desnaturacao (2)

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A desnaturação das proteínas e a identificação da presença de albumina em materiais biológicos
Participantes (Curso profissional de Técnicos de Análises Laboratoriais):
Ana Veloso
Ângelo Magalhães
Sara Almeida
Sónia Paulino
Professor responsável: Pedro Cabrita
ESCOLA SECUNDÁRIA D. JOÃO II – SETÚBAL
E-mail: 	profpedrocabrita@gmail.com
	ana.catarina.santos.veloso1994@gmail.com
	angelo.1997.1997@gmail.com
	sarafilipa_61@hotmail.com
	sonia_alexandra_21@hotmail.com
Resumo
Esta experiência, realizada no âmbito do módulo 3 (Biomoléculas) da disciplina de Química Aplicada, pretendeu demonstrar como a proteína Ovoalbumina reage exposta a diferentes reagentes. Para tal, foi preparada uma bateria de testes, com o objetivo de verificar a desnaturação proteica por agentes diversos, demostrando a utilidade dessa estratégia, para identificar a presença de albumina numa mistura biológica.
Para que certas substâncias presentes na amostra em estudo não se misturem com o reagente de identificação, impedindo/dificultando a reacção com a substância química que se procura detectar, utilizou-se, para comparação, uma amostra-branco (água destilada - não tem, convictamente, a substância a detetar), sendo considerada a amostra obtida a partir do ovo como amostra-padrão (aquela em que se sabe existir a substância a analisar).
Concluiu-se que as características específicas desta proteína permitem utilizar a desnaturação proteica como forma de identificar a sua presença em materiais biológicos.
Conceitos
As proteínas (polímeros naturais de aminoácidos condensados), formam cadeias polipeptídicas longas, dispostas no espaço de modos característicos. A sequência dos aminoácidos é sempre igual, com um número variado de combinações possíveis. As cadeias polipeptídicas estão enroladas em forma de hélice ou ligadas lateralmente a outras cadeias formando folhas. As forças intermoleculares responsáveis por estes arranjos conformacionais são, predominantemente, as ligações de hidrogénio entre os grupos carbonilo, e os hidrogénios do grupo amino.
Quando a proteína deixa de exercer as suas funções, diz-se desnaturada. A desnaturação ocorre quando os seus enrolamentos e agrupamentos característicos são desfeitos. Pode ser provocada por agentes externos diversos - variação da temperatura, forças de cisalhamento ou valores de pH extremos. 
A albumina é uma proteína de alto valor biológico presente na clara do ovo (proteína maioritária), no leite e no sangue. É solúvel em água, moderadamente solúvel em soluções salinas e sofre desnaturação por acção térmica. Possui propriedades antigénicas que a tornam termo-estável (resistente à desnaturação térmica). Pode ser encontrada no plasma, diferindo das outras proteínas plasmáticas por não ser glicosilada (não possui um resíduo açúcar). A sua síntese está ligada ao fornecimento de aminoácidos estruturais ao fígado e daí a sua sensibilidade à desnaturação proteica.
Protocolo Experimental 
Materiais:
	1
	Lamparina 
	8
	Tubos de ensaio
	2
	Gobelé
	1
	Proveta volumétrica 
	1
	Tina de vidro
	1
	Tecido fino 
	1
	Balança Digital
Reagentes:
Ácido Sulfúrico
Álcool etílico
Hidróxido de sódio
Água destilada
Clara de ovo
Cloreto de sódio
Segurança
	Álcool Etílico: 
	
	R11
	Facilmente inflamável.
	
	S7
	Manter o recipiente bem fechado.
	
	S16
	Conservar longe de fontes de ignição.
	Ácido Sulfúrico:
	
	R35
	Provoca queimaduras graves.
	
	S1
	Conservar fechado à chave.
	
	S30
	Nunca deitar água neste produto.
	
	S45
	Em caso de acidente ou de indisposição consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo).
	Hidróxido de Sódio: 
	
	R35
	Provoca queimaduras graves
	
	R36/38
	Irritante para os olhos e pele.
	
	S36
	Usar vestuários de protecção adequados
	
	S45
	Em caso de acidente ou de indisposição consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo).
	Cloreto de sódio:
	
	-
	Sem perigos.
Procedimento 
Recolher o material necessário;
Pesar 1 g de NaCl;
Separar a clara do ovo;
Adicionar um volume de água cinco vezes superior ao da clara de ovo;
Juntar 1 g de NaCl pulverizado;
Filtrar através de um tecido fino;
Colocar em 8 tubos de ensaio diferentes, cerca de 5 ml pouco da solução da proteína preparada;
Aquecer o 1º tubo de ensaio com a lamparina;
No 2º tubo de ensaio juntar NaOH;
No 3º tubo de ensaio juntar o H2SO4;
No 4º tubo de ensaio adicione 5 ml de álcool etílico;
Observa e registar o aspecto da mistura final.
Resultados experimentais
	Reagentes / Procedimento
	Substância testada
	Observações
	Aquecimento com a lamparina
	Clara de ovo
	Entrou em ebulição; verificou-se uma diminuição do volume da mistura e alteração para uma cor próxima do branco.
	
	Amostra Branco
	Entrou em ebulição; verificou-se alteração para uma cor próxima do branco mas não se verificou alteração do volume da mistura.
	H2SO4
	Clara de ovo
	O ácido misturou-se com a clara de ovo.
	
	Amostra Branco
	Não se verificaram alterações.
	NaOH
	Clara de ovo
	O reagente dissolveu-se na clara de ovo e verificou-se que o tubo aqueceu ligeiramente.
	
	Amostra Branco
	Não se verificaram alterações.
	Álcool etílico
	Clara de ovo
	A amostra ficou branca.
	
	Amostra Branco
	Não se verificaram alterações.
Análise dos resultados experimentais
Não houve alteração em relação à amostra-branco quando se adicionou hidróxido de sódio – a albumina não é desnaturada pela adição de base (aumento de pH).
Após a adição de ácido sulfúrico apenas se verificou um ligeiro aquecimento do tubo de ensaio, relativamente à amostra-branco – a albumina não é desnaturada pela adição de ácido (diminuição de pH).
Após o aquecimento da mistura verificou-se a desnaturação da proteína – a albumina é desnaturada pelo calor.
Após a adição de álcool etílico, a mistura ficou esbranquiçada, relativamente à amostra-branco (sem alterações) – a albumina é desnaturada pela adição de álcool etílico.
Aplicações
A bateria de testes aplicada tem como objetivos, verificar a desnaturação proteica por agentes externos e determinar a presença de albumina. Este último propósito do procedimento será importante como base para o estudo dos métodos utilizados na determinação da presença desta proteína em materiais biológicos diversos. 
A albumina é uma proteína com um papel importante na alimentação pois fornece alguns aminoácidos essenciais, como a metionina e a cisteína, fontes de enxofre. A monitorização dos seus níveis é pertinente, nos alimentos como parte importante de uma dieta saudável e no sangue como um dos indicadores do estado de saúde individual.
Conclusões
Com esta experiência verificámos como reage a proteína albumina ao calor e à adição de ácido, base ou álcool, concluindo que se desnatura apenas com o calor e com o álcool.
Conhecido o aspeto da albumina desnaturada e reconhecida a sua reação diferenciada a agentes desnaturantes, concluímos poder utilizar esta metodologia para determinar a sua presença específica numa mistura biológica.
Os testes deverão ser sempre realizados com as amostras biológicas, uma amostra-branco (água destilada ou solvente orgânico sem azoto) e uma amostra-padrão (albumina obtida da clara do ovo), como forma de minimizar erros experimentais (falsos positivos e falsos negativos).
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