Baixe o app para aproveitar ainda mais
Prévia do material em texto
ENZIMAS Enzimas • Importância Biomédica • Características Gerais • Estrutura Enzimática • Enzimas como Catalisadores • Componentes da Reação Enzimática • Ligação Enzima-Substrato • Propriedades das Enzimas • Cofatores Enzimas Importância Biomédica • Biocatalisadores – regulam as velocidades de todos os processos fisiológicos • Papel fundamental na saúde e na doença Importância Biomédica Princípio Fundamental da Homeostase Saúde Normal Composição do meio interno deve ser mantida dentro de limites relativamente estreitos Centenas de reações enzimáticas Velocidades das reações sejam apropriadas AlteraçõesPerturbações no equilíbrio homeostático estabelece que Importância Biomédica • Fatores que alteram a velocidade de reações enzimáticas: – Concentração das enzimas – Concentração dos substratos – Temperatura – pH – Presença de inibidores • Atividade catalítica de cada enzima depende também de: – Poder catalítico da enzima – Afinidade da enzima pelo substrato – Presença de cofator Importância Biomédica Alterações de temperatura Febre Hipotermia Perturbam a homeotase Alterar velocidade de muitas reações Importância Biomédica Hipotermia Pode ser útil para reduzir a demanda metabólica Durante uma cirurgia cardíaca Transporte de órgãos para transplante Importância Biomédica Toxicologia e Farmacologia Venenos metabólicos Inibir ou abolir reações metabólicas essenciais Inibir a atividade de enzimas Drogas terapeuticamente importantes Competem com o substrato pelo sítio ativo da enzima Estados patológicos Enzimas do ciclo da uréia Lesão tecidual grave Cirrose Hepática Prejudica a síntese de enzimas pelo tecido Amônia (tóxica para o organismo) Uréia (não tóxica) COMA HEPÁTICO Estados patológicos Doenças Genéticas - EIM Incapacidade ou capacidade parcial de sintetizar enzimas Sintomatologia variada Estados patológicos Determinação da atividade de enzimas específicas no plasma proporciona ao clínico informações importantes para o diagnóstico Lesão cardíaca grave Infarto do miocárdio Extravasamento de enzimas intracelulares Enzimas - Histórico • História da Bioquímica começa com pesquisas sobre enzimas • Catálise biológica início séc.XIX – estômago - digestão da carne – saliva - digestão do amido • Década de 50 (±1850) Louis Pasteur concluiu que: açucar álcool pela levedura era catalisada por “fermentos” inseparáveis da estrutura das células vivas do levedo “Fermentos” foram posteriormente denominados de ENZIMAS Enzimas - Histórico • Início do Século XX 75 enzimas isoladas e cristalizadas – ficou evidenciado caráter protéico • Atualmente – + de 2000 enzimas são conhecidas Enzimas ProteínasRibozimas RNAs SimplesConjugadas Holoenzima ApoenzimaCofator + apoenzima Estrutura Enzimática Com exceção de um pequeno grupo de moléculas de RNA que possuem atividade enzimática e são chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas são PROTEÍNAS Enzimas 1 Catalisadores de reações nos sistemas biológicos: Aceleram reações químicas 2 Grande eficiência catalítica 3 Alto grau de especificidade por seus substratos 4 Atuam diminuindo a energia de ativação 5 Funcionam • em soluções aquosas • em pH e temperaturas fisiológicas CATÁLISE : Todas as reações que ocorrem nos organismos vivos são catalisadas por proteínas chamadas enzimas. Na ausência de enzimas as reações seriam extremamente lentas, inviabilizando a vida. Quimotripsina hidrólise de ligações peptídicas Anidrase carbônica CO2 + H2O H2CO3 Enzimas • Energia de ativação – Diferença entre os níveis de energia do estado basal e do estado de transição Representação esquemática das alterações de energia que acompanham a formação do complexo ES, do estado de transição e a subseqüente liberação do produto da reação Enzimas Componentes da Reação Enzimática E + S E S E + P E - Enzima S - Substrato(s) ES - Complexo Enzima -Substrato P – Produto(s) Enzimas Componentes da Reação Enzimática E + S E S P + E Substrato se liga ao SÍTIO ATIVO da enzima Enzimas - Via Metabólica Substrato inicial Enzimas Substratos Complexo ES (Enzima-Substrato) Ligação Sítio Ativo Chave-fechadura Incaixe induzido Liberação do Produto + Enzima inalterada – Não são consumidas na reação – Atuam em pequenas concentrações – Não alteram o equilíbrio das reações Enzimas - Propriedades - Aceleram reações químicas Condições da Reação Energia livre de Ativação kj/mol kcal/mol Velocidade Relativa Sem catalisador Platina Enzima Catalase 75,2 18,0 48,9 11,7 23,0 5,5 1 2,77 x 104 6,51 x 108 Decomposição do H2O2 Enzimas Ligação da Enzima ao Substrato 2 modelos propostos: • Chave-Fechadura • Encaixe Induzido Enzimas Ligação da enzima ao substrato Modelo Chave-Fechadura •Região da molécula enzimática que participa da reação com o substrato •Pode possuir componentes não protéicos • cofatores •Possui aminoácidos auxiliares e de contato Centro Catalítico / Sítio Ativo Influência do pH do meio sobre a atividade enzimática • Mantidas fixas as condições de -temperatura -concentração de substrato -concentração de enzima pH ótimo pH DESNATURAÇÃO DE PROTEÍNAS PERDA DE SUA ESTRUTURA ORIGINAL EM GERAL LEVA À PERDA DA FUNÇÃO PROTEICA SITUAÇÕES QUE CONDUZEM À DESNATURAÇÃO: •AQUECIMENTO •VALORES EXTREMOS DE pH •SOLVENTES ORGÂNICOS POLARES •DETERGENTES E SABÕES Influência do pH do meio sobre a atividade enzimática a) fosfatase ácida resíduo de aa envolvido na catálise aspartato - pH ótimo 4,5 b) fosfatase alcalina resíduo de aa envolvido na catálise lisina - pH ótimo 9,5 pH ótimo varia para diferentes enzimas Influência do pH do meio sobre a atividade enzimática Em cada caso o ótimo representa o estado iônico ideal para a ligação de enzima e substrato e o estado iônico correto para os aminoácidos envolvidos no evento catalítico Influência do pH do meio sobre a atividade enzimática FOSFATASES Fosfatase alcalina (pH ótimo ~9,5) Presente em vários tecidos Fígado - na concentração na doença hepática obstrutiva Osso - papel provável na deposição de fosfato de cálcio na concentração em distúrbios ósseos Invasão do osso por câncer de um tumor primário - metástase fisiológico durante a adolescência - crescimento ósseo RO-PO3 -2 + H2O RO-H + HO- PO3 -2 Fosfatase ácida (pH ótimo ~4,5) Enzima lisossômica Carcinoma metastásico de próstata libera quantidades desta enzima no sangue Influência da temperatura do meio sobre a atividade enzimática •Mantidas fixas as condições de -pH ótimo -concentração de substrato -concentração de enzima Ativação térmica Desnaturação térmica Temperatura ótima Influência da concentração da enzima sobre a atividade enzimática •Mantidas fixas as condições de - temperatura ótima - pH ótimo - [substrato] em excesso [E] Influência da concentração de substrato sobre a atividade enzimática •Mantidas fixas as condições de - temperatura ótima - pH ótimo - [enzima] [S] Influência da concentração de substrato sobre a atividade enzimática Em baixas concentrações de substrato a velocidade de reação é de primeiraordem – isto é, é proporcional a concentração de substrato Em altas concentrações de substrato, a velocidade da reação é de ordem zero – isto é, é constante e independente da concentração de substrato [S] Atividade Enzimática • Depende também: – presença e concentração do cofator – poder catalítico da enzima • capacidade da enzima de transformar o substrato ligado ao complexo ES em produto por unidade de tempo ES E + P – afinidade da enzima pelo substrato (Km) • maior ou menor capacidade da enzima de se ligar ao substrato E + S ES afinidade da enzima pelo substrato (Km) Enzimas - Cofatores Porção protéica APOENZIMA Cofator HOLOENZIMA Íon Coenzima Grupamento prostético Moléculas orgânicas ou inorgânicas que condicionam a atividade das enzimas Enzimas - Cofatores Íons •Cofatores inorgânicos Exemplos: Magnésio - Reações de fosforilação Manganês- Superóxido dismutase mitocondrial Zinco - Anidrase carbônica, Carboxipeptidase Enzimas - Cofatores Mg +2 como Ativador Hexoquinase - transferência do fosfato do ATP para a glicose Enzimas - Cofatores Coenzimas • Cofatores orgânicos • Maioria deriva devitaminas hidrossolúveis • Classificam-se em: – transportadoras de hidrogênio – transportadoras de grupos químicos Coenzimas transportadoras de hidrogênio Coenzima Abreviatura Reação catalisada Origem Nicotinamida adenina dinucleotídio NAD+ Oxi-redução Niacina ou Vitamina B3 Nicotinamida adenina dinucleotídio fosfato NADP+ Oxi-redução Niacina ou Vitamina B3 Flavina adenina dinucleotídio FAD Oxi-redução Riboflavina ou Vitamina B2 Coenzimas transportadoras de grupos químicos Coenzima Abrev. Reação catalisada Origem Coenzima A CoA-SH Transferência de grupo acil Pantotenato ou Vitamina B5 Biotina Transferência de CO2 Biotina ou Vitamina H Piridoxal fosfato PyF Transferência de grupo amino Piridoxina ou Vitamina B6 Metilcobalamina Transferência de unidades de carbono Cobalamina ou Vitamina B12 Tetrahidrofolato THF Transferência de unidades de carbono Ácido fólico Tiamina pirofosfato TPP Transferência de grupo aldeído Tiamina ou Vitamina B1 Enzimas Alostéricas Sitio acessível para inibidor equilíbrio Sitio acessível para ativador ATIVADOR Tensa Relaxada Rompe o equilíbrio em favor da forma R Modelo para ligação cooperativa de efetor positivo - ATIVADOR: Sitio inacessível para ativador equilíbrio Sitio acessível para ativador ATIVADOR Tensa Relaxada Rompe o equilíbrio em favor da forma R Modelo para ligação cooperativa de efetor negativo - INIBIDOR: Sitio inacessível para inibidor Sitio acessível para inibidor INIBIDOR Relaxada Tensa equilíbrio Rompe o equilíbrio em favor da forma T Enzimas • Inibição enzimática • Regulação enzimática • Ampliação enzimática • Uso de enzimas em diagnóstico – Isoenzimas Inibição Enzimática Quanto ao tipo: competitiva não-competitiva incompetitiva inibidor a atividade de uma única enzima ou de um grupo restrito de enzimas irreversível reversível inibidor a atividade de todas as enzimas ex: agentes desnaturantes inespecífica - específica - Inibição Enzimática –Inibição Enzimática Irreversível • inibidor se combina com um grupo funcional (sítio ativo) da enzima • inibidor se liga à enzima formando um complexo ESTÁVEL • forma-se uma ligação COVALENTE entre o inibidor e a enzima Inibição Enzimática Irreversível Ex: Inibição da enzima ciclo-oxigenase pelo acetilsalicilato Ciclo-oxigenase Prostaglandinas Processos fisiológicos, ex. sensação de dor Ácido araquidônico Inibição Enzimática – Inibição Enzimática Reversível • inibidor forma com a enzima um complexo INSTÁVEL • inibição NÃO envolve modificação COVALENTE • Tipos de inibidores reversíveis • competitivos • não competitivos Inibição Competitiva Intoxicação por Metanol Metanol Álcool desidrogenase Causa lesão tecidual cegueria Infusão EV Etanol URINA Formaldeído Inibição Competitiva Terapias com drogas Conceitos de inibição enzimática Drogas projetadas para inibirem uma enzima específica ANTIMETABÓLITOS Antivirais, antibacterianos, antitumorais Inibição Competitiva Exemplo:Tratamento de hipercolesterolemia Enzimas e a Clínica Médica Além do papel central das enzimas na bioquímica, a atividade das enzimas no sangue fornece informações importantes para o diagnóstico de doenças. O perfil da atividade de enzimas no soro está relacionado à processos patológicos. Enzimas e a Clínica Médica As enzimas podem ser classificadas em dois grupos Plasma-específicas secretadas ativamente no plasma por certos órgãos, tendo papel funcional no plasma Não-plasma específicas produzidas pelas células durante o metabolismo celular normal. São enzimas intracelulares, sem função fisiológica no plasma. Liberação de enzimas a partir de células normais e de células doentes ou expostas a um trauma TGO - Transaminase glutâmico oxalacética TGP - Transaminase glutâmico pirúvica Presentes nas células do fígado, coração, músculo esquelético, rim e pâncreas. Outras enzimas importantes em diagnóstico Transaminases DOENÇA HEPÁTICA INFARTO AGUDO DO MIOCÁRDIO TGO eleva-se após 12 horas, atingindo seu pico após 24-36 horas. Outras enzimas importantes em diagnóstico Fosfatases DISTÚRBIOS ÓSSEOS DOENÇA HEPÁTICA OBSTRUTIVA Fosfatase Alcalina Presente em muitos tecidos, principalmente no fígado e nos ossos. O aumento fisiológico é observado na GRAVIDEZ e na INFÂNCIA. Outras enzimas importantes em diagnóstico Transferases GAMA GLUTAMIL TRANSPEPTIDASE Presente no fígado. INDICADOR DE DOENÇA HEPÁTICA ALCOOLISMO Outras enzimas importantes em diagnóstico Amilase Produzida pelo pâncreas e pelas glândulas salivares. PANCREATITE CAXUMBA
Compartilhar