microbiologia aula 00 demonstrativa

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Curso Intensivo para Oficial Complementar Farmacêutico do CBM/DF 
Aula 00 - Aula Demonstrativa 
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Aula 00 
Microbiologia 
Professor: Pollyana Lyra 
 
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Olá, Tudo bem?? Meu nome é Pollyana Lyra e estarei acompanhando vocês 
no nosso Intensivo de Específicas para o concurso do Corpo de Bombeiros do 
DF para o cargo de Oficial Complementar - Farmácia, mas antes disso, 
deixe-me me apresentar. Sou Farmacêutica Bioquímica e Industrial, com 
experiência em Indústria Farmacêutica nas áreas de Desenvolvimento de 
produtos (FARMACOTECNICO) por 4 anos, tempo esse interrompido por uma 
nomeação no concurso público da secretaria de saúde de Caldas Novas (5º lugar), 
onde atuei como Responsável técnica do Laboratório de Análises Clinicas do CTA 
(Centro de Testagem e aconselhamento) que faz parte do programa DST/ AIDS 
do Ministério da Saúde, onde em poucos meses me tornei coordenadora do 
programa de distribuição de TARV e Talidomida. Por motivos pessoais (resolvi me 
casar) pedi exoneração e mudei de cidade, onde comecei a atuar na área de 
docência. 
Ministrei aulas durante 4 anos (isso mesmo, parece que minha vida 
profissional acontece em ciclos de 4 anos...risos) na Faculdade de Tecnologia 
Senai Roberto Mange. Tempo esse que aprendi a gostar da área de ensino e 
pesquisa e acabei me especializando em Farmacologia. Após esses 4 anos em 
sala de aula tive uma filha e optei por me dedicar a ela exclusivamente e após 
um ano voltar aos concursos (visando Policia Federal) e docência... 
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Outros resultados de concurso: 27º lugar Farmacêutica Bioquímica da 
Prefeitura de Anápolis (2016), 29º lugar Fiscal Sanitário no mesmo concurso, 71º 
lugar em perito da Policia Civil do Distrito Federal (2016)... 
Bom, eu sei muito bem que não temos tempo a perder, então vamos 
começar a entender o nosso curso!!! Tenho certeza que com nossas aulas em 
PDF, bem como a bateria de exercícios vocês estarão preparados para enfrentar 
a IDECAN e conquistar o almejado cargo de Oficial no CBMDF! 
 
 
CONHECENDO O CURSO... 
O nosso curso é direcionado aos Farmacêuticos, especialmente aqueles que 
acreditam em estratégias inovadoras e precisam otimizar seu tempo. Isso porque 
será um “intensivo” de todo o conteúdo específico acompanhado de exercícios 
comentados... mas você pode estar pensando.... Qual será o diferencial dos 
demais cursos já existentes? Bom, o nosso curso trabalhará o conteúdo BASEADO 
em questões e não simplesmente descrever um conteúdo teórico acompanhado 
de uma gama de questões sobre o tema abordado, além disso, trata toda a parte 
específica de forma facilitada, resumida, esquematizada (através de tabelas, 
mapas mentais e artifícios mnemônicos) assim ele será mais dinâmico, mais 
prático, mais enxuto e direcionado! 
Você estará desde a primeira página treinando para a sua prova, pois, como 
concurseiro, você deve saber que tão importante como saber o conteúdo é saber 
como é cobrado esse conteúdo pela banca específica, não é mesmo? 
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Muitos Farmacêuticos não encaram esse desafio pelo pouco número de 
vagas ofertado. Um grande erro! Pois, o conteúdo cobrado nesse edital é 
semelhante a vários concursos cujos editais estão prestes a serem publicados, 
um exemplo é o HEMOCENTRO do DF. Ou seja, preparando-se por esse material 
você estará se preparando também para concursos de Prefeituras, Estados, 
Forças Armadas ou qualquer outro na área de Farmácia Bioquímica. Um outro 
motivo para investir no nosso curso é o número e o peso dobrado das questões 
específicas de Análises Clínicas que pode ser o fator determinante para ocupar a 
almejada vaga. 
 
“Ou você tem uma estratégia própria, ou então é parte da estratégia de 
alguém. ” 
 
Alvin Toffler 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Para isso, segue o cronograma do curso de Microbiologia. 
 
Aula Conteúdo Programático Data 
00 Coleta de amostras para exames, métodos de coloração. 14/11/16 
01 Meios de cultura, condições gerais de preparo, 
armazenamento. Provas de controle de qualidade. 
Isolamento e identificação de bactérias e fungos de interesse 
médico. Determinação de sensibilidade das bactérias aos 
antimicrobianos 
15/11/16 
02 Esterilização - métodos físicos, e químicos, princípios e tipos 16/11/16 
 
Bom, vamos embarcar nessa jornada por meio de nossa aula experimental! 
 
 
 
 
 
 
 
 
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MICROBIOLOGIA 
AULA 00 - COLETA DE AMOSTRAS PARA EXAMES E MÉTODOS DE COLORAÇÃO 
Tópicos da Aula 
 
1. Coloração GRAM ................................................................................... 7 
1.1 Esquema Diferencial das Paredes Bacterianas Gram + e - ........... 9 
1.2 Componentes Exclusivos Das Bactérias ............................ 11 
2. Coloração de Ziehl-Neelsen (BAAR) ................................................ 12 
 2.1 Comportamento dos bacilos frente a cada corante...................13 
3. Coleta de Amostras para Exame Microbiológico ............................... 13 
 3.1 Resumo de formas de coleta.................................................19 
4. Questões Comentadas ....................................................................20 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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1. Coloração GRAM 
Sabemos que praticamente todo procedimento laboratorial exige etapas pré-
analíticas e a coloração é uma delas. O uso da cor facilita a visualização 
em geral, imagine do que é microscópico...e por isso o Dinamarquês Hans 
Christian Joachim Gram criou essa técnica que é de longe a mais usada em 
laboratório de micro. 
Como cai na prova??? Isso, já vamos começar por aí! 
 
 (IDECAN-2012) MUNICÍPIO DE MATIAS CARDOSO/MG. A coloração de Gram é um dos mais 
importantes métodos utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, 
sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias. 
Por essa técnica, um esfregaço de células procarióticas fixadas pelo calor recebe o 
corante cristal violeta e, depois, o lugol (à base de iodo). Essas duas substâncias se 
combinam no citoplasma da célula procariótica, que passa a ter coloração violeta-escura 
ou púrpura. A seguir, adiciona-se álcool, que tem a capacidade de descolorir as células 
que foram coradas. No entanto, diferenças estruturais na parede celular dosprocariontes 
afetam a retenção ou o escape da combinação entre o corante violeta e o iodo, quando 
se adiciona o álcool. Portanto, a retenção da cor nas células, quando ocorre, refere-se 
às bactérias 
 A) gram-negativas, devido à presença de parede celular com camada delgada de 
peptideoglicano associada a uma camada mais externa de composição lipoproteica. 
B) gram-negativas, devido à presença de parede celular formada por uma camada 
espessa de peptideoglicano. 
C) gram-positivas, devido à presença de parede celular com camada delgada de 
peptideoglicano associada a uma camada mais externa de composição 
lipoproteica. 
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D) gram-positivas, devido à presença de parede celular com camada espessa de 
peptideoglicano associada a uma camada mais externa de composição 
lipoproteica. 
E) gram-positivas, devido à presença de parede celular formada por uma camada 
espessa de peptideoglicano. 
Gabarito: LETRA E. Erros das demais assertivas estão destacados em negrito. 
Excelente questão para começar o assunto de Coloração, pois em primeiro lugar 
já mostra que o assunto cai, segundo lugar mostra o princípio da técnica e a leitura do 
resultado, vamos lá: CHEGA DE ERRAR QUESTÕES DE GRAM na prova! 
 
 
 
 
 
 
 
Só isso!!! Ah e Olha que linda fica a lâmina corada!!! 
 
Lâmina – Coloração Gram 
Agora observe o desenho abaixo, SUPER simples que demonstra a diferença 
estrutural da parede bacteriana e que justifica tal comportamento durante a coloração. 
Veja: 
Olha como é simples: Gram coloriu uma lâmina com bactérias fixadas por calor com um 
corante roxo (cristal violeta) e assim todas ficaram roxinhas, para garantir que o corante ficasse 
mesmo dentro da célula ele adicionou o lugol (que é a base de Iodo) e forma um complexo sólido 
dentro das bactérias. Todas permaneceram roxas, mas após a lavagem com álcool algumas 
descoraram (ou seja, ficaram negativas) e as outras permaneceram roxas (positivas). Para 
conseguir visualizar as que descoraram ele adicionou um outro corante, as vezes chamado em 
provas de contra corante, só para revelar a presença daquelas bactérias ali (já pensou se não 
fosse revelado? Como saberíamos a forma delas por exemplo...? se estavam incolores..) Por 
isso, no final ele usou a fucsina ou safranina, deixando as que eram incolores (negativas) da cor 
rosa. 
 
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1.1 Esquema Diferencial das Paredes Bacterianas Gram + e - 
 
 
 
 
 
 Gram +: GROSSA 
 GRAM -: FINA 
 
A Bactéria Gram positiva tem apenas 2camadas: 
A membrana celular (azul) e a parede celular de peptideoglicano 
(verde) que é formada por mureína + N-acetilglicosamida. Essa camada, porém, 
é bem mais espessa nelas do que nas bactérias Gram Negativas... 
Para lembrar disso, observe que o nome da estrutura química que dá essa 
proteção maior é MUREÍNA, lembrando de MURO (que também trás proteção). 
A Bactéria Gram positiva tem 3camadas: 
GRAM 
POSITIVA 
(ROXA) 
GRAM 
NEGATIVA 
(ROSA) 
MEMBRANA 
 
MUREÍNA 
LPS 
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As mesmas que a Gram positiva, ou seja, membrana celular e 
peptideoglicano, porém essa última mais fina do que a da Gram +, ou seja seu 
“MURO” é mais fino, por isso ela precisa também de uma mais externa de 
lipopolissacarídeos. 
Entre elas existe um espaço, chamado espaço periplasmático. 
O que faz a bactéria Gram + reter o corante e a Gram - perder o 
corante? 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
G+ retém porque o cristal 
violeta+ lugol formam 
complexo que fica preso no 
espesso “muro” de 
peptideoglicano. 
 
G- perde porque o álcool 
solubiliza os lipídeos da 
membrana extra de LPP. O 
peptideoglicano da G- é muito 
fino e não retém o corante 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
(FUNCERN -2012) BIÓLOGO IFRN. A parede celular é uma estrutura externa 
à membrana plasmática e é importante para os organismos microbianos. 
Cada grupo de organismos tem peculiaridades na estrutura de sua parede 
celular. Assim, a opção que apresenta, respectivamente, os componentes 
exclusivos de parede de bactéria Grampositiva, Gram-negativa e de parede 
celular de fungo é: 
A) ácido teicóico, membrana externa fosfolipídica e peptídeoglicano. 
B) ácido teicóico, membrana externa fosfolipídica e mananas. 
C) peptideoglicano, mananas e membrana externa fosfolipídica. 
D) ácido teicóico, mananas e membrana externa fosfolipídica 
 
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GABARITO: B, os erros estão destacados em negrito. 
 
Não se assuste! Eu coloquei essa questão apenas para fechar o assunto 
com essas observações e mostrar que não é exagero não!!! Cai em prova! 
 
1.2 Componentes Exclusivos Das Bactérias 
 
 GRAM POSITIVAS: Ácido Tecóico, exotoxina 
 GRAM NEGATIVAS: Antígeno O, Endotoxina 
 
Difícil lembrar esses nomes??? QUE TAL MEMORIZAR??? 
Olha, se a banca perguntar se tem ácido tecóico você irá pensar assim: 
Sim é um sinal positivo , ou seja, as Gram positivas tem o ácido tecóico, e 
Não é um sinal negativo , ou seja as Gram Negativas não tem o ácido 
tecóico. 
Quanto à endo ou exotoxina é só pensar que o prefixo que tem o N 
corresponde às Gram Negativas (cuja inicial é N), sendo, portanto, ENDO. E 
o outro é o das Gram positivas (EXO). 
Por fim, em relação ao Antígeno O, é só pensar que ele é o responsável 
pela maior patogenicidade das bactérias Gram Negativas!!! Você se lembra que 
elas são mais patogênicas do que as Positivas, não é?? 
Releia a questão e observe que mesmo que você não saiba que mananas 
são estruturas exclusivas de fungos, acertaria a questão por exclusão, visto as 
demais alternativas. 
 
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COMPONENTE GRAM POSITIVA 
(ROXA) 
GRAM NEGATIVA 
(ROSA) 
ÁCIDO TECÓICO 
SIM NÃO 
ENDOTOXINA NÃO SIM 
EXOTOXINA SIM NÃO 
ANTIGENO O 
(PATOGENICIDADE) 
NÃO SIM 
 
Falando em fungos e outras estruturas... Existe uma dificuldade de 
visualização de micobactérias pela coloração Gram, porque elas possuem na sua 
parede celular uma grande concentração de lipídeos, devido à presença de ceras 
e ácidos graxos (ácidos micólicos), assim é utilizado um método que é justamente 
o próximo tópico da nossa aula. 
2. Coloração de Ziehl-Neelsen (BAAR) 
Galerinha, sigam o mesmo raciocínio da coloração Gram...Colorir e 
descorar! Mas aqui, colore-se com o corante fucsina (rosa ou vermelho) e 
descorar com uma mistura de áccol + ácido (clorídrico). Se as micobactérias 
forem resistentes a essa mistura, são consideradas positivas (pois ficam ainda 
coradas com o corante inicial e permanecem com a coloração rosa). Se elas não 
forem resistentes, irão descorar e ficarna cor do fundo da lâmia (azul) devido ao 
azul de metileno. Fácil, Fácil, não é??? Vai um esqueminha para fixar... 
Bactérias álcool ácido resistentes (BAAR): vermelho ou rosa 
Bactérias não-álcool ácido resistentes (BNAAR): azul 
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2.1 Comportamento dos bacilos frente a cada corante 
Soluções em ordem de 
aplicação 
BAAR BNAAR 
Fucsina de Ziehl Bactérias coradas em 
vermelho 
Bactérias coradas em 
vermelho 
Álcool-ácido clorídrico A fucsina se fixa nos lipídeos 
complexos e não abandona 
a célula, que permanece 
vermelha 
A fucsina não se fixa nos 
componentes da parede 
celular e abandona a célula, 
que permanece sem corante 
em seu interior 
Azul-de-metileno A célula não é afetada e 
permanece vermelha 
A célula adquire o corante, 
tornando-se azul (cor do 
fundo) 
 
Não se esqueçam, essa coloração é usada para bactéricas que se coram mal pela coloração 
GRAM, em especial os bacilos da LEPRA e da TUBERCULOSE. 
 
 
Lâmina BAAR 
 
3. Coleta de Amostras para Exame Microbiológico 
Como já mencionado, a fase pré-analítica é fundamental para a acurácia 
do exame e diagnóstico microbiológico. Isso porque qualquer célula ou 
contaminante pode alterar a conclusão do médico e por consequência a terapia 
escolhida. 
 
 
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ATENÇÃO: Algumas bactérias são especialmente sensíveis às condições 
ambientais, incluindo Shigella spp, Neisseria gonorrhoeae, N. 
meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae e anaeróbios. 
 
 
Nunca refrigerar amostras de líquor, amostras genitais, oculares 
ou da orelha interna; 
 
ORIENTAÇÕES DA 
ANVISA 
Cuidado com a escolha: 
da suspeita clínica, do 
agente pesquisado, do 
momento clínico para 
coleta do teste a ser feito 
Terapia antimicrobiana: 
coletar antes de iniciar ou 
modificar a medicação. 
NÃO ESQUECER: 
Orientar o paciente, 
identificar amostra (nunca 
na tampa), usar EPI, ser 
Treinado, usar frasco 
estéril 
APÓS A COLETA: Conferir 
se volume é suficiente, 
transportar rapidamente 
para o laboratório. 
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Conforme as normas de biossegurança, todo material será colhido, 
acondicionado, transportado, processado e descartado como potencialmente 
infectante, independentemente do diagnóstico do paciente. Para evitar a 
exposição de risco biológico, observar as rotinas de cada procedimento e usar os 
EPIs indicados. 
O Meio de transporte serve para manter a viabilidade das bactérias, porém 
sem permitir a multiplicação (Ex: Stuart, Amies, Cary Blair) durante o trânsito 
entre o local de coleta e o laboratório, mas isso vamos ver melhor na aula de 
meios de cultura... 
Vejamos agora a forma de coleta adequada para alguns dos principais 
exames microbiológicos. 
Hemocultura 
É necessário rigor na execução da técnica, uma vez que há possibilidade de 
crescimento de contaminantes da pele (usar clorexidina e álcool na antissepsia). 
 
 
 
 
 
 
Secreção de ferida cutânea ou cirúrgica, abscesso ou fístula 
 A secreção pode ser coletada de duas maneiras: 
1. por aspiração da secreção utilizando seringa e agulha estéreis ou somente a 
seringa. 
2. com swab (menos recomendada) 
SERINGA E AGULHA, DISPOSITIVOS 
À VÁCUO 
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Biópsia 
No caso de ferida ou lesão cutânea, a cultura de pequeno fragmento de tecido 
(biópsia) fornece resultado mais representativo em relação ao swab. 
Utiliza-se o bisturi ou tesoura evitando áreas de tecido necrosado e pus, os quais 
devem ser removidos. 
 
 
 
 
Urocultura 
 A urina na bexiga é estéril, porém, com exceção da coleta suprapúbica, 
todos os métodos propiciam a contaminação da urina com a microbiota uretral. 
A coleta de urina do jato médio é o método 
Mais utilizado, por não ser invasivo e pela relativa confiabilidade, quando 
realizada dentro de técnica adequada. Mas também pode ser feita a coleta por 
meio do cateter vesical. 
 
 
 
 
SERINGA E AGULHA, SWAB 
BISTURI, TESOURA, SWAB 
COLETOR UNIVERSAL, SERINGA, 
CATETER 
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As amostras abaixo não são tão frequentes em provas, mas vale a pena dar uma 
lida... 
 
Líquidos orgânicos estéreis 
São exemplos o líquido Pleural, Sinovial, bile e outros... Deve-se fazer 
antissepsia da pele (solução alcoólica de clorexidina ou PVP-I) e realizar a 
aspiração do material com seringa e agulha estéril. 
 
 
 
Líquor 
A punção lombar deve ser feita sob condições estritas de assepsia. 
Ah, e lembrando...Tanto Neisserias como Haemophilus não resistem às 
temperaturas baixas, daí porque o líquor para cultura não deve ficar em 
geladeira. 
 
 
 
 
Escarro 
Evitar coletar saliva ou material de vias aéreas superiores. Coletar pela 
manhã com o paciente em jejum, após higiene oral (escovar os dentes sem o uso 
de pasta dental e fazer gargarejos). O escarro deve ser coletado após tosse 
SERINGA E AGULHA 
SERINGA E AGULHA 
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profunda e depositado diretamente em frasco esterilizado de boca larga com 
tampa rosqueada 
Secreção de Orofaringe (swab) 
Usado para pesquisa de Streptococcus pyogenes. 
Secreção de Ouvido ou ocular 
swab 
Fezes (swab, evacuação espontânea) 
Devem ser coletadas no início ou fase aguda da doença, quando os 
patógenos estão usualmente presentes em maior número. Preferir as porções 
mucóides e sanguinolentas do material. 
 
Conservação 
O método de conservação dependerá do microrganismo pesquisado, do tipo 
de amostra e da técnica utilizada. Podendo ser químico (ex: formalina para fezes) 
ou refrigeração. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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3.1 Resumo de formas de coleta 
 
EXAME FORMA DE COLETA 
Secreção de 
ferida cutânea 
ou cirúrgica, 
abscesso ou 
fístula 
 
Fragmento de 
tecido (pele, 
tecido 
subcutâneo) 
 
Urocultura 
 
 
 
Hemocultura, 
Líquidos 
orgânicos 
estéreis, Líquor 
 
 
 
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VAMOS EXERCITAR??? 
Pessoal, encerramos nossa aula demonstrativa. Espero que tenham 
gostado e que permaneçamperseverantes nos estudos até o dia 5 de Fevereiro. 
Vamos juntos, em busca de conseguir o êxito nessa luta! 
QUESTÕES COMENTADAS 
Obs: Os trechos incorretos estão destacados em negrito. 
 
1) IDECAN Farmacêutico - Bioquímico - Pref. Simonésia/MG 2016 
Sobre a técnica de coloração de Gram, assinale a alternativa correta. 
A) Os micro-organismos são expostos a uma coloração a quente com 
carbolfucsina concentrada por 5 minutos. 
B) Bactérias Gram-negativas não perdem o corante violeta durante a 
descoloração e, por isso, adquirem coloração rosa. 
C) Bactérias Gram-positivas retêm o corante violeta por resistirem à 
descoloração e ficam coradas em azul escuro / roxo. 
D) Bactérias Gram-positivas perdem o corante violeta durante a 
descoloração e adquirem a coloração azul escuro / roxo. 
 
COMENTÁRIO: A Alternativa A descreve uma técnica nada semelhante à de 
Gram, já a B erra ao dizer que G- não perde o corante, perde sim e por isso 
ficam rosa após corada com o contra corante (ao final). Por último, a 
alternativa D afirma erroneamente que as G+ perdem o corante violeta 
(errado). Letra C sem sombra de dúvidas. 
 
2) COVEST - Biomédico UFPE - 2015 
Um estagiário do laboratório de Microbiologia Clínica recebeu uma lâmina 
contendo esfregaço de Escherichia coli e uma lâmina contendo esfregaço de 
Staphylococcus aureus para serem coradas pela coloração de Gram (cristal 
violeta, lugol, álcool, fucsina diluída). Após fixar os esfregaços pelo calor, o 
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estagiário realizou a coloração, porém inverteu a ordem da utilização dos 
corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta, lugol). Qual foi o resultado da 
coloração observado ao microscópio para E. coli e S. aureus, respectivamente? 
A) Bacilos vermelho claros e cocos vermelho-escuros. 
B) Bacilos vermelho-claros e bacilos violeta-escuros. 
C) Bacilos e cocos vermelho-claros. 
D) Bacilos e cocos violeta-escuros. 
E) Cocos vermelho-claros e cocos violeta-escuros. 
 
COMENTÁRIO: A inversão nos reagentes, apesar de um erro analítico, em nada 
altera o resultado da coloração. As bactérias permanecem rosa ou vermelho claro 
(E. coli) já que é Gram negativa e Roxo ou vermelho escuros para S. aureus já 
que é Gram positiva, Como elas são respectivamente bacilos e cocos, a assertiva 
A é a correta. 
 
3) COVEST - Biomédico UFPE - 2015 
A técnica de coloração diferencial mais importante em bacteriologia é o método 
de Gram. Este método explora o fato de células com propriedades diferentes 
apresentarem coloração diferente. Assim, as bactérias podem se comportar 
como Gram-positivas ou como Gram-negativas. Nesse contexto, analise as 
afirmativas abaixo. 
1. A camada de peptideoglicano é muito mais espessa nas bactérias Gram-
positivas, e essas bactérias podem possuir uma camada de ácido teicoico. 
2. Os micro-organismos Gram-negativos possuem uma camada externa 
composta de lipopolissacarídeos, lipoproteínas e fosfolipídios. 
3. Apenas os micro-organismos Gram-positivos têm uma membrana 
externa contendo endotoxina (lipopolissacarídeo). 
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4. Os micro-organismos Gram-positivos e os Gram-negativos contêm 
peptideoglicano; contudo, nos primeiros, a parede é única e fina e nos 
segundos a parede é múltipla e espessa. 
Estão corretas, apenas: 
A) 1 e 4. 
B) 1 e 3. 
C) 2 e 3. 
D) 3 e 4. 
E) 1 e 2. 
COMENTÁRIO: Como vimos na aula a Endotoxina está presente nas Gram 
Negativas e não nas Gram Positivas (essas possuem exotoxinas). O item 4 afirma 
que as G+ possuem parede fina e os G- espessa (é o contrário). As alternativas 
1 e 2 estão perfeitas. Gabarito letra E. 
 
4) AOCP - Biomédico - EBSERH/HC-UFG - 2015 Em relação às bactérias, é 
correto afirmar que: 
(A) As bactérias gram-negativas possuem espessa camada que é 
firmemente aderida à carioteca de sua própria célula. 
(B) Certos organismos gram-positivos e gram negativos podem apresentar 
também uma cápsula, ou camada de glicocálice, internamente à parede 
celular. Essa cápsula torna a bactéria vulnerável à fagocitose por monócitos, 
podendo dificultar sua fixação tecidos do hospedeiro. 
(C) Os organismos gram-positivos são assim denominados devido às 
características de coloração próprias da sua finíssima camada externa de 
peptidoglicano, além disso, esses micro-organismos possuem amplo complexo 
de Golgi e mitocôndrias em seu interior. 
(D) As bactérias são classificadas em Gram-positivas ou Gram-negativas em 
função da diferença na arquitetura da parede celular. A parede celular Gram-
positiva consiste de uma camada espessa de peptidoglicano (~30 nm), 
enquanto a parede celular da Gram-negativa apresenta camada mais fina de 
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peptidoglicano (~10nm) e sua estrutura e composição da membrana mais 
complexas. 
(E) Bactérias como as microbactérias têm glicolipídeos múltiplos que lhes 
conferem uma aparência de bolor, acarretando desvantagens biológicas, 
impedindo a infecção ao hospedeiro. 
 COMENTÁRIO: As bactérias G+ e G- se diferenciam justamente pela estrutura 
de envoltórios (membranas). Enquanto a G+ tem apenas a membrana celular e 
a espessa camada de peptideoglicano, a G- tem a camada de peptideoglicano 
mais fina e uma camada externa de LPS. Letra D correta. 
 
5) UFT/COPESE- Biomédico - Pref. Guaraí/TO- 2016 
“A Gram-Bretanha e a Ásia estão enfrentando um surto de escarlatina que 
intriga especialistas. De acordo com a Autoridade de Saúde Pública da 
Inglaterra (PHE, na sigla em inglês), em 2015, foram registrados 17.586 casos 
da infecção no país Î o número só não ultrapassa os registros de 1967, com 
19.305 notificações. A escarlatina é uma infecção bacteriana, causada por 
estreptococos do grupo A, que atinge principalmente crianças" 
Referente às características das bactérias, é CORRETO afirmar que: 
(A) A diferenciação entre as bactérias é realizada exclusivamente pelas 
suas características morfológicas. 
(B) Os aspectos microscópicos, incluindo o tamanho, forma e os arranjos dos 
organismos (cocos, bastonetes, curvos ou espiralados), determinam a 
capacidade das bactérias de resistir a certos antibióticos. 
(C) Coloração de Gram é um teste rápido que permite aos clínicos a 
diferenciação entre as duas mais importantes classes de bactérias. 
(D) As bactérias Gram negativas têm a camada de peptidoglicano espessa 
contendo ácido teicoico e ácidos lipoteicoicos. 
COMENTÁRIO: Alternativa A erra ao incluir a palavra exclusivamente no 
texto; Alternativa B erra ao afirmar que a morfologia determina a capacidade 
de resistência de bactérias à antibióticos, pois pode até ser que influencia, mas 
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determinar não! Muitos outros aspectos são levados em consideração. A 
assertiva D descreve características das bactérias G+, relatando ser G- 
(errado). A letra C é a correta! 
 
6) FAFIPA - Serviço de Biomedicina - Pref. Londrina/PR - 2015 
A coleta de materiais biológicos paraexames de microbiologia deve seguir as 
seguintes recomendações: 
(A) Identificar o material do paciente adequadamente. 
(B) Informar dificuldades que possam ocorrer durante a coleta, como material 
insuficiente para análise adequada. 
(C) Informar sobre o uso de antimicrobianos prévios à coleta do material pelo 
paciente. 
(D) No geral, os procedimentos de coleta seguem protocolos específicos que 
facilitam o cultivo dos micro-organismos suspeitos, de acordo com o sítio 
a ser investigado. 
(E) Todas estão corretas. 
 COMENTÁRIO: Todas estão corretas, é uma questão boa para revisar. Letra 
E. 
 
7) FAFIPA - Serviço de Biomedicina - Pref. Londrina/PR - 2015 
Sobre o método de Ziehl-Nielsen para bacterioscopia direta, pode-se afirmar 
que: 
(A) Esta metodologia categoriza as bactérias em álcool-ácido-resistentes e 
não álcool-ácido resistentes. 
(B) O corante empregado é o Albert-Layborn, capaz de penetrar no interior 
do Mycobacterium tuberculosis. 
(C) É sempre utilizada em associação com o método de impregnação 
em prata. 
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(D) Deve ser confirmado por microscopia de campo escuro ou pelo 
método de tinta nanquim. 
(E) Utiliza um corante que pode se tornar fluorescente na 
microscopia óptica. 
 COMENTÁRIO: A alternativa B erra o corante (o correto é fucsina). A 
alternativa A é a correta e as demais são descabidas, conforme conteúdo 
exposto em aula. 
 
8) Biomédico - Pref. Natal/RN 2016 
A respeito da coloração bacteriana de Gram: 
A) As bactérias que possuem a camada de lipídios associados a 
Polissacarídeos não são coradas pela coloração de Gram. 
B) Escherichia coli e Staphylococcus aureus são bactérias Gram-negativas. 
C) Bactérias Gram negativas são aquelas que apresentam uma camada 
lipídica não corada pelo corante devido à afinidade entre a 
pigmentação e a camada de fosfolipídeos. 
D) As bactérias Gram-positivas têm parede celular espessa e única de 
peptidoglicanos, que, ao contato com a coloração de Gram, adquire cor 
púrpura ou azul. 
 COMENTÁRIO: Letra D descreve corretamente a camada de bactérias Gram 
positivas. A letra A menciona as cápsulas bacterianas, que podem estar 
presentes tanto em G+ como em G-. Apesar das cápsulas não se corarem bem 
pelo método Gram a Bactéria em si se cora sim, diferente do que está descrito 
na assertiva! 
Aproveito essa questão para citar a função das cápsulas (adesão, invasão, 
reserva de água). 
 
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 Alguns alunos preferem resolver as questões sem comentários e só 
depois conferir!!! 
 
LISTA DE QUESTÕES SEM COMENTÁRIOS 
 
1) IDECAN Farmacêutico - Bioquímico - Pref. Simonésia/MG 2016 
Sobre a técnica de coloração de Gram, assinale a alternativa correta. 
A) Os micro-organismos são expostos a uma coloração a quente com 
carbolfucsina concentrada por 5 minutos. 
B) Bactérias Gram-negativas não perdem o corante violeta durante a 
descoloração e, por isso, adquirem coloração rosa. 
C) Bactérias Gram-positivas retêm o corante violeta por resistirem à 
descoloração e ficam coradas em azul escuro / roxo. 
D) Bactérias Gram-positivas perdem o corante violeta durante a descoloração 
e adquirem a coloração azul escuro / roxo. 
 
 
2) COVEST - Biomédico UFPE - 2015 
Um estagiário do laboratório de Microbiologia Clínica recebeu uma lâmina 
contendo esfregaço de Escherichia coli e uma lâmina contendo esfregaço de 
Staphylococcus aureus para serem coradas pela coloração de Gram (cristal 
violeta, lugol, álcool, fucsina diluída). Após fixar os esfregaços pelo calor, o 
estagiário realizou a coloração, porém inverteu a ordem da utilização dos 
corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta, lugol). Qual foi o resultado da 
coloração observado ao microscópio para E. coli e S. aureus, respectivamente? 
A) Bacilos vermelho claros e cocos vermelho-escuros. 
B) Bacilos vermelho-claros e bacilos violeta-escuros. 
C) Bacilos e cocos vermelho-claros. 
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D) Bacilos e cocos violeta-escuros. 
E) Cocos vermelho-claros e cocos violeta-escuros. 
 
3) COVEST - Biomédico UFPE - 2015 
A técnica de coloração diferencial mais importante em bacteriologia é o método 
de Gram. Este método explora o fato de células com propriedades diferentes 
apresentarem coloração diferente. Assim, as bactérias podem se comportar 
como Gram-positivas ou como Gram-negativas. Nesse contexto, analise as 
afirmativas abaixo. 
1) A camada de peptideoglicano é muito mais espessa nas bactérias Gram-
positivas, e essas bactérias podem possuir uma camada de ácido teicoico. 
2) Os micro-organismos Gram-negativos possuem uma camada externa 
composta de lipopolissacarídeos, lipoproteínas e fosfolipídios. 
3) Apenas os micro-organismos Gram-positivos têm uma membrana externa 
contendo endotoxina (lipopolissacarídeo). 
4) Os micro-organismos Gram-positivos e os Gram-negativos contêm 
peptideoglicano; contudo, nos primeiros, a parede é única e fina e nos 
segundos a parede é múltipla e espessa. 
Estão corretas, apenas: 
A) 1 e 4. 
B) 1 e 3. 
C) 2 e 3. 
D) 3 e 4. 
E) 1 e 2. 
 
4) AOCP - Biomédico - EBSERH/HC-UFG - 2015 Em relação às bactérias, é 
correto afirmar que: 
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A) As bactérias gram-negativas possuem espessa camada que é firmemente 
aderida à carioteca de sua própria célula. 
B) Certos organismos gram-positivos e gram negativos podem apresentar 
também uma cápsula, ou camada de glicocálice, internamente à parede 
celular. Essa cápsula torna a bactéria vulnerável à fagocitose por 
monócitos, podendo dificultar sua fixação tecidos do hospedeiro. 
C) Os organismos gram-positivos são assim denominados devido às 
características de coloração próprias da sua finíssima camada externa de 
peptidoglicano, além disso, esses micro-organismos possuem amplo 
complexo de Golgi e mitocôndrias em seu interior. 
D) As bactérias são classificadas em Gram-positivas ou Gram-negativas em 
função da diferença na arquitetura da parede celular. A parede celular 
Gram-positiva consiste de uma camada espessa de peptidoglicano (~30 
nm), enquanto a parede celular da Gram-negativa apresenta camada mais 
fina de peptidoglicano (~10nm) e sua estrutura e composição da membrana 
mais complexas. 
E) Bactérias como as microbactérias têm glicolipídeos múltiplos que lhes 
conferem uma aparência de bolor, acarretando desvantagens biológicas, 
impedindo a infecção ao hospedeiro. 
 
5) UFT/COPESE- Biomédico - Pref. Guaraí/TO- 2016 
“A Gram-Bretanha e a Ásia estão enfrentando um surto de escarlatina que 
intriga especialistas. De acordo com a Autoridade de Saúde Pública da 
Inglaterra (PHE, na sigla em inglês), em 2015, foram registrados 17.586 casos 
da infecção no país Î o número só não ultrapassa os registros de 1967, com 
19.305 notificações. A escarlatina é uma infecção bacteriana, causada por 
estreptococos do grupo A, que atinge principalmente crianças"Referente às características das bactérias, é CORRETO afirmar que: 
A) A diferenciação entre as bactérias é realizada exclusivamente pelas suas 
características morfológicas. 
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B) Os aspectos microscópicos, incluindo o tamanho, forma e os arranjos dos 
organismos (cocos, bastonetes, curvos ou espiralados), determinam a 
capacidade das bactérias de resistir a certos antibióticos. 
C) Coloração de Gram é um teste rápido que permite aos clínicos a 
diferenciação entre as duas mais importantes classes de bactérias. 
D) As bactérias Gram negativas têm a camada de peptidoglicano espessa 
contendo ácido teicoico e ácidos lipoteicoicos. 
 
6) FAFIPA - Serviço de Biomedicina - Pref. Londrina/PR - 2015 
A coleta de materiais biológicos para exames de microbiologia deve seguir as 
seguintes recomendações: 
A) Identificar o material do paciente adequadamente. 
B) Informar dificuldades que possam ocorrer durante a coleta, como 
material insuficiente para análise adequada. 
C) Informar sobre o uso de antimicrobianos prévios à coleta do material 
pelo paciente. 
D) No geral, os procedimentos de coleta seguem protocolos específicos que 
facilitam o cultivo dos micro-organismos suspeitos, de acordo com o 
sítio a ser investigado. 
E) Todas estão corretas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
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7) FAFIPA - Serviço de Biomedicina - Pref. Londrina/PR - 2015 
Sobre o método de Ziehl-Nielsen para bacterioscopia direta, pode-se afirmar 
que: 
A) Esta metodologia categoriza as bactérias em álcool-ácido-resistentes e não 
álcool-ácido resistentes. 
B) O corante empregado é o Albert-Layborn, capaz de penetrar no interior do 
Mycobacterium tuberculosis. 
C) É sempre utilizada em associação com o método de impregnação em prata. 
D) Deve ser confirmado por microscopia de campo escuro ou pelo método de 
tinta nanquim. 
E) Utiliza um corante que pode se tornar fluorescente na microscopia óptica. 
 
 
8) Biomédico - Pref. Natal/RN 2016 
A respeito da coloração bacteriana de Gram: 
A) As bactérias que possuem a camada de lipídios associados a 
Polissacarídeos não são coradas pela coloração de Gram. 
B) Escherichia coli e Staphylococcus aureus são bactérias Gram-negativas. 
C) Bactérias Gram negativas são aquelas que apresentam uma camada 
lipídica não corada pelo corante devido à afinidade entre a pigmentação 
e a camada de fosfolipídeos. 
D) As bactérias Gram-positivas têm parede celular espessa e única de 
peptidoglicanos, que, ao contato com a coloração de Gram, adquire cor 
púrpura ou azul. 
 
 
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1. C 
2. A 
3. E 
4. D 
5. C 
6. E 
7. A 
8. D 
 
FORÇA! Espero vocês nas próximas aulas!!! 
Professora Pollyana Lyra. 
 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 
MURRAY, PR. et al. Microbiologia Médica. 5. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 
2006. 992 p. 
LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 
2009