COLORAÇÃO DE GRAM

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RESUMO DE MICROBIOLOGIA
Estruturas da Bactéria, no geral:
Há milhares de bactérias no mundo, e elas se dividem em Gram + e Gram –
Saber dessas classificações facilita o tratamento das doenças causadas por bactérias (alguns antibióticos, como Amoxicilina, são de amplo espectro – funcionam para os dois grupos – mas podem não ser 100% eficazes).
Ao serem coradas pela técnica de coloração de Gram: A Gram – apresenta coloração vermelha e a Gram + apresenta coloração roxa. Isso ocorre devido às diferenças na espessura da Parede Celular.
Coloração de Gram
Na coloração de Gram, o primeiro passo é Pegar a alça e esteriliza-la no bico de Bunsen na posição vertical, mantendo-a ali até que fique vermelha (é necessário manter as ações dentro da zona de proteção). Deve-se, então, abrir a placa perto do fogo, encostar a alça em uma parte da placa sem bactéria até seu resfriamento. O próximo passo é raspar a bactéria e espalhar o conteúdo na lamina (que deve ser secada na chama e colocada no suporte). É pingado corante cristal-violeta o suficiente para cobrir a amostra (1 minuto). A lâmina é virada para escorrer, e o excesso é tirado com água destilada. Coloca-se o lugol (1 minuto). A lâmina e virada para escorrer e coloca-se água destilada para tirar o excesso. No próximo passo é adicionado álcool cetona (que é um descorante) até sair transparente. Pingar frucsina/safranina (30 segundos) e virar lamina para escorrer, tirando mais uma vez o excesso com água destilada. Após secar, colocar no microscópio.
Explicação Bioquímica: A adição de corante cristal-violeta com lugol cria um complexo no interior da célula, o que ocorre em ambas as bactérias. Entretanto, ao adicionar o descorante (etanol), apenas as Gram + farão retenção do corante, isso porque elas possuem uma camada de peptideoglicano mais espessa: uma parte da camada lipídica da Gram + acaba se ressecando, o que fecha os poros tornando impossível a saída do corante. As Gram – vão ter o cristal-violeta eliminado ao aplicar descorante, que também destrói a camada lipídica. A fucsina se fixa nas Gram -, e não se fixa nas Gram + porque seus poros já estão fechados.