Condensador
- Diafragma
• Objetivas
• Ocular(es)
*
Pé ou base-Suporte e confere estabilidade ao aparelho.
Corpo ou braço- Sustentação vertical.
Platina ou mesa- Peça metálica, onde se colocam as preparações.
Charriot- parafusos que permitem movimentação da lâmina nos sentidos laterais, anterior e posterior.
Revólver- Peça móvel que sustenta as lentes objetivas e permite intercambiá-las
Tubo e canhão- Peças que sustentam a lente ocular.
Parafuso Macrométrico e micrométrico- Sistema para a movimentação da platina. O parafuso macrométrico dá o primeiro foco e o micrométrico permite o ajuste do foco.
Parafuso do condensador- Acoplado ao sistema de sustentação do condensador, serve para movimentá-lo para cima e para baixo.
Sistema de iluminação
Fonte de iluminação- Consta de um espelho ou iluminador próprio
*
Condensador- Conjunto de lentes para concentrar e fornecer luz adequada á iluminação.
Diafragma- È o regulador de intensidade luminosa.
 Receptáculo de filtro- Anel com encaixe para a colocação de filtros.
Sistema óptico
Objetivas- sistema de lentes que fazem a primeira ampliação do objeto.
Ocular- Sistema de lentes próximo ao olho do observador
Prisma- Transmite a imagem vinda da objetiva para a ocular, com mudança de direção do feixe luminoso
*
1- Preparação de tecidos para exame microscópico
Coloração
Componentes dos tecidos que coram com corantes básicos – basófilos
Exemplos de corantes básicos: hematoxilina, azul de toluidina e azul de
metileno
Componentes dos tecidos que coram com corantes ácidos –
acidófilos
Exemplos de corantes ácidos: eosina, fucsina ácida, etc
Componentes celulares
basófilos:
ácidos nucleicos,
glicosaminoglicanas e
glicoproteínas ácidas:
Componentes celulares
acidófilos:
mitocôndrias, grânulos de
segregação, proteínas
citoplasmáticas e colagéneo.
*
*
*
Planos de corte
*
Formação da imagem e cálculo dos aumentos
Objetiva-Imagem real
Ocular- Ampliação (Imagem virtual).
AT-aumento total
AOb- aumento da objetiva
AOc- Aumento da ocular
AT= AOb x AOc
*
MANUSEIO CORRETO PARA FOCALIZAÇÃO
1. Gire o revólver, encaixando a objetiva de menor aumento no eixo óptico.
2. Abra a presilha do charriot e coloque a lâmina sobre a platina, sempre com a lamínula voltada para cima.
3. Centralize o material no orifício da platina, utilizando os parafusos do charriot.
4. Coloque o condensador em sua posição mais elevada.
5. Levante a platina até o fim, movimentando o parafuso macrométrico com as duas mãos.
6. Acenda a luz do microscópio.
7. Certifique-se que o diafragma está aberto, olhando se há passagem de luz através da lâmina.
8. Olhando agora através das oculares, com os dois olhos abertos, abaixe lentamente a platina, movimentando o parafuso macrométrico com as duas mãos, até que o material possa ser visto.
*
9. Observando o material, corrija a distância entre as duas oculares, de tal forma que passe a enxergar um só campo de imagem.
10. Neste momento, refine o ajuste de foco utilizando o parafuso micrométrico.
11. Explore a preparação utilizando os parafusos do charriot.
12. A preparação pode agora ser observada com as demais objetivas, respeitando sempre a ordem crescente de seus aumentos. Antes de passar para a objetiva de aumento imediatamente superior, coloque sempre a parte do material
a ser observada no centro do campo de observação.
13. A partir da objetiva de aumento médio (10X) e com as demais objetivas, faça o ajuste de foco utilizando somente o parafuso micrométrico.
14. Quando necessário o uso da objetiva de 100X, chamada objetiva de imersão, é imprescindível o uso de óleo de imersão entre a lâmina e a objetiva. Para faze-lo, siga os passos seguintes: a) após ter focado com a objetiva de 40X, gire o revólver em direção à objetiva de 100X , sem encaixa-la no eixo óptico; b) pingue uma gota de óleo de imersão sobre a região iluminada da lâmina; c) complete o giro do revólver, encaixando a objetiva de 100X. Ao encaixar a objetiva de 100X, esta lente deve mergulhar na gota de óleo e arrastá-la pela lâmina a medida que a preparação é explorada.
15. A cada objetiva que estiver usando, ajuste a iluminação movimentando o condensador e adequando a abertura do diafragma.
16. Termine a observação: a) desligue a luz; b) gire o revólver para encaixar a objetiva de menor aumento; c) abaixe totalmente a platina; d) retire a lâmina e limpe-a antes de guardá-la;.