INSTRUMENTOS DA GENÉTICA MOLECULAR HUMANA

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DISCIPLINA DE GENÉTICA
PROF: SERGIO BRINGEL
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São cópias geneticamente idênticas, obtidas de um indivíduo inicial. Quando por exemplo, cultivam-se bactérias num meios de cultura, todos os descen-dentes provêm de um único organismo, por repro-dução assexuada, e constituem clones. O mesmo se dá com os lêvedos cultivados em laboratório.
Todos os organismos que têm reprodução assexua-da como, as hidras e as esponjas, formam clones. As plantas, por brotamentos de seus rizomas, tubér-culos, bulbos e folhas originam clones.
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Essa técnica, ainda proibida pela Lei de Biossegu-rança. Poderia permitir o tratamento de vários tipos de doenças, por fornecer células-tronco com grande capacidade de diferenciação.
O problema na utilização de células-tronco, quando elas não provêm do próprio paciente, é o risco de induzirem a formação de anticorpos, levando à sua rejeição.
O esquema a seguir mostra que está prática poderia levar à obtenção de células tronco geneticamente idênticas às do paciente, portanto sem risco de rejeição.
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Em um óvulo que foi anucleado, seria enxertado um núcleo de célula do paciente já diferenciada, formando-se assim um zigoto(1), que poderia ser cultivado até a fase de blastocisto.
Poderíamos então retirar, da massa celular interna, celula-tronco (2) que, em meio de cultura, se dife-renciariam até o resultado desejado, sendo em se-guida utilizada no paciente (3).
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Clivagem do DNA pela enzima de restrição EcoRI.
A enzima cliva as três sequências de reconhecimento GAATTC em B, produzindo dois fragmentos menores.
Em A, a sequência do meio é GAATTT em vez de GAATTC, de modo que não pode ser clivada pela enzima. O resultado é um filamento único mais longo.
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Construção de uma biblio-teca de cDNA num plasmí-dio vetor.
O RNA de determinada fonte tecidual é copiada num DNA pela enzima transcriptase reversa.
Após síntese do segundo filamento complementar, o cDNA duplo filamento é clonado
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►Endonuclease de restrição(enzima de restrição):
 enzima que reconhecem sequência de DNA de duplo filamento específico e dividem o DNA no ou próximo ao sítio de reconhecimento.
►hibridização – o ato de duas moléculas de ácido nucléico de filamentos único complementares for-marem ligações e se tornarem uma molécula de filamento duplo.
►hospedeiro – o organismo usado para isolar e pro-pagar uma molécula de DNA recombinante. Em geral, uma cepa da bactéria.
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Inserção – fragmento de DNA humano clonado num determinado vetor.
Ligação – o ato de formar ligações de fosfodiéster para unir duas moléculas de DNA de duplo filamen-to por intermédio de uma enzima DNA-ligase, etapa essencial na criação de moléculas de DNA recom-binante.
Sonda – uma molécula de DNA ou RNA clonada, marcada com radioatividade ou marcador detectá-vel, usada para identificar suas sequências comple-mentares por hibridização molecular.
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Biblioteca – coleção de clones recombinantes de uma fonte que sabidamente contém o gene, cDNA, ou outras sequências de DNA desejadas. Teóri-camente, uma biblioteca pode conter todas as sequências de DNA representadas na célula, tecido ou cromossomo original.
Clone – molécula de DNA recombinante que contém um gene ou outra sequência de DNA desejada. Também, o ato de gerar esta molécula.
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Os dois filamentos complementares de uma dupla hélice de Watson-Crick podem ser “desnaturados” por diversos trata-mento para fornecer uma coleção de moléculas de DNA de filamento único. Sob condições que favorecem a formação de DNA de duplo filamentos complementares ‘hibridizam-se” en-ter si, mas não com outro fragmento de DNA que tenha uma sequência de nucleotídeos diferentes.
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