Resumo biocel Teórica/Prática

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Biologia Celular Prática – Resumo Prova
Preparação de Material Biológico para Microscopia de Luz e Eletrônica
Fixação 
É o processo de preservação de células e tecidos, preservando-as de forma a evitar a degradação celular que se inicia após a morte do tecido e a digestão de bactérias decompositoras. A fixação tem a importância de manter a organização estrutural in vivo, ou seja, preservar a amostra do material biológico o mais próximo do seu estado natural possível.
Desidratação 
Tem como objetivo a retirada de água do material biológico, causando o endurecimento deste. Essa etapa é feita através da imersão do fragmento em uma série de álcoois graduados. 
Diafanização
Tem como objetivo a retirada do álcool dos fragmentos (evitando que se torne quebradiço) e torná-lo transparente. Nessa etapa é utilizado o xilol (substância solúvel em álcool e insolúvel em água).
Inclusão 
Consiste em incluir o fragmento em um molde metálico ou plástico líquido, que ao se solidificar, firma um bloco contendo o material biológico. A inclusão geralmente é feita em parafina histológica ou paraplast.
Microtomia
Consiste na obtenção de cortes delgados com espessura fina para a observação ao microscópio. Nessa etapa é utilizado o micrótomo, um aparelho que secciona o bloco com espessura na ordem de micrômetros (para microscopia de luz) ou nanômetros (para microscopia eletrônica).
Coloração/Contrastação
É necessária a aplicação de corantes (para microscopia de luz) e de metais pesados (para microscopia eletrônica). As técnicas de contrastação têm como finalidade acentuar as diferenças de densidade das estruturas sub-celulares.
Coloração Citológica
Esse tipo de coloração envolve a afinidades ácido-base, facilitando a diferenciação de tecidos e da morfologia celular. Os corantes utilizados interagem com os componentes celulares por atração de cargas elétricas. A coloração citológica não revela a composição química do fragmento.
	Estrutura celular/tecidual
	Afinidade por corante
	Acidófila (natureza básica)
	Ácido 
	Basófila (natureza ácida)
	Básico 
Ortocromasia/Metacromasia
Ortocromasia se relaciona com a capacidade do corante em manifestar-se na sua cor original na estrutura corada. Já a metacromasia é a capacidade que a estrutura tem em alterar a cor do corante utilizado, devido à características químicas da amostra.
Prática
Hematoxilina: corante básico (cor arroxeada); Eosina: corante ácido (cor rósea); Cromótropo 2R: corante ácido (cor vermelha); Verde luz: corante ácido (cor esverdeada). 
Técnicas Citoquímicas 
As técnicas citoquímicas permitem a localização de componentes químicos específicos que compõem as células e os tecidos, ou seja, são amplamente usadas para o conhecimento da natureza química de tecidos e células. Esta técnica deve ser específica e sensível. Dependendo da técnica usada e do objetivo do estudo, pode-se submeter os cortes a uma contra-coloração (coloração não-específica, baseada em acidofilia-basofilia), após a realização da técnica citoquímicas para microscopia de luz. Tal procedimento irá evidenciar estruturas celulares que possam ser tomadas como referência para análise do material.
PAS (periodic acid Scchiff)
Essa reação é utilizada para a identificação de carboidratos simples ou associados a proteínas.
Técnica de Feulgen
É utilizada para a identificação do DNA celular.
Prática
Coloração: citoquímica para glicogênio (PAS); Contra-coloração: hematoxilina; Coloração: citoquímica para DNA (Feulgen).
Membrana Plasmática 
A membrana plasmática mantém sua integridade, devido ao alto teor lipídico, segregando e preservando o conteúdo intracelular. Esta, também, apresenta outras funções como a capacidade de receber informações, importar e exportar moléculas, permeabilidade seletiva. Os lipídeos são moléculas anfipáticas, ou seja, tem a cabeça polar e a cauda apolar.
Propriedades
A membrana plasmática possui uma propriedade mecânica, a qual acompanha sempre o crescimento e a mudança de forma da célula, ter sua área aumentada , pode de deformar sem se romper e quando perfurada, é rapidamente selada. Essas capacidades se devem à fluidez da membrana
Como Observar a Membrana Plasmática 
Ao microscópio de transmissão, a membrana se apresenta como uma estrutura trilaminar (uma camada elétron-lúcida central e duas camadas externas elétron-densas). Esse aspecto trilaminar se deve à afinidade das cabeças polares dos lipídeos da membrana pelo composto tetróxido de ósmio, utilizado na preparação do material biológico. Tal composto não se liga as causas apolares dos lipídeos, assim, a membrana parece ser formada por três camadas.
 A estrutura trilaminar, pelo fato de constituir todas as biomembranas, foi denominada de unidade de membrana ou membrana unitária. 
Diferenciações 
As diferenciações da membrana recebem os nomes de desmossomo e zônula de adesão, que são estruturas importantes para manter as células unidas e para comunicação. 
Endocitose
É o processo de internalização de substâncias do meio extracelular para o meio intracelular. Inicialmente, esses materiais (fluidos, partículas, macromoléculas) entram em contato com a superfície 3 depois são englobados pela membrana plasmática, ficando confinados no interior de vesículas delimitadas por membrana que brotam e se separam da membrana, aprofundaram-se no citoplasma. 
Processos
Existem dois tipos de endocitose:
Fagocitose: “comer celular”; internalização de grandes partículas; realizada por macrófagos e neutrófilos; formação de pseudópodes.
Pinocitose: “beber celular”; internalização de fluidos e solutos; invaginação na membrana plasmática; mediado por clatrina.
Destino do Material Internalizado
Após a formação da vesícula endocítica, o material englobado será enviados à sítios específicos, como os lisossomos.
Prática 
Coloração vital: tinta nanquim; Contra-coloração: azul de toluidina (corante básico); Coloração vital: tinta nanquim; Contra-coloração: fucsina. 
Citoesqueleto
Serve de apoio para a membrana plasmática e, no citoplasma, forma “trilhos” para que organelas e outros elementos se movam, este também é importante na divisão celular, na organização e estruturação celular, importância na contração muscular, formação de cílios e flagelos. 
Elementos do Citoesqueleto
Os principais elementos são: filamentos intermediários (proteína fibrosa - Queratina); filamentos de actina (proteína globular – Actina G); microtúbulos (alfa e beta tubulina).
Prática
Coloração: azul de toluidina (corante básico) – fucsina (corante ácido)
Síntese e Secreção de Macromoléculas 
Lipídeos
A síntese de lipídeos ocorre no REL. Fosfolipídeos são intensamente produzidos para renovar membranas desgastadas ou duplicá-las durante a mitose. O transporte dos fosfolipídeos às membranas celulares é feito através de vesículas transportadoras ou proteínas transportadoras especiais. No REL ocorre também a síntese de hormônios esteróides, em conjunto com as mitocôndrias, por isso que as células envolvidas na síntese de esteróides contem riqueza de tais organelas.
As proteínas são sintetizadas nos ribossomos e podem ser lançadas diretamente no citoplasma (quando os ribossomos se encontram livres) ou dentro do RER (quando os ribossomos estão aderidos nesta organela). No complexo de Golgi as proteínas são empacotadas por este em vesículas que brotam da parte trans, podendo ter os seguintes destinos: inserir-se na membrana plasmática; fundir-se à membrana plasmática e liberar seu conteúdo no meio extracelular; formar lisossomos. 
Secreção Celular 
A exocitose é a liberação de produtos sintetizados na célula para o meio extracelular. Ao ser observado no microscópio eletrônico, na maioria das vezes as vesículas são elétron-densas, mas pode ser também elétron-lúcida, dependendo de sua natureza química. 
Prática
Técnica citoquímica: PAS; Contra - coloração: hematoxilina; Técnica citoquímica: alcien blue; Contra – coloração: hematoxilina; Coloração: hematoxilina (corantebásico – cor arroxeada)-floxina (corante ácido – cor avermelhada); Coloração: Ayoama (impregnação pela prata); Contra – coloração: verde luz (corante ácido).
Mitocôndrias 
As mitocôndrias realizam a respiração celular, estão envolvidas na produção de calor e na síntese de hormônios esteróides, em associação com o REL. Além disso, participam da apoptose (morte celular programada).
Morfologia Mitocondrial
As mitocôndrias são alongadas ou arredondadas e cada mitocôndria é envolvida por duas membranas - externa e interna, que definem dois compartimentos: espaço intermembranoso e a matriz mitocondrial.
A membrana mitocondrial interna projeta invaginações para o interior da matriz – as chamadas cristas mitocondriais. Estas aumentam a área de contato da membrana e podem aparecer em vários planos de corte. Na membrana interna ocorre às seguintes reações: fosforilação oxidativa e respiração celular. 
A matriz mitocondrial mostra-se homogênea e finamente granulosa nas micrografias eletrônicas, dado à presença de centenas de enzimas, DNA circular, ribossomos e RNA. Na matriz ocorrem as seguintes reações: descarboxilação oxidativa, ciclo de Krebs e beta oxidação.
Prática
Coloração: técnica de Polak (impregnação metálica); Contra – coloração: eosina.
Núcleo 
O núcleo é uma organela altamente especializada que atua como o centro administrativo da célula e apresenta duas funções principais: armazenar o DNA e coordenar as diferentes atividades celulares. 
Cromatina
A cromatina são moléculas de DNA associadas à proteínas histonas e atuam na compactação do DNA. Existem dois tipos de cromatina: eucromatina (é a cromatina menos condensada e geneticamente ativa – elétron-lúcida) e a heterocromatina (cromatina mais condensada e contém DNA inativo – elétron-densa).
Nucléolo
O nucléolo está localizado dentro do núcleo e têm como função sintetizar ribossomos. 
Envoltório Nuclear
O conteúdo no núcleo encontra-se delimitado pelo envoltório nuclear, que é constituído por duas membranas (uma interna em contato com a cromatina e uma externa que se continua com o RER). O envoltório apresentas os poros nucleares, que controlam a passagem de moléculas entre o núcleo e o citoplasma.
Morfologia Nuclear 
O número e o tamanho dos núcleos são variáveis e pode, estar relacionados com a atividade metabólica celular. Células que apresentam alta taxa de síntese protéica e células muito grandes podem conter mais de um núcleo e/ou núcleos maiores.
Prática
Coloração: hematoxilina (corante básico) – eosina (corante ácido); Coloração: azul de toluidina (corante básico); Coloração: hematoxilina (corante básico – cor arroxeada) – eosina (corante ácido – cor rósea).
A Célula Doente
Alterações Nucleares
A modificado da morfologia nuclear é um dos principais parâmetros para indicar o comprometimento da célula. O núcleo doente pode apresentar variações de tamanho, forma, número e contorno irregular. Dependendo do grau de lesão, pode ocorrer cariorrexe (fragmentação) e cariólise (dissolução).
Alterações Citoplasmáticas 
Aparecimento de granulações ou vacúolos, dilatação e alteração das características de acidofilia/basofilia. A célula pode se romper, assim, seus limites se tornam indistintos. 
Alterações Mitocondriais 
Pode ocorrer dilatação da matriz, rompimento das cristãs e aparecimento de estruturas elétron – densas.
Alterações Citoesqueléticas 
Desorganização de seus elementos e perda de seu arranjo característico.
Diferenças: NECROSE X APOPTOSE
Necrose: ocorre em grupos de células; dissolução nuclear; presença de processo inflamatório; há liberação de enzimas lisossomais para o meio extracelular. .
Apoptose: ocorre em células isoladas; fragmentação nuclear; ausência de processo inflamatório,p; não há liberação de enzimas lisossomais para o meio extracelular.
Prática
Coloração: azul de toluidina (corante básico) – fucsina (corante ácido).