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ETEC “PREF. ALBERTO FERES” QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO MÉTODO BIURETO Índice FUNDAMENTOS TEÓRICOS: Albumina: Sintetizada pelo fígado, a albumina é a proteína mais abundante do corpo humano, podendo ser encontrada em grande quantidade no sangue (sero albumina). Outras fontes de albumina incluem o leite (lactoalbumina) e os ovos (ovoalbumina). A albumina é uma proteína de alto valor biológico, ou seja, ela contém os nove aminoácidos essenciais (leucina, lisina, isoleucina, metionina, fenilalanina, treonina, valina, triptofano e histidina) necessários para a reconstrução muscular depois de treinos intensos. Essencial para o funcionamento do organismo, a albumina desempenha uma série de funções no metabolismo. Dentre as principais temos o transporte de nutrientes pela corrente sanguínea (entre eles cálcio, bilirrubina e magnésio), a manutenção de um equilíbrio osmótico adequado (equilíbrio de água entre os tecidos e o sangue) e o combate a radicais livres. A albumina também se liga a compostos tóxicos e metais pesados, reduzindo seus potenciais riscos à saúde e facilitando sua eliminação pelo sistema excretor. Para quem pratica musculação, a principal função da albumina se dá pelo seu papel no fornecimento e transporte de aminoácidos para o tecido muscular. Ou seja, não somente é a albumina uma fonte de aminoácidos, como também é um excelente transportador destes e outros nutrientes para os músculos e tendões. Proteína: A proteína é uma macromolécula composta basicamente por cadeias lineares de aminoácidos. Existem as proteínas simples, compostas apenas por aminoácidos e seus derivados. E também as proteínas conjugadas (heteroproteínas), que são formadas por cadeias polipeptídicas e grupo prostético (componentes de natureza não-proteica). Funções das proteínas: Elas desempenham um papel muito importante em nosso organismo, pois fornecem material tanto para a construção como para a manutenção de todos os nossos órgãos e tecidos. As proteínas podem ser de origem vegetal ou animal. Como já foi citado anteriormente, as proteínas são de extrema importância para o nosso organismo por sua função construtora e reparadora. Elas também participam da formação de hormônios, enzimas e anticorpos. Quando ingerimos proteínas, elas são quebradas durante o processo de digestão, e posteriormente, absorvidas pelas nossas células, que novamente as quebram, transformando-as em aminoácidos. Estes aminoácidos serão utilizados pelo nosso corpo onde eles forem mais necessários. Biureto: O reagente de biureto é um reagente analítico feito de hidróxido de potássio (KOH) e sulfato de cobre (II) (CuSO4), junto com tartarato de sódio e potássio (KNaC4H4O6·4H2O). Este reagente de coloração azul torna-se violeta na presença de proteínas (mais especificamente, o reagente de biureto torna-se violeta ao reagir com íons cúpricos), e muda para rosa quando combinado com polipeptídeos de cadeia curta. A intensidade da coloração violeta varia de acordo com a concentração de proteínas na amostra analisada. O hidróxido de potássio não participa na reação, mas meramente provê um meio alcalino no qual a reação ocorre. Curva padrão: Utilizada para determinar quantitativamente uma propriedade de uma amostra desconhecida a partir de amostras com propriedades conhecidas. Neste tutorial, iremos determinar a concentração de proteínas em uma amostra a partir de um método colorimétrico, o ensaio de Bradford. OBJETIVO: Quantificar a proteína na clara de ovo (albumina)pelo método doe biureto e determinar a curva padrão da mesma. MATÉRIAIS E METÓDOS VIDRARIAS: Tudo de ensaio Pipeta de 1 ml Pipeta de 2 ml Pipeta de 5 ml Balão volumétrico de 1L EQUIPAMENTOS: Balança analítica REAGENTES: Solução de albumina 1mg/mL Solução de biureto (sulfato cúprico pentahidratado 1 g/L, tartarato de sódio de potássio 4 g/L, hidróxido de sódio 10 g/L) Solução de Clara de Ovo PROCEDIMENTO: Pipetou-se em cinco tubos de ensaio, como descrito na tabela abaixo, agitando-os a cada adição de reagentes: Tubos Reagentes Branco 1 2 3 4 Amostra 1 Amostra 2 H2O (D) 2 1 1 0,5 0 1,5 Albunina - 1 1 1,5 2 - - Biureto 5 5 5 5 5 5 5 Sol. Clara de Ovo - - - - - 0,5 0,5 Logo após, deixou os tubos no banho-maria à temperatura de 30-32 °C por 10 min Mediu-se a absorbância no espectrofotômetro RESULTADO E DISCUSSÃO Tubos Concentração Absorbância 1 0,007 0,044 2 0,014 0,074 3 0,021 0,092 4 0,028 0,117 Maior concentração, maior será absorbância Amostras Absorbância Concentração 1 0,014 - 0,002 2 0,027 0,001 CONCLUSÃO: Conclui-se que houve erros de analise, portanto obtivemos um resultado negativo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: https://pt.wikipedia.org/wiki/Reagente_de_biureto http://www.mundoboaforma.com.br/albumina-o-que-e-para-que-serve-beneficios-e-efeitos-colaterais/#xFlpa1lgr11c7Ojg.99 http://www.mundoboaforma.com.br/albumina-o-que-e-para-que-serve-beneficios-e-efeitos-colaterais/#xFlpa1lgr11c7Ojg.99
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