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Cromatografia: Princípios e Classificações

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Cromatografia
Definição
• Técnica de separação de componentes de uma 
amostra através de migração diferencial dos 
componentes das amostras entre as fases 
móvel e estacionária.
• Quando combinada a técnicas de análise 
química pode ser qualitativa e quantitativa.
• Ampla faixa de aplicação:
H2 até macromoléculas.
Princípios básicos
• A separação dos compostos depende da 
interação entre as substâncias da mistura 
com: 
– Fase Estacionária: sólido ou líquido
– Fase Móvel: líquido ou gás
• As forças que influenciam:
– Eletrostáticas, solubilidade, intermoleculares...
Classificação
• De diferentes maneiras
Classificação: modo de separação
• Adsorção(L-S): atrações intermoleculares 
dipolares. 
• Troca iônica
Classificação: modo de separação
• Partição (L-L): solubilidade da substância entre 
dois líquidos.
• Exclusão molecular
Classificação: forma física 
• Planar: CP (cromatografia em papel) ou CCD 
(cromatografia em camada delgada). 
Cromatograma:
CCD
• Técnica simples.
• Separação dos componentes por migração 
diferencial sobre uma camada adsorvente .
• Fase estacionária sólida (sílica, alúmina) e fase 
móvel líquida (solvente ou mistura de 
solventes).
• Aplicações: micotoxinas, carotenóides, 
corantes...
• Vantagens:
– Fácil execução, rapidez, versatilidade (analítica ou 
preparativa), reprodutibilidade e baixo custo.
CCD
• Conceitos relevantes:
– Polaridade placa e 
solvente
– Técnica de aplicação das 
amostras
– Revelação da placa (se 
necessário)
– Cálculo do Rf (Fator de 
retenção)
CCD
• Técnica
CCD
• Solventes:
Classificação: forma física 
• Coluna: CL (cromatografia líquida), CLAE 
(cromatografia líquida de alta eficiência), CG 
(cromatografia gasosa). 
CL
• Fase estacionária: sólido 
empacotado em uma coluna de 
vidro ou aço.
• Fase estacionária: solvente ou 
mistura deles.
• Separação por adsorção. 
Interações do tipo: pontes de 
hidrogênio, forças eletrostáticas 
(Van der Waals: HCl), 
transferência de cargas.
CLAE
• Otimização da coluna clássica, uso de pressão, 
separação mais rápida e eficiente.
• Diferentes amostras. Aplicação em amostras 
não voláteis e termolábeis.
• Vantagens (em comparação à coluna clássica):
– Maior resolução, sensibilidade, reprodutibilidade 
e rapidez.
– Automação.
CLAE
• Equipamento:
Partes: Bomba / Injetor / Coluna / Detector (UV / Fluorescência / Processador
CLAE
• Desvantagens
– Custos de implantação e operação, treinamento 
constante, detectores, custo dos solventes (grau 
CLAE - 99% de pureza, Água – R$ 50,00 / L).
• Aplicações:
– Vitaminas, Lipídios, Aminoácidos / Proteínas, 
Pesticidas, Antioxidantes, Drogas (antidoping), 
Fármacos, Bactericidas, Surfactantes, Ácidos 
Graxos
CLAE
• Fase móvel:
– Filtrada (2 a 5 m) e desgaseificada (retirada de O2
por ultrassom, vácuo ou refluxo).
– Possibilidade de gradiente de eluição. Separação 
não isocrática.
– Sempre sob alta pressão
• Fase estacionária – Coluna analítica:
– Características: inerte, diâmetro interno uniforme, 
e resistência (pressão e ataque da fase móvel).
CLAE
• Detectores
– Componente mais caro do equipamento.
– Características: alta sensibilidade, baixo ruído, 
linearidade, estabilidade, repetibilidade.
– Tipos: espectrofotométricos (absorção no UV/vis –
mais usado; IV – baixa sensibilidade; fluorescência 
– alta sensibilidade).
• Registrador
– Tempo de retenção.
CLAE
• Separação
CLAE
• Cromatogramas típicos
CROMATOGRAMA
• RESOLUÇÃO
A sobreposição de 
picos não é 
adequada.
Para evitar deve-se 
alterar os 
parâmetros de 
análise, 
CROMATOGRAMA
• Exemplo de separação
CROMATOGRAMA
• PADRÃO 
Para identificação de compostos
CROMATOGRAMA
• QUANTIFICAÇÃO
Área do 
triangulo
CG
• Uma das técnicas mais utilizadas.
• Fase móvel é um gás (inerte) e a fase estacionária 
é pode ser um líquido ou um sólido.
• Vantagens: 
– alta resolução, FM com menor resistência ao fluxo = 
colunas maiores (maior separação), alta sensibilidade.
• Desvantagens: 
– somente compostos voláteis ou volatilizáveis, preparo 
da amostra (maior tempo), problemas de 
identificação da amostra. 
CG
• Separação ocorre principalmente por 
adsorção / participação.
• Processo pode ser isotérmico ou com 
gradiente de temperatura.
CG
• Gás de arraste: inerte, compatível com o 
detector, disponível.
• Injeção da amostra: manual ou automatizado.
CG
• Coluna: principal componente, dois tipos –
empacotada ou capilar. 
• Sangramento da coluna: em altas 
temperaturas a FM pode arrastar parte da FE, 
diminuindo o tempo de vida da coluna
– Empacotada: comprimento de até 3 m, diâmetro 
de 1 a 4 mm.
– Capilar: até 100 m de comprimento e diâmetro de 
0,25 a 0,75 mm.
CG
• Detectores: rapidez, alta sensibilidade, baixo 
ruído, ampla faixa de resposta, seletividade 
(detectores universais e seletivos), não-
destrutivos.
Detector de ionização e chama:
Usado em compostos que queime
formando um composto com carga elétrica. 
Sensível, ampla faixa linear, porém
destrutivo.

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