2° aula prática Morfologia e Gram

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Disciplina: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS 
Prof. Pércia Graczyk
Morfologia das bactérias
As características que os microrganismos apresentam ao crescer em meios de culturas são expressões fenotípicas do material genético e, portanto, são muito úteis na sua identificação. 
Materiais necessários
-Placa de Petri contendo colônias bacterianas.
-Contador de colônias.
-Régua 
Procedimentos 
Observar as características das colônias quanto ao número, tamanho (mm), morfologia (forma, bordo ou margem e elevação); pigmentação (cor, solubilidade, fluorescência); aspecto (brilho, transparência, opacidade).
1- Anotar os resultados
Coloração de Gram para Bactérias
Materiais necessários
- Placa de Petri contendo meio de cultura ágar nutriente inoculadas com as bactérias 
- Lâmina para microscopia;
- alça de platina;
- tubo contendo solução salina esterilizada;
- bateria de coloração de Gram (cristal violeta, lugol, álcool acetona, fucsina ou safranina);
- microscópio, óleo de imersão, papel absorvente;
- suporte para lâminas para coloração.
Procedimentos 
a) Esfregaço:
- flambar rapidamente uma lâmina de microscopia limpa, nos dois lados, “cortando” lentamente a chama do bico de Bunsen;
- identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço;
- flambar a alça de platina até o rubor, e a seguir, deixá-la esfriar, conservando-a todavia perto da chama;
- Preparar uma lâmina, depositando no centro da mesma uma gotícula de água de suspensão bacteriana;
- tocar a colônia bacteriana isolada, com o auxílio da alça de platina, e transferir para a lâmina anteriormente preparada. 
- espalhar o material com movimentos de rotação da alça de platina, para se obter um esfregaço de forma oval, bem fino e uniforme, secar naturalmente.
 Esfregaço
b) Fixação: 
- fixar o esfregaço, “cortando” lentamente a chama por 3 vezes, a fim de que o material fique bem aderente à lâmina. A fixação é sempre feita do lado contrário ao esfregaço bacteriano.
c) Técnica: 
- cobrir com cristal violeta e deixar agir por 1 minuto; 
- lavar com água corrente;
- cobrir com solução de lugol por 1 minuto;
- lavar com água corrente; 
- cobrir com álcool acetona e lavar com água corrente imediatamente;
- corar com fucsina ou safranina por 30 segundos;
- lavar com água corrente;
- Por fim, utilizar o bico de Bunsen para secar a lâmina. 
 Lâmina secando no Bico de Bunsen.
d) Resultados
Gram (+) coloração azul característica.
Gram (-) coloração vermelha característica.