Aula TSA Microbiologia e Imunologia

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TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE 
AOS ANTIMICROBIANOS – TSA 
OU ANTIBIOGRAMA 
Prof. Alan Brito
TESTES DE SUSCEPTIBILIDADE AOS 
ANTIMICROBIANOS – TSA OU 
ANTIBIOGRAMA 
PROF. DRA. FABÍOLA KEGELE 
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIMICROBIANOS
Histórico
1929 Penicilina Alexandre Fleming;
1929 até hoje ~ 250 antimicrobianos comercializados
Surgimento da resistências aos antimicrobianos
Mecanismo de Ação dos Antimicrobianos
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIMICROBIANOS
Essência da quimioterapia antimicrobiana Toxicidade seletiva;
Antibióticos Interferem com diferentes atividades da célula bacteriana;
Ação dos agentes antimicrobianos Morte da célula bacteriana ou inibição do seu
crescimento;
Morte da célula bacteriana Agentes bactericidas;
Inibição do crescimento bacteriano Agentes bacteriostáticos;
Tanto os agentes bactericidas quanto os agentes bacteriostáticos são extremamente
eficientes;
Em se tratando de pacientes com imunodeficiências Preferência pelos bactericidas.
Mecanismo de Ação dos Antimicrobianos
MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIMICROBIANOS
Principais mecanismos de ação dos antimicrobianos
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Mecanismo de Ação dos Antimicrobianos
Características gerais
 Sinônimos  TSA ou antibiograma;
 Notável importância clínica e terapêutica;
 Realizados para detecção de resistência de bactérias isoladas de
amostras clínicas representativas de processo infeccioso, nos quais
a sensibilidade aos antimicrobianos não é previsível;
 Resultados  Influenciados por diferentes fatores havendo a
necessidade de padronizações extremamente rígidas;
 Principais métodos  Disco-difusão, microdiluição em caldo,
macrodiluição em caldo, difusão em ágar e E-test;
Características gerais
 Parâmetros a serem observados na realização dos testes de
susceptibilidade aos antimicrobianos:
 pH do meio de cultura Entre 7,2 e 7,4;
 Concentração de cátions Principalmente cálcio e magnésio;
 Padronização do inóculo  Equivalente à escala 0,5MF (MacFarland
 1,5x108 UFC/mL );
 Espessura do meio de cultura;
 Temperatura de incubação;
 Atmosfera de incubação;
 Meio padrão Müeller-Hinton.
 Parâmetros a serem observados na realização dos testes de 
suscept ibilidade aos ant imicrobianos: 
 pH do meio de cultura Ent re 7,2 e 7,4; 
 Concentração de cát ions Principalmente cálcio e magnésio; 
 Padronização do inóculo Equivalente à escala 0,5MF; 
 Espessura do meio de cultura; 
 Temperatura de incubação; 
 Atmosfera de incubação; 
 Meio padrão Müeller-Hinton. 
Característ icas Gerais 
Características gerais
 Parâmetros a serem observados na realização dos testes de
susceptibilidade aos antimicrobianos:
 Parâmetros a serem observados na realização dos testes de 
suscept ibilidade aos ant imicrobianos: 
20mL de meio 4mm de espessura 
Meio de Müeller-Hinton 
Ant ibiót ico 
Halo de inibição 
Característ icas Gerais 
Características gerais
 Seleção dos antimicrobianos:
 O laboratório tem a responsabilidade de testar e reportar os
antimicrobianos mais apropriados para o microrganismo isolado e o
sítio de infecção;
 Os antimicrobianos testados e reportados pelo laboratório devem
ser adequados para o tipo de hospital ou instituição;
 As orientações sobre os antimicrobianos mais adequados para
cada grupo de microrganismos são publicadas e atualizadas
anualmente nos Manuais de Interpretação, como CLSI ou EUCAST
Características gerais
 Controle de qualidade:
 Monitorar a precisão e acurácia dos procedimentos aplicados
nos testes, verificar a qualidade dos materiais empregados e o
desempenho do técnico que conduz o teste e finaliza o exame;
 Cepas-padrões (ATCC – American Type Culture Collection)
Característ icas Gerais 
 Controle de qualidade 
 Monitorar a precisão e acurácia dos procedimentos aplicados 
nos testes, verificar a qualidade dos materiais empregados e o 
desempenho do técnico que conduz o teste e finaliza o exame; 
 Cepas-padrões (ATCC – American Type Culture Collect ion) 
- Escher ichia coli ATCC 25922 - Haemophilus influenzae ATCC 49766 
- Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 - Enterococcus faeca lis ATCC 51299 
- Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 - Escher ichia coli ATCC 35218 
- Staphylococcus aureus ATCC 25293 - Haemophilus influenzae ATCC 49247 
- Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - Enterococcus faeca lis ATCC 29212 
Procedimento Laboratorial
1) Método de Disco Difusão ou Método de Kirby-Bauer
Método qualitativo
Procedimento Laboratorial 
1) Método de Disco Difusão ou Método de Kirby-Bauer 
 Método qualitat ivo 
Cultura pura 
Escala 0,5MF 
Com auxílio 
de swab 
Aplicação 
dos discos 
Crescimento 
confluente 
Incubação 
Leitura e 
interpretação / CLSI 
ou EUCAST 
Procedimento Laboratorial
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração
Inibitória Mínima – CIM)
Macrodiluição em caldo
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quant itat ivos (Determinação da Concentração Inibitória 
M ínima – CIM) 
 Macrodiluição em caldo 
16,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 C 8,0 
Ant imicrobiano 
+ Suspensão bacteriana 
Incubação ideal e interpretação dos resultados 
Procedimento Laboratorial
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração
Inibitória Mínima – CIM)
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quant itat ivos (Determinação da Concentração Inibitória 
M ínima – CIM) 
16,0 4,0 2,0 1,0 0,5 0,25 C 8,0 
Ant imicrobiano 
Crescimento bacteriano 
Ausência de crescimento 
Interpretação dos resultados 
- “Break-point” Entre os tubos 4 e 5 
(concentrações de 2,0 e 1,0); 
- CMI 2,0mg/ dL 
Procedimento Laboratorial
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração
Inibitória Mínima – CIM)
Microdiluição em caldo
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quant itat ivos (Determinação da Concentração Inibitória 
M ínima – CIM) 
 Microdiluição em caldo 
Cultura pura 
Escala 0,5MF 
Leitura e interpretação / 
CLSI ou EUCAST 
Diluição 1/ 10 
Com auxílio de 
um inoculador 
Procedimento Laboratorial
2) Métodos quantitativos (Determinação da Concentração
Inibitória Mínima – CIM)
 Teste Epsilométrico ou E-Test ou Teste E
Procedimento Laboratorial 
2) Métodos quant itat ivos (Determinação da Concentração Inibitória 
M ínima – CIM) 
 Teste Epsilomét rico ou E-Test ou Teste E 
Cultura pura 
Escala 0,5MF 
Com auxílio 
de swab 
Aplicação 
das fitas 
Crescimento 
confluente 
Incubação 
Leitura e interpretação / 
CLSI ou EUCAST 
Interpretação e relato dos resultados
1- Sensível  em geral significa que a infecção devida ao
microrganismo estudado pode ser adequadamente tratada com a
dosagem habitual do antimicrobiano testado e recomendado para este
tipo de infecção.
2- Intermediário  significa que o microrganismo pode ser inibido
por concentrações atingíveis de certas drogas se doses maiores
puderem ser administradas ou se a infecção ocorre em local onde o
antimicrobiano é fisiologicamente concetrado (trato urinário, por ex.)
3- Resistente  quando o isolado não é inibido pela concetração do
antimicrobiano obtida no local da infecção ou quando o microrganismo
patogênico apresenta mecanismos específicos de resistência.