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Extração dos Flavonóides: Métodos: Maceração, percolação e decocção. Solventes: Geralmente usa-se solventes com polaridade crescente: 1° extração: solvente apolar → óleos, gorduras, esteróis e pigmentos. 2° extração: com solvente um pouco mais polar (clorofórmio, acetato de etila) → agliconas livres pouco polares ( flavonas, flavonóis, flavanonas, diidroflavonóis, isoflavonas, etc). 3° extração: com solventes polares (água, acetona, metanol) → agliconas Poli-hidroxiladas, favonas, e flavanóis mais polares (auronas e chalconas), 4° extração: solventes polares ( água quente) → heterosídeos mais polares. Em meio ácido pode-se extrair antrocianidinas. Análises qualitativas: Utiliza-se a propriedade química de formação de sais (fenolatos) Reação com hidróxidos alcalinos Reação com cloreto de alumínio Reação shinoda (reação da cianidina) 3.1 - composto flavonoídico + HCL conc. em presença de alguns fragmentos de Mg = cor rósea e vermelha. Análises quantitativas: Fotocolorimetria: é um método biofísico de análise de substâncias largamente utilizado em laboratórios de análises clínicas e em laboratórios de pesquisa, tendo como principal objetivo a determinação da concentração de soluções. Baseia-se na relação existente entre a absorção de radiações eletromagnéticas e a concentração da substância em questão. Espectrofotometria: mede as intensidades das radiações emitidas ou absorvidas pelos sistemas em análise. é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma solução que contém uma quantidade conhecida da mesma substância. Cromatografia: tem por finalidade geral a identificação de substâncias e a separação-purificação de misturas. Acontece pela passagem de uma mistura através de duas fases: uma móvel e uma estacionária. A grande variabilidade de combinações entre a fase móvel e estacionária faz com que a cromatografia tenha uma série de técnicas diferenciadas. Ensaios histoquímicos- feitos direto na droga : - Luz ultravioleta - Reação com cloreto férrico - Reação com ác. Nitroso: para proantocianidinas incolores em culturas de célula fenólicos na parede celular) *Reação de cianidina, de Shinoda ou hidrogenação: consiste em adicionar à solução alcoólica ácida (adição de HCl) da substancia um pequeno fragmento de magnésio. Essa reação baseia-se no fato de que os derivados flavônicos de cor amarela reduzem-se, adquirindo coloração avermelhada ou, no caso dos antociânicos, azulada. Esse ensaio produz reação negativa para chalconas e isoflavonas. Na presença de clorofila, é indicado levar o extrato a secura e lavá-lo com clorofórmio, para eliminação da clorofila, antes da adição do HCl e do magnésio em pó.
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